王宏
- 作品数：9 被引量：26H指数：3
- 供职机构：同济大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划上海市科学技术发展基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学文化科学医药卫生更多>>
- 小鼠bcl10基因敲除载体的构建被引量：2
- 2004年
- 根据已知的cDNA序列设计引物 ,通过RT PCR获得小鼠bcl10基因cDNA片段作为探针 ,用噬斑原位杂交法克隆 12 9品系小鼠的bcl10基因组DNA ,在亚克隆完成序列结构分析的基础上 ,利用常规分子克隆技术 ,构建完成了针对bcl10基因的替代型基因敲除载体。两条同源臂分别为bcl10基因exon3上游 2 .4kb和exon4下游 4 .5kb的基因片段。构建完成替代型小鼠bcl10基因敲除载体 ,为后续获得bcl10基因缺陷型胚胎干细胞系奠定了实验基础。
- 王宏奚涛沈子龙吴国祥成国祥
- 关键词：小鼠基因敲除打靶载体亚克隆
- Knockout血清替代品可提高C57BL/6J小鼠胚胎干细胞建系效率被引量：9
- 2007年
- 目的:在培养液中添加knockout血清替代品(knockout serum replacement,KSR)代替胎牛血清(FBS)用于建立C57BL/6J小鼠胚胎干细胞(ESC)细胞系,以便消除血清中的不确定因子对ESC增殖的影响。方法:以C57BL/6J小鼠3.5 d的囊胚为材料分离ESC,比较KSR和FBS用于建立小鼠ESC细胞系的效率,并通过体内、外分化验证所分离获得的小鼠ESC的发育潜能。结果:培养液中添加KSR,成功从13个小鼠囊胚中分离获得一个ESC细胞系(MES-1),体外培养传代超过20代仍保持未分化状态,核型为正常XX型,碱性磷酸酶及oct-4基因高表达,悬浮培养可以生成拟胚体,接种到裸鼠皮下可形成畸胎瘤,注射到ICR小鼠3.5 d囊胚中,ESC可以参与胚胎发育并产生嵌合体小鼠。而培养液中添加FBS的对照组未能获得超过3代的ESC细胞系。结论:在培养液中添加KSR代替FBS适合于C57BL/6J小鼠ESC的分离与培养,从而可避免实验前对所用血清的筛选。
- 王宏田海滨陈娟沙红英陈建泉成国祥
- 关键词：C57BL/6J小鼠胚胎干细胞
- 研究生专业课程融入思政元素的探索与实践——以“现代生物学进展”为例被引量：2
- 2022年
- 国无德不兴,人无德不立。在新时代背景下,从“大思政”格局出发的研究生课程思政建设日益受到重视。该文以同济大学生命科学与技术学院开设的研究生专业基础课“现代生物学进展”为例,在分析思政元素融入课程教学必要性的基础上,明确了思政元素融入课程建设的目标,从思政元素融入教学大纲与课件、课程思政教学案例设计、思政元素融入考核评价等方面总结了开展课程思政的探索与实践。采用问卷调查的方式,分析了学生对“现代生物学进展”课程思政的认知、态度和需求,为进一步推进研究生课程思政建设、提升课程思政教学效果提供了素材。
- 李珊王宏黄佳莹王红兵
- 条件性基因打靶技术研究进展被引量：6
- 2001年
- 以胚胎干细胞技术和同源重组技术为基础的基因打靶技术 (genetargetingtechnology)在先后经历了以自身作为选择标记的同源重组 ,采用正负选择系统的同源重组 ,和进行靶位精细操作的同源重组等 3个阶段后 ,很快发展成为一种日臻成熟的基因操作技术 ,广泛应用于发育生物学、基因功能研究、医学病理模型的建立、基因治疗方法学的研究以及转基因动植物和生物反应器的制备等多个领域。尤其位点特异性重组酶体系如Cre loxp体系在基因靶位操作技术中的应用 ,使得对基因修饰进行精确的时空调控成为可能。
- 王宏沈子龙奚涛成国祥
- 关键词：胚胎干细胞
- 重组人瑞替普酶基因在山羊胎儿成纤维细胞β-酪蛋白基因座的定点整合被引量：1
- 2005年
- 目的 :利用体细胞基因打靶技术来获得定点整合有重组人瑞替普酶 (rPA)的山羊胎儿成纤维细胞株。方法 :构建了针对山羊 β- 酪蛋白基因座的定点打靶载体 ,其上游同源臂为 β 酪蛋白启动子端同时包含其信号肽编码区长约 6 .1kb的基因组片段 ,下游同源臂为 3.3kb从 β- 酪蛋白外显子 6至外显子 9的基因组片段。rPA小基因起始密码子位于 β- 酪蛋白信号肽编码区下游。将载体瞬时转染C12 7小鼠乳腺癌细胞 ,并通过激素进行诱导 ,酶联免疫吸附分析 (ELISA)检测细胞培养上清中的rPA表达量来验证载体表达功能。将载体通过电穿孔的方法转染同基因型的山羊胎儿成纤维细胞。利用G4 18和GANC进行药物筛选 ,并通过PCR和southern杂交的方法进行基因组DNA检测。结果 :获得了一株定点整合的细胞克隆 ,绝对基因打靶效率为 2× 10 7。结论 :本实验结果为后续利用核移植技术制备乳腺生物反应器提供了坚实的实验基础。
- 王宏沈子龙奚涛李治国刘红如赵周英吴国祥成国祥
- 关键词：体细胞基因打靶胎儿成纤维细胞乳腺生物反应器
- 溶栓药物瑞替普酶转基因动物乳腺生物反应器的研制
- 人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)类药物作为临床有效治疗血液栓塞疾病的特效药物有着巨大的市场前景.由Boehr inger Mannheim公司开发的瑞替普酶(r-PA),由于体内半衰期较长、使用方便等优点成为该类药物中...
- 王宏
- 关键词：基因打靶核移植乳腺表达人组织型纤溶酶原激活剂
- 文献传递
- 利用PCR筛选噬菌体文库人免疫球蛋白重链Cγ基因的一种新方法被引量：1
- 2009年
- 扩增噬菌体人基因组文库以形成多个亚文库并富集稀有目的克隆。利用人免疫球蛋白Cγ基因启动子、编码区设计的多对探针引物,PCR筛选已扩增的亚文库,获得共阳性亚文库;利用多条同位素标记的探针筛选上述共阳性亚文库,经相应探针引物PCR鉴定,获得共阳性多克隆噬菌斑;2000倍稀释共阳性多克隆噬菌斑稀释液,PCR筛选出阳性单克隆噬菌斑。基因转换到pBSK(+)载体测序,筛到长12 kb的人免疫球蛋白重链Cγ基因,含有启动子、编码外显子、穿膜外显子及polyA序列。与传统的单条探针筛库相比,新策略利用多条探针一次同位素标记,就筛到完整的稀有Cγ基因;利用PCR在亚文库、多克隆噬菌斑稀释液、单克隆噬菌斑稀释液三个层面上筛选,逐步缩减的筛选范围是一次同位素标记筛到完整稀有基因的前提。新策略不仅提高一倍工作效率,降低几倍的耗材,同时为需要长片段基因的功能基因组领域提供筛选捷径。
- 孙剑华王宏王宏成国祥
- 关键词：PCR同位素
- Bcl10基因敲除小鼠的研究
- 基因敲除技术(gene knockout technology)是在同源重组技术基础上发展起来的一种转基因动物制备技术,已经成为后基因组时代基因功能研究中不可缺少的研究方法.本着建立一套完整的基因敲除和ES细胞操作技术这...
- 王宏
- 关键词：基因敲除胚胎干细胞基因组文库
- 文献传递
- “双一流”背景下研究生拔尖创新人才培养模式的探索与实践被引量：5
- 2022年
- 培养拔尖创新人才是"双一流"建设的重要任务之一,研究生教育则是实现建设"双一流"战略目标的关键抓手。同济大学生命科学与技术学院以培养适应新时代的高层次生命科学拔尖创新人才为使命,践行研究生教育工作的"双结合"。本文在明晰我院研究生拔尖创新人才培养目标、归纳人才培养总体思路的基础上,从人才培养机制、人才培养管理体系、实践教育和创新能力培养、营造协同育人环境等方面对拔尖创新人才培养过程中采取的主要措施进行总结,以期进一步提升拔尖创新人才培养质量。
- 李珊黄佳莹王宏王红兵
- 关键词：拔尖创新人才
