杨漾
- 作品数：7 被引量：13H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 逆转录病毒介导的小鼠MLL-AF9白血病模型的建立被引量：5
- 2013年
- 本研究旨在建立逆转录病毒介导的小鼠MLL-AF9白血病模型,为深入研究MLL白血病的发病机制和治疗策略奠定基础。采用免疫磁珠分选法分离CD45.2小鼠骨髓c-Kit+细胞,用携带MSCV-MLL-AF9载体的逆转录病毒感染c-Kit+细胞,体外培养后经尾静脉注射入致死剂量照射的CD45.1受体小鼠体内,用PCR、流式细胞术、形态学等方法鉴定成模情况。结果表明,MLL-AF9逆转录病毒可以成功感染c-Kit+细胞,感染后细胞克隆形成能力强,细胞呈髓系原始幼稚形态,高表达Gr-1、Mac-1等髓系标志,MLL相关基因Hoxa9、Meis1表达升高。移植MLLAF9细胞后的受体小鼠,于6至12周出现白血病样体征,外周血涂片、骨髓细胞甩片、肝脏和脾脏组织切片均显示有大量白血病细胞浸润,骨髓和脾脏细胞中CD45.2群细胞高表达Gr-1、Mac-1等髓系标志,小鼠在12周内死亡。结论:成功建立逆转录病毒介导的小鼠MLL-AF9白血病模型,可应用于后续实验研究。
- 许思苗杨漾周密赵雪娇秦宇张沛凌原瑞凤周剑峰方勇
- 关键词：逆转录病毒急性髓系白血病小鼠模型
- 人CD123稳定表达细胞株的建立与鉴定
- 2011年
- 目的探索建立人CD123稳定表达细胞株的方法,为进一步实现人CD123的抗体规模化生产提供材料。方法构建人CD123 CDS区真核表达载体(hCD123 CDS-pEGFP-N1);经脂质体包裹转染中国仓鼠卵巢细胞CHO-S;经流式分选结合G418筛选,并用流式细胞术和Western印迹法检测人CD123蛋白的表达情况,初步筛选出人CD123高表达的CHO-S细胞株;并进一步用经人CD123 Fc重组融合蛋白免疫的小鼠血清检测该细胞株hCD123表达情况。结果测序及GenBank中序列比较结果显示扩增到的人CD123基因序列是正确的,酶切结果表明表达质粒构建正确;流式分选结合G418筛选得到1个人CD123高表达的细胞株——克隆8G9 CHO-S,其CD123-APC阳性细胞百分数为92.07%,用融合蛋白免疫的血清检测各细胞株人CD123表达情况,结果显示克隆8G9 CHO-S细胞和对照CHO-S细胞的CD123阳性率分别为(97.94±1.93)%和(2.84±1.35)%,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论建立了人CD123抗原稳定高表达的细胞株克隆8G9 CHO-S,为进一步实现人CD123的抗体规模化生产及其导向治疗奠定了坚实的基础。
- 杨漾黄亮王娜周剑峰
- 关键词：细胞筛选
- 97例强直性脊柱炎临床分析被引量：4
- 2011年
- 目的:探讨AS患者的临床特点,提高AS诊断水平。方法:对97例确诊为AS的住院患者的临床表现、影像学资料、实验室指标等进行分析。结果:58%(56/97)的患者首发症状为中轴关节不适,61%(59/97)的患者病程发展过程中出现周围关节炎;94%(91/97)的患者HLA-B27阳性,RF阴性率达88%(78/89),抗O阴性率为72%(31/43),抗核抗体(ANA)阴性率为90%(77/86),抗环瓜氨酸肽抗体阴性率为98%(40/41),93%(90/97)患者ESR升高,94%(91/97)患者CRP升高;病程1年以上患者骶髂关节CT病变Ⅱ级及以上者比例明显高于病程不到1年者。结论:AS患者早期以中轴关节受累的临床表现多见,HLA-B27对AS的诊断具有重要意义,骶髂关节病变的程度和病程长短有关,应提高对AS的认识,以早期诊断和治疗。
- 于飞胡绍先刘志芬余毅恺雷小妹郑海燕杨漾吴颖
- 关键词：强直性脊柱炎人类白细胞抗原B27类风湿因子红细胞沉降率
- 73例慢性髓系白血病患者中IKAROS6表达研究被引量：1
- 2011年
- 本研究旨在探讨慢性髓系白血病(CML)患者IKARO S6表达情况及其临床意义。采用PCR扩增产物克隆测序法检测73例CML患者中IKARO S6表达情况,了解IKARO S6阳性患者的临床特征。结果表明,在8例健康对照标本中未检测到IKARO S6表达,在15例CML慢性期和加速期标本中也均未检测到IKARO S6表达,42例急淋变的CML标本中15例(35.71%)表达IKARO S6,16例发生急髓变的CML标本中均未检测到IKARO S6表达;在42例急淋变的CML标本中:IKARO S6表达阳性的患者完全缓解(CR)率为40%(6/15例),显著低于IKARO S6表达阴性组(85.19%,23/27例)(p<0.01);IKARO S6表达阳性的患者缓解后15个月内(2-18个月)复发率66.7%(4/6例),显著高于IKARO S6表达阴性组(21.74%,5/23例)(p<0.05)。结论:IKARO S基因异常表达可见于CML进展为急性淋巴细胞白血病的患者,并以IKARO S6异构体为主。IKARO S基因异常表达可能是CML急变为ALL的一个重要因素和独立的预后指标。
- 肖敏吴颖杨漾商臻洪振亚王迪周剑峰李春蕊
- 关键词：慢性髓系白血病急性淋巴细胞白血病
- 急性白血病患者造血干细胞P-选择素表达的研究
- 2011年
- 目的研究急性白血病（AL）患者骨髓白血病干细胞表面分子P-选择素（CD62P）的表达情况及其临床意义。方法采用流式细胞术（FCM）检测56例初治AL患者骨髓CD62P的表达情况，以15例健康成年人骨髓标本为对照。结果38例急性髓系白血病（AML）患者干细胞（CD45^＋CD34^＋CD38^-）中CD62P平均表达水平为（6．72±7．64）％，12例急性B淋巴细胞自血病（B—ALL）患者干细胞（CD45^＋CD34^＋4CD19^＋）为（3．46±2．51）％，6例急性T淋巴细胞白血病（T—ALL）患者干细胞（CD45^＋CD34^＋CD7^＋）为（6．23±4．95）％，均明显高于健康对照组[（1．04±1．23）％]（t值分别为2．847、3．284、3．091，P〈0．01）。经过正规方案治疗后，完全缓解组患者CD62P表达与健康对照差异无统计学意义（6=0．397，P〉0．05）。另外CD62P^＋的AML及T-ALL患者白细胞计数、血红蛋白及血小板计数均明显高于CD62P^-患者（t值分别为4．153、8．095、8．289、7．235、8．692、9．832，P〈0．05）；而CD62P^＋与CD62P^-的B—ALL患者无明显差异（t值分别为0．340、1．142、0．019，P〉0．05）。结论CD62P是血小板活化的标志物之一，在不同类型的AL中有不同程度的表达。AL骨髓造血干细胞中CD62P可能作为白血病造血干细胞的标志，以及临床疗效观察预后判断的指标之一。
- 肖敏吴颖杨漾王迪耿哲周剑峰李春蕊
- 关键词：P-选择素骨髓祖代细胞流式细胞术
- 低浓度丰加霉素对人白血病K562细胞集落形成抑制作用的机制研究
- 2010年
- 目的初步探讨低浓度丰加霉素对人白血病K562细胞集落形成抑制作用的机制。方法甲基纤维素集落形成实验检测低浓度丰加霉素对人白血病K562细胞集落形成能力的影响；CCK-8法检测低浓度丰加霉素对K562细胞的生长抑制率；AnnexinV／PI双染流式细胞仪检测低浓度丰加霉素作用下的K562细胞凋亡率；PI单染流式细胞仪检测药物作用后细胞的周期分布改变；Western免疫印迹和实时定量PCR检测周期相关分子表达水平变化。结果低浓度丰加霉素对人白血病K562细胞具有较强的集落形成抑制作用；可明显抑制K562细胞的生长，呈时间一剂量依赖性；尽管短时间（48h）的药物处理仅出现轻度的细胞凋亡和周期阻滞，但10nmol/L和30nmol/L的丰加霉素长时间（7d）作用后，K562细胞G0／G1期比例分别是（62．3±1．7）％和（76．9±0．7）％，与对照组（38．9±1．1）％相比差异具有高度统计学意义（P〈0．01）；低浓度丰加霉素长时间作用后诱导K562细胞周期相关分子P16蛋白水平和转录水平的高表达。结论丰加霉素在低浓度，长时间作用于人白血病K562细胞后，具有较强的集落形成抑制和生长抑制作用，此作用可能与诱导细胞周期相关分子p16高表达，导致细胞G0／G1期阻滞有关。
- 杨漾肖敏许思苗龚泉姜立军周剑峰
- 关键词：K562细胞集落形成P16蛋白
- RNA干扰技术沉默Smad4基因表达对ECV304细胞增殖和迁移的影响被引量：3
- 2008年
- 目的:探讨利用RNA干扰技术下调Smad 4基因表达对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移能力的影响,初步了解Smad 4在血管生成中的作用。方法:设计并合成靶向人Smad4基因的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)片段siRNA1和siRNA2,脂质体介导转染入人脐静脉内皮细胞株ECV304。应用实时定量RT-PCR和Western印迹法检测转染前后Smad4基因表达水平;应用细胞周期分析和羧乙基锗倍半氧化物(6-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester,CFSE)-流式细胞仪检测ECV304细胞转染前后细胞增殖能力的变化;通过单层细胞划痕实验观察细胞转染前后迁移能力的变化。结果:从2条siRNA中成功筛选出1条siRNA,于RNA和蛋白水平可明显下调Smad4基因的表达;ECV304细胞转染Smad4的siRNA后,细胞的增殖和迁移能力明显增强。结论:利用RNA干扰技术能够筛选出高效的特异阻断Smad4基因表达的siRNA;Smad4基因表达下调能够明显促进血管内皮细胞的增殖和迁移。
- 曹阳黄晓园马全富杨漾庄亮马丁周剑峰
- 关键词：RNA干扰细胞增殖基因表达基因SMAD4细胞ECV304
