曲朋
- 作品数：11 被引量：13H指数：2
- 供职机构：中国海洋大学更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家高技术研究发展计划国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程生物学更多>>
- 奥尔森帕金虫环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立及应用被引量：2
- 2012年
- 奥尔森帕金虫是重要的贝类病原性寄生虫之一,为建立快速、灵敏、准确和使用简便的检测方法,实验根据奥尔森帕金虫5.8S rDNA中的内转录间隔区(internal transcribedspacer,ITS)序列,建立了环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,并对反应温度、反应体系中Mg2+浓度和反应时间进行了优化。该方法的检测灵敏度约为30拷贝质粒DNA,并且特异性较强,与海水帕金虫、包纳米虫、波豆虫及急性病毒性坏死病毒(acute viral necrosis virus,AVNV)等病原均无交叉反应。使用LAMP法对两批菲律宾蛤仔样品进行检测,结果表明,LAMP检测与传统PCR检测相比,灵敏度更高,检测结果更准确。实验所建立的奥尔森帕金虫LAMP检测方法简单、快速、灵敏且特异性强,可以在沿海贝类养殖厂及条件简陋的实验室使用。
- 曲朋王崇明任伟成梁彦韬贾志磊黄倢潘鲁青
- 关键词：内转录间隔区环介导等温扩增贝类
- 一种大黄鱼新型非日粮蛋白源替代鱼粉的配合饲料及其投饲方法
- 本发明提供了一种大黄鱼新型非日粮蛋白源替代鱼粉的配合饲料及其投饲方法，属于大黄鱼饲养技术领域。本发明提供的大黄鱼新型非日粮蛋白源替代鱼粉的配合饲料的投饲方法，是用所述大黄鱼新型非日粮蛋白源替代鱼粉的配合饲料与全鱼粉饲料交...
- 张文兵曲朋皇甫迎旭李昕昕刘大印汪芯宇吴阳麦康森
- 栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒巢式PCR检测方法的建立和应用
- 李晨曲朋王崇明黄倢
- 奥尔森帕金虫环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立和应用
- 为便于沿海贝类养殖厂及条件简陋的实验室等无设备的地区进行奥尔森帕金虫(Perkinsus olseni,P.olseni)的检测,本文根据已测定的P.olseni 5.8S rDNA中的内转录间隔区(internal t...
- 曲朋王崇明任伟成贾志磊潘鲁青
- 关键词：内转录间隔区环介导等温扩增贝类
- 文献传递
- 扇贝养殖海区中小型浮游生物携带AVNV的荧光定量检测被引量：1
- 2011年
- 为了解中小型浮游生物与扇贝急性病毒性坏死症（AVND）的流行传播关系,于2009年对青岛流清河与荣成桑沟湾2个不同扇贝养殖海区的浮游生物进行了采样调查,利用荧光定量PCR（Fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR）技术对所采集样品携带急性病毒性坏死病毒（AVNV）的情况进行了定量检测。结果表明,2个扇贝养殖海区的浮游生物样品均检测到AVNV,而且不同粒径的浮游生物携带AVNV载量有差异（P〈0.05）：小于200目粒径的浮游生物携带AVNV载量最大,达到9.45×106 copy/mg（DNA）;60~200目粒径的浮游生物次之,大于60目粒径的浮游生物携带量最少,仅为5.81×104 copy/mg（DNA）。在上述2个扇贝养殖海区,均在8月份检测到浮游生物携带AVNV。该结果与栉孔扇贝夏季大规模死亡在时间上是吻合的。结论认为,中小型浮游生物可以携带AVNV,并有可能在扇贝急性病毒性坏死症的流行和传播中起到传播媒介的作用。
- 蔡玉勇任伟成曲朋贾志磊王崇明李赟
- 关键词：栉孔扇贝浮游生物
- 急性病毒性坏死病毒dUTPase基因的克隆、表达及其产物的酶学活性分析被引量：5
- 2011年
- 根据已测定完成的栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒(acute viral necrosis virus,AVNV)基因组序列,设计特异性引物,以提取的发病扇贝组织总DNA为模板,PCR扩增得到编码AVNV dUTPase的开放阅读框ORF074,将产物克隆至原核表达载体pET32a(+)中,构建表达质粒pET32a-dut。然后,将其转化至E.coli BL21(DE3)进行诱导表达。SDS-PAGE检测显示,诱导表达蛋白分子量约为46 ku,与预期表达蛋白大小一致。经Western-blotting及质谱分析鉴定,所表达蛋白即为重组dUTPase。表达产物经Co2+柱纯化后进行酶学活性测定。结果显示,重组dUTPase能特异性催化dUTP,EDTA可以抑制dUTPase的活性,而Mg2+可以增强其活性。
- 贾志磊王崇明任伟成梁彦韬曲朋李赟
- 关键词：栉孔扇贝原核表达酶学活性
- 栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒巢式PCR检测方法的建立被引量：3
- 2013年
- 为更好地实现对养殖海区栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒(acute viral necrosis virus,AVNV)的快速诊断和分子流行病学的调查,以及AVNV的疫情监测,选择AVNV全基因组序列中的保守区段,应用Accelrys gene 2.5软件设计一对巢式引物,用于AVNV的检测。结果显示,引物的扩增片段分别为979和548 bp。实验优化了PCR体系中Mg2+和dNTPs浓度及扩增程序中的退火温度,并建立了完善的AVNV巢式PCR检测技术。研究表明,该PCR检测技术具有较高的敏感性,可稳定检测出5 pg扇贝样品组织总核酸中5×10 copies的病毒粒子。
- 李晨王崇明曲朋黄倢
- 关键词：栉孔扇贝巢式PCR
- 一种提升舱养大黄鱼品质的功能性饲料
- 本发明提供了一种提升舱养大黄鱼品质的功能性饲料，属于饲料技术领域。本发明所提供的功能性饲料的配方包括如下组分：鱼粉，鸡肉粉，乙醇梭菌蛋白，棉籽浓缩蛋白，酶解鸡浆，木薯粉，面粉，鱼油，豆油，大豆卵磷脂，维生素预混料，矿物质...
- 张文兵曲朋李昕昕秦高婵张远明章程伟姜慧姜林杉麦康森
- 急性病毒性坏死病毒分子流行病学调查及奥尔森帕金虫环介导等温扩增检测方法的建立
- 栉孔扇贝(Chlamys farreri)是我国北方沿海主要的贝类养殖品种之一。“急性病毒性坏死病毒”(Acute Viral Necrosis Virus;AVNV)经证实是一种能对栉孔扇贝造成极大危害的病原体。本文应...
- 曲朋
- 关键词：栉孔扇贝流行病学调查环介导等温扩增技术
- 两个海区栉孔扇贝感染AVNV的比较分析被引量：1
- 2013年
- 急性病毒性坏死病毒(acute viral necrosis virus,AVNV)是一种能导致栉孔扇贝大规模死亡的DNA病毒,研究通过检测不同养殖模式和不同苗种来源的栉孔扇贝样本携带AVNV的情况,以寻找合理的养殖模式和苗种,降低疾病的发生。以扇贝单一养殖的青岛流清河海区和贝藻间养的荣成桑沟湾海区为采样点,每月(2010年3月—2011年4月)定期采集2个海区野生苗养殖和人工苗养殖的栉孔扇贝样品各10只,共得到扇贝样本480只。取扇贝外套膜组织,提取DNA,采用巢式PCR检测扇贝感染AVNV的情况,并对2个海区2类栉孔扇贝AVNV感染率进行比较。结果显示,在2个海区的2类栉孔扇贝体内均检测到AVNV,流清河海区野生苗和人工苗养殖栉孔扇贝AVNV感染率分别为21.1%和18.9%,桑沟湾海区2类扇贝AVNV感染率分别为11.1%和5.6%;2个海区AVNV感染扇贝均集中在7、8月份,其中,流清河海区最高可达80%,桑沟湾海区最高仅40%。研究表明,贝藻间养和选用人工苗能有效减少AVNV对养殖扇贝的感染,是控制养殖扇贝发病死亡的有效措施。
- 杨彩霞李赟王崇明曲朋黄倢
- 关键词：栉孔扇贝巢式PCR养殖模式
