方维焕 作品数:279 被引量:1,054 H指数:17 供职机构: 浙江大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 浙江省自然科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 生物学 轻工技术与工程 更多>>
QCM微生物免疫传感器用于大肠杆菌0157:H7的检测 本文设计了基于石英微天平(Quartz Crystal Microbalance,QCM)的微生物免疫传感器,并利用其检测致病性大肠杆菌O157:H7。MHDA(16-mercapohexadecanoic acid)的... 王丽江 吴春生 李蓉 王平 方维焕关键词:免疫传感器 QCM 自组装 大肠杆菌 文献传递 猪链球菌2型PrsA蛋白诱导巨噬细胞焦亡并具有免疫保护性 猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是引起猪链球菌病的主要病原,有35个血清型,以猪链球菌2型(SS2)在流行最广。SS2因其可感染不同年龄段猪发病而严重威胁着养猪业的发展,并且可以感染人。猪链球菌疫苗... 蒋小武 杨云凯 周晶晶 方维焕荧光法快速鉴定大肠杆菌的初步研究 被引量:2 1999年 以4甲基伞形酮酰βD葡糖醛酸苷(4methylumbeliferylβDglucuronide,4MUG)为底物,将其结合于选择性固体培养基中,采用荧光法检测细菌是否产生特异性的β葡糖苷酸酶作为鉴别细菌的依据。结果表明:大肠杆菌在脱氧胆酸钠培养基(DOC培养基)中经37℃培养9~11h,其菌落在365nm波长紫外光激发下可产生明显的荧光,而其它几种常见的革兰氏阴性肠杆菌(志贺氏菌、克雷伯氏菌、沙门氏菌、柠檬杆菌和弧菌)和铜绿假单胞菌虽能在其中生长,但不产生荧光;在麦康凯培养基中,大肠杆菌菌落出现荧光的时间明显延迟,其它革兰氏阴性菌也仍然不产生荧光。上述两种培养基对耶尔森氏菌和金黄色葡萄球菌的生长具有抑制作用。本试验结果提示,DOC培养基可试用于大肠杆菌的鉴定,具有快速、简便和特异性强的特点。 施明华 方维焕关键词:荧光检测法 乳房炎 大肠杆菌 基于量子点标记的赭曲霉毒素A快速、高灵敏荧光免疫层析检测方法的建立及应用 被引量:10 2019年 赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)具有肾毒性、致畸性、致癌性和免疫毒性,广泛存在于各种粮食作物及其副产品中,是食品和饲料原料的重要污染物,可在人类及动物体内蓄积,在已知发现的真菌毒素中,重要性和危害性仅次于黄曲霉毒素。本研究通过采用量子点荧光微球(quantum dots,QDs)标记OTA单克隆抗体,并基于免疫层析原理,优化、建立了OTA高灵敏荧光免疫层析检测方法(FICGA),15min即可实现对农产品中OTA污染的快速定量检测。该方法检测下限(IC10)达到0.04ng/mL,检测区间(IC20-IC80)为0.05–0.59ng/mL,半数抑制率(IC50)为0.18ng/mL。与OTA类似物OTB、OTC交叉反应性为7.3%和11.9%,对其他常见真菌毒素AFB1、ZEN、FB1和DON均无交叉反应。在玉米、面粉和大豆样本中的加标回收率可达83.2%–117.8%,与LC-MS/MS同时对天然样本中OTA含量的检测结果表明,两种方法相关性良好。本研究建立的FICGA快速、灵敏,可满足基层单位和现场的快速检测需求,具有很好的应用前景。 杨眈 王作欢 蒋小武 方维焕 方维焕 章先关键词:赭曲霉毒素A 免疫层析 量子点 单克隆抗体 基于纳米金和辣根过氧化物酶双标记抗体的黄曲霉毒素B_1高灵敏检测方法的建立及应用 被引量:7 2018年 黄曲霉毒素B_1(aflatoxin B_1,AFB_1)在自然界普遍存在,可污染多种粮食作物和饲料,给动物和人类健康造成严重威胁。为建立AFB_1高灵敏度的快速检测方法,本研究通过采用纳米金颗粒(Au nanoparticles,AuNPs)和辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)双标记AFB_1单克隆抗体,建立新型酶联免疫检测方法(HRP-AuNPs IC-ELISA),检测下限(IC10)为0.017ng/mL,检测区间(IC_(20)–IC_(80))为0.026–0.376ng/mL,半数抑制率(IC_(50))为0.099ng/mL,与黄曲霉毒素B2、G1、G2和M1的交叉反应率分别为2.7%、9.3%、2.1%和5.3%,与赭曲霉毒素A、伏马毒素B_1、桔青霉素、展青霉毒素和玉米赤霉烯酮几乎不存在交叉反应。在玉米和面粉样本中的加标回收率可达88.93–103.55%,与LC-MS/MS同时对天然样本中AFB_1含量进行检测,结果表明,两种方法相关性良好。本研究建立的HRP-AuNPs IC-ELISA耗时短且灵敏度高,可用于实际样本中AFB_1的快速定量检测与分析,也为其他霉菌毒素的精准检测技术开发提供参考。 章先 章先 付子贤 周一钊 方维焕 宋厚辉关键词:黄曲霉毒素B1 纳米金颗粒 辣根过氧化物酶 单克隆抗体 猪链球菌2型三重PCR快速检测试剂盒 猪链球菌2型三重PCR快速检测试剂盒,由四个含不同成分的冻存管和100个PCR反应管及检测步骤说明书组成,冻存管分别装有:10×buffer,dNTP,引物gdh-1、gdh-2、mrp-1、mrp-2,cps2J-1、... 方维焕 李肖梁 陈健舜 田国明 马有智文献传递 PCV2的PCR鉴定及其相关序列分析 被引量:2 2005年 设计合成了2条猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2)PCR引物,对杭州地区发现的PCV2可疑病例进行PCR鉴定,并优化了PCR反应条件,进行了敏感性、特异性试验,对其扩增序列进行测序比较。结果显示,用所设计的2条引物成功扩增了PCV2基因片段,PCV2基因片段序列与参考序列相似性达到91.2%。说明所设计的引物用来检测临床病理中PCV2是准确可行的。对杭州地区的56份病料的检测结果:感染率为57%,表明杭州地区的感染已经比较严重。 杨宗照 方维焕关键词:PCV 猪链球菌多价油乳剂灭活苗对母猪免疫的效果观察 2007年 章红兵 方维焕关键词:多价油乳剂灭活苗 猪免疫 间接ELISA方法 集约化猪场 保护力 单核细胞增多性李斯特菌FlhB参与细菌鞭毛合成及运动机制研究 单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称单增李斯特菌,Lm)是重要的人兽共患食源性病原菌.基因组注释单增李斯特菌flhB基因可能编码鞭毛合成蛋白,但其功能尚未得知.因此本研究旨在探索Fl... 王小文 程昌勇 方维焕 宋厚辉关键词:鞭毛 规模化猪场仔猪断奶腹泻大肠杆菌耐药性监测 被引量:23 2004年 采用WHO推荐的Kirby-Bauer法,以分离自浙江省10个规模化猪场的60株病原性大肠杆菌为材料,开展了对兽医临床上常用的21种抗菌药物的耐药性监测.结果表明,60株病原性大肠杆菌对抗菌药物已发生普遍的耐药性,其中对复方新诺明(88.3%)、氯霉素(81.0%)、链霉素(78.3%)、痢菌净(77.3%)、痢特灵(75.0%)、喹乙醇(75.0%)等的耐药性最强.对单诺沙星、环丙沙星及诺氟沙星的耐药率也很高,其耐药率分别高达78.8%、59.3%和56.7%.60株大肠杆菌共有57种耐药谱型,绝大多数为多重耐药,其中有4株可同时耐受14种抗菌药物.受检菌株中除1株外,59株均对2种或多种抗菌药物耐药:对1~3种,4~6种,7~9种,10~12种及13~15种抗菌药物耐药的分别有6株(10.0%)、11株(18.3%)、17株(28.3%)、17株(28.3%)和9株(15.0%);对8种抗菌药物耐药的菌株占比例最大(16.7%),其次是对10种抗菌药物耐药(15.0%)和对6种抗菌药物耐药(11.7%)的菌株;不同地区、不同规模化猪场的大肠杆菌菌株的耐药性存在一定差异.临床上应用时间不长的氟苯尼考耐药率已达60.9%,值得关注. 姜中其 陈晓红 方维焕 张应勤 孙建华关键词:大肠杆菌 仔猪断奶腹泻 耐药性