徐晓娟
- 作品数：66 被引量：236H指数：11
- 供职机构：华中农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：湖北省科技攻关计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学文化科学医药卫生生物学更多>>
- RNA干扰抗A型流感病毒的研究
- 本研究选用流感病毒中高度保守的NP和M2基因作为RNA干扰的靶基因,针对NP基因保守区段设计了2对siRNA(NP749,NP1383),针对M2基因保守区段设计了3对siRNA (M48,M754,M949),通过载体...
- 周红波金梅林喻正军徐晓娟彭亚平刘金林伍海芽刘虎陈焕春
- 快速乳胶凝集试验检测禽流感病毒亚型H5N1血清抗体的研究
- 快速的检测禽流感亚型H5N1血清抗体的乳胶凝集试验被建立和评价.9-11日龄的SPF(special pathogen free)鸡胚增殖的禽流感病毒(Aian Influence Virus,AIV)灭活后,用超速离心...
- 徐晓娟金梅林喻正军李红超邱德新陈焕春
- 关键词：乳胶凝集试验禽流感抗体检测血清抗体
- 文献传递
- 副猪嗜血杆菌Apd-ELISA抗体检测试剂盒的制备和初步应用被引量：3
- 2020年
- 旨在对副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)的黏附素蛋白(autotransporter passenger domain,Apd)ELISA抗体检测方法进行参数优化、临界值确定和应用评价,获得性能稳定的副猪嗜血杆菌病抗体检测试剂盒。首先通过猪的免疫攻毒试验获得HPS阴、阳性对照血清,优化Apd-ELISA的反应参数;然后用背景确认的阴、阳性血清确定其临界值,并对封闭液及酶标板的包装方式进行选择;最后用Apd-ELISA试剂盒对临床样品进行检测并与荷兰Biocheck的OppA-ELISA试剂盒进行比较。结果表明,抗原包被质量浓度为0.5μg·mL^-1、被检血清以1:200倍稀释后反应45 min以及二抗稀释度为1:15000时,Apd-ELISA的反应背景下降,区分度提高。根据背景确认的27份阳性和40份阴性血清的OD630 nm值以及临界值计算公式(S-N)/(P-N),得到Apd-ELISA的阴阳性临界值是0.33。证实用封闭液K封闭和真空包装的酶标板可以在50℃保存4 d(相当于在4℃保存22个月)。用Apd-ELISA试剂盒检测1179份临床血清,表明母猪、后备和育肥猪以及仔猪的HPS血清阳性率分别为83.76%、61.09%和27.48%。与荷兰的Biocheck试剂盒进行比较,发现Apd-ELISA与Biocheck试剂盒(OppA-ELISA)对HPS临床阴性血清和疫苗免疫血清检测的符合率为100%,对HPS临床阳性血清的符合率仅为4.76%(6/126)。然而,Apd-ELISA与OppA Western blot的阳性符合率可达到73.02%(92/126)。本研究获得了能有效区分HPS阴、阳性血清和稳定保存的Apd-ELISA抗体检测试剂盒,可用于HPS灭活疫苗免疫后的抗体检测和副猪嗜血杆菌病的血清抗体检测。
- 田杨刘云宝马辉潘其聪肖静陈焕春蔡旭旺徐晓娟
- 关键词：副猪嗜血杆菌ELISA试剂盒抗体检测
- 论我国动物传染病学课程教学存在的问题及其对策被引量：12
- 2010年
- 动物传染病学是动物医学专业本科专业教学中的一门核心课程。保障动物传染病学课程的教学质量,提高动物医学专业学生在以后动物传染病防控中的综合能力,直接关系到我国兽医人才队伍建设和未来动物传染病防控的水平。在对我国当前动物传染病学课程教学中面临的形势与存在问题分析的基础上,提出了应对这些问题的主要对策。
- 曹胜波陈焕春金梅林吴斌蔡旭旺徐晓娟周红波张安定
- 关键词：动物传染病教学
- 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌apxⅡ^-/Amp^r突变株的构建被引量：5
- 2004年
- 根据已发表的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清5型核苷酸序列设计并合成了一对引物,从自行分离的APP菌株PCR扩增apxⅡCA基因,将该片段与pBluescriptSK(+)载体连接,得到质粒pSK CA。另外,从质粒pIC neo中得到的Ampr基因经XbaⅠ酶切消化后,克隆到pSK CA中的XbaⅠ位点,获得了重组转移质粒pSK CAmpr。pSK CAmprDNA通过电转化导入亲本菌,电转化后的产物涂布于TM平板,可获得突变株。提取突变株和亲本菌基因组DNA,用PCR检测含有apxⅡC基因的胸膜肺炎放线杆菌染色体区域。从突变株基因组DNA扩增得到的一条PCRDNA片段比从亲本菌基因组DNA扩增得到的一条DNA片段大1 3kb,增大的片段与所插入的Ampr基因大小相符合。用合成的Ampr基因引物从突变株基因组DNA中也能扩增到一条1 3kb的特异性DNA片段。同时South ernblot鉴定有特异性带。这表明我们所构建的突变株是成功的。测定了突变株的遗传稳定性及突变株对动物的安全性,为进一步研究用其它报告基因置换Ampr基因后,研制单基因工程疫苗及以APP毒力缺失突变菌株为载体,表达外源基因的APP基因工程菌的研究奠定了坚实的基础。
- 贝为成何启盖陈焕春徐晓娟洪文洲肖少波宋云峰刘建杰
- 关键词：传染性胸膜肺炎放线杆菌基因构建
- 高等院校动物医学专业临床实践教学面临的形势与对策被引量：4
- 2019年
- 临床实践教学是动物医学教育的关键环节,直接决定着动物医学人才的培养质量。随着我国经济的发展、科技的进步和规模化养殖业的兴起,伴侣动物的增多,以及人们对绿色食品和环境的追求,动物医学在畜牧业发展、宠物医疗、食品安全、公共卫生安全等领域发挥越来越重要的作用,对动物医学人才的临床实践技能提出了更高要求。文章在分析当前我国动物医学教育中临床实践教学面临的形势与存在的问题基础上,提出了解决这些问题的主要对策建议。
- 蔡旭旺陈焕春曹胜波张安定徐晓娟周祖涛吴美洲
- 关键词：动物医学
- 猪胸膜肺炎放线杆菌毒素蛋白的表达、纯化及其间接ELISA检测方法的建立与应用被引量：8
- 2005年
- 将含有猪胸膜肺炎放线杆菌毒素 基因的质粒 p ET- Apx 转化到大肠杆菌 BL2 1 (DE3)。挑选出表达量最高的克隆子 ,于 37℃经 IPTG诱导表达。对表达条件进行优化 ,并对包涵体进行了提纯和复性。用复性后的蛋白作抗原 ,建立了检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌抗体的间接 EL ISA。试验的最佳反应条件为 :最佳抗原稀释度为 1∶ 1 6 0 ,抗原包被液用 Tris- HCl(p H8.0 ) ,封闭液用含 0 .4 %BSA的 PBST,血清稀释度为 1∶ 4 0 ,二抗稀释度为 1∶ 6 0 0 0 ,稀释液用含0 .4 %BSA的 PBST,血清反应时间为 30 min,二抗反应时间为 4 5 min,底物反应时间为 2 0 m in。与间接血凝 (IHA)检测结果比较 ,建立的 EL ISA诊断方法具有良好的稳定性和可重复性 ,并具有较高的特异性和敏感性。用建立的间接EL ISA对 2 5 0 3份临床送检血清进行了血清流行病学调查 ,结果表明 ,胸膜肺炎放线杆菌抗体的阳性率为 6 3%。
- 梁望旺何启盖刘正飞陈焕春吴斌徐晓娟李涛
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌毒素间接ELISA
- 猪胸膜肺炎放线杆菌毒素I基因的克隆、表达及其ELISA检测方法的建立被引量：23
- 2004年
- 根据胸膜肺炎放线杆菌S4 0 74菌株毒素I的序列 ,设计了 1对引物 ,从本室自己分离的菌株中扩增了猪胸膜肺炎放线杆菌毒素I的结构基因 (apxICA) ,扩增的DNA片段大小为 36 4 0bp(4 6 87～ 832 6bp) ,将其克隆到pMD18 T载体中 ,酶切鉴定和序列测定后 ,进一步将其插入pET 2 8a中构建了原核表达载体 ,SDS PAGE和Westernblotting分析表明 ,该基因在大肠杆菌BL2 1(DE3 )中获得了表达 ,而且表达的蛋白质具有免疫学活性。利用表达的蛋白作为抗原包被酶标板 ,建立了检测毒素I血清抗体的ELISA方法。临床应用表明 。
- 刘建杰何启盖陈焕春吴斌徐晓娟刘军发唐先春贝为成
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌毒素ELISA检测
- 一种血清7型副猪嗜血杆菌天然弱毒菌株及其应用
- 本发明公开了一种血清7型副猪嗜血杆菌天然弱毒菌株及其应用，所述血清7型副猪嗜血杆菌天然弱毒菌株于2017年11月22日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2017706；本发明的血清7型副猪嗜血杆菌天然...
- 王湘如蔡旭旺张勤学陈焕春徐晓娟
- 文献传递
- 乳胶凝集试验检测H5亚型禽流感病毒血凝素抗体的研究
- 利用原核表达并经过纯化的H5亚型禽流感病毒的血凝素蛋白做为抗原,经碳二亚胺(EDAC)将表达产物和羧基化的乳胶共价偶联,并对偶联乳胶的蛋白量和偶联时间进行合理选择,建立H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白乳胶凝集试验的方法。临床...
- 喻正军金梅林徐晓娟张瑞华陈焕春
- 文献传递
