徐丽慧
- 作品数：94 被引量：380H指数：12
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学自动化与计算机技术更多>>
- 黄连素对T淋巴细胞活化和增殖的抑制作用被引量：55
- 2002年
- 目的 :研究黄连素 (Ber)对T细胞体外活化和增殖的影响及作用机制。方法 :正常人外周血全血培养 ,以植物血凝素 (PHA)或佛波醇酯 (PDB)加离子霉素 (Ion)刺激活化淋巴细胞 ,双荧光染色及溶血获取有核细胞后 ,以流式细胞仪分析T细胞表达活化抗原CD6 9和CD2 5的水平 ,并以碘化丙锭染色分析细胞周期分布 ,7-AAD活染分析细胞死亡率。结果 :浓度为 10 0 μmol/L和 5 0 μmol/L的Ber对PDB +Ion或PHA激活T细胞表达CD6 9有明显抑制 ,而 2 5 μmol/L的Ber抑制效应无显著性 ;随时间延长 ,对CD6 9表达的抑制程度下降 ;对于CD2 5表达 ,上述 3个浓度的Ber抑制作用均有显著性 ,且呈剂量依赖性。同时 ,这 3个浓度的Ber均能明显阻止淋巴细胞进入S期和G2 /M ,对细胞周期的抑制作用没有时相特异性。活染分析显示Ber对淋巴细胞无明显细胞毒性。结论 :Ber通过干扰早期活化信号转导通路而抑制T细胞活化和增殖 ,发挥其免疫抑制作用。
- 何贤辉曾耀英徐丽慧邱海霞蔡小嫦
- 关键词：黄连素T淋巴细胞活化抗原细胞周期
- 构建的Flt3L胞外域原核表达载体在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的:构建含组氨酸标签的FMS样酪氨酸激酶3配体(Fms-like tyrosine kinase 3 ligand,Flt3L)胞外域蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。方法:依据Flt3L基因序列设计引物,以RT-PCR的方法从小鼠脾脏总RNA中克隆Flt3L基因并构建其胞外域原核表达载体,测序鉴定后在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中诱导表达,用免疫印迹鉴定。结果:克隆到Flt3L编码区全长序列,经DNA测序证明与已报道的序列相同;构建羧基端带有His6标签的Flt3L胞外域蛋白的原核表达载体,转化大肠杆菌后SDS-PAGE分析显示在BL21(ED3)中获得较高表达;免疫印迹分析表明IPTG诱导后表达的Flt3L胞外域蛋白的相对分子质量(Mr)为19 000,与理论值相符,此蛋白与抗His6标签的抗体发生特异性反应。结论:成功克隆Flt3L基因,构建其胞外域蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得表达。
- 卢宏松徐丽慧施焕敬韩捷何贤辉
- 关键词：原核表达组氨酸标签
- 小檗碱对小鼠淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响被引量：13
- 2004年
- 目的 :分析小檗碱 (Ber)对小鼠淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响 ,探讨其免疫抑制作用的机制。方法 :分离小鼠淋巴结细胞 ,以CFSE染色 ,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白 (ConA)或者佛波醇酯 (PDB)和离子霉素 (Ion)进行刺激 ,以流式细胞仪分析小檗碱对淋巴细胞增殖率的影响 ;以WST 1检测淋巴细胞的增殖情况 ;用碘化丙锭 (PI)染色分析细胞周期分布 ;细胞凋亡以Annexin V染色进行分析。结果 :CFSE染色分析显示 ,当浓度为 10 0、30和 10 μmol L时 ,Ber无论对ConA或PDB +Ion诱导的小鼠淋巴细胞增殖 ,都具有明显的抑制作用 (P <0 0 5 )。以WST 1分析细胞增殖情况 ,也获得相似的结果。对细胞周期分析表明 ,随着小檗碱浓度的增加 ,处于亚二倍体峰的细胞数增加 ,处于S和G2 M期的细胞数则减少 ,而G0 G1 期的细胞数基本不变。Annexin V染色法结果表明 ,30 μmol LBer组Annexin V单阳性区域的百分率为 ( 7 13± 1 0 8) % ,与PDB +Ion阴性组的百分率 ( 2 4 9± 0 2 5 ) %比较有显著的差异 (P <0 0 1)。结论 :小檗碱对小鼠淋巴细胞的增殖有明显抑制作用 ,它能抑制淋巴细胞进入细胞分裂周期 ,这种抑制作用表现出明显的周期特异性。同时 ,Ber可以诱导体外培养的小鼠淋巴细胞发生凋亡。
- 杜丽蕊何贤辉徐丽慧曾耀英王青
- 关键词：小檗碱淋巴细胞细胞周期细胞凋亡
- 抗人PD-1高亲和力抗血清的制备及其在PD-1免疫印迹分析中的应用
- 2008年
- 利用纯化的可溶性人PD-1胞外域(sPD-1)蛋白为免疫原免疫小鼠,获得抗血清.免疫印迹显示该抗血清与原核表达的sPD-1有特异性反应,但与某些菌体蛋白存在交叉反应.经菌体蛋白吸附法处理后,交叉反应明显减弱.以商业化抗人PD-1抗体和小鼠sPD-1抗血清分析经亲和层析富集的活化的Jurkat T细胞表达的PD-1,只有自制的抗血清鉴定到特异反应条带,其表观分子质量为49 ku.
- 施焕敬徐丽慧韩捷卢宏松何贤辉
- 关键词：JURKAT抗血清免疫印迹
- 人外周血淋巴细胞及单核细胞表达PD-L1和PD-L2的动力学研究被引量：2
- 2006年
- 目的:探讨PD-L1和PD-L2在正常人外周血静息和活化的B细胞、T细胞及单核细胞表面的表达规律。方法:利用荧光抗体染色和流式细胞术分析静息状态及经多克隆刺激剂脂多糖(LPS)和美洲商陆丝裂原(PWM)刺激6、24、48和72 h后表达PD-L1和PD-L2的B细胞和T细胞百分率,同时分析静息状态及经IFN-γ和LPS共同刺激244、8、72和96 h后表达PD-L2的单核细胞百分率。结果:静息B细胞和T细胞表面不表达PD-L1,LPS和PWM刺激6 h后表达PD-L1的B细胞百分率均显著高于静息B细胞,24 h达到最高,分别为(46.26±10.71)%和(43.67±6.14)%,之后随时间延长而降低;表达PD-L1的T细胞百分率在LPS刺激下无显著变化,但PWM刺激6 h后百分率明显高于静息条件,24 h达到最高,为(25.42±9.23)%,之后下降。静息B细胞和T细胞不表达PD-L2,活化后PD-L2表达也无明显上调。另外,静息状态单核细胞表面不表达PD-L2,体外活化24 h后表达PD-L2的单核细胞百分率显著上调,48 h达到最高为(28.70±14.22)%,之后随时间而降低。结论:活化的淋巴细胞表达PD-L1,但不表达PD-L2,后者在活化的单核细胞表面表达,并且后者达到高峰的时间迟于前者。
- 迟晓云何贤辉查庆兵徐丽慧曾耀英王通
- 关键词：B7-H1脂多糖类淋巴细胞单核细胞
- HLA-A^＊2402-BSP在大肠杆菌中的优化表达及其四聚体的制备和鉴定被引量：2
- 2007年
- HLA-A*2402是中国人群中最常见的等位基因之一,为研究该基因型人群的人巨细胞病毒(HCMV)特异性细胞毒T细胞(CTL)免疫应答,需要制备负载相应抗原肽的HLA-A*2402四聚体。以RT-PCR方法克隆HLA-A*2402重链基因的cDNA,并构建了羧基端融合生物素化酶BirA底物肽(BSP)的HLA-A*2402重链胞外域融合蛋白(HLA-A*2402-BSP)的表达载体,但该载体不能在大肠杆菌(E.coli)中有效表达HLA-A*2402-BSP融合蛋白;通过对氨基端(N端)区域编码区的密码子进行优化,构建了同义突变的HLA-A*2402-BSP表达载体,融合蛋白在E.coli中获得了高效表达。进而制备了负载HLA-A*2402限制性HCMVpp65341-349抗原肽(QYDPVAALF,QYD)的可溶性HLA-A*2402-QYD单体分子和四聚体,获得的四聚体具有与HLA-A24+供者抗原特异性CTL的结合活性,特异性CTL的频率为总CD8+T细胞的0·09%～0·37%。这些结果为进一步研究HLA-A*2402限制性的特异性CTL免疫应答规律奠定基础。
- 贾仟涛徐丽慧李丰耀查庆兵何贤辉
- 关键词：四聚体巨细胞病毒密码子优化原核表达包涵体
- 负载野生型p53抗原肽HLA-A^＊2402四聚体的制备和鉴定
- 2010年
- 目的:制备负载野生型p53抗原肽的HLA-A*2402四聚体,用于检测卵巢肿瘤患者p53特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)。方法:在p53125-134抗原肽TYS和轻链β2微球蛋白存在时,利用稀释法复性获得负载p53125-134抗原肽(TYSPALNKMF,TYS)的可溶性单体,经生物素酰化并纯化后与荧光素标记的链亲和素按4∶1的比例混合形成HLA-A*2402/TYS四聚体,以流式细胞仪检测特异性CTL的频率。结果:流式细胞术分析显示,卵巢癌患者外周血中可检测减低频率的p53125-134TYS抗原肽特异性CTL。结论:成功制备HLA-A*2402/TYS四聚体。
- 王笑迎查庆兵何贤辉欧阳东云徐丽慧郭贺高琦
- 关键词：四聚体细胞毒T淋巴细胞
- H-2D^b四聚体的制备及其在检测LCMV特异性CD8^＋T细胞中的应用被引量：4
- 2008年
- MHC四聚体技术是研究抗原特异性淋巴细胞应答的关键技术之一。为研究H-2D^b基因型(如C57BL/6)小鼠的特异性CD8^+T细胞免疫应答,需要建立H-2D^b四聚体制备技术平台。首先以RT-PCR方法克隆H-2D^b重链基因的cDNA,进而构建H-2D^b胞外域与生物素化酶BirA底物肽(BSP)融合蛋白的表达载体,并在大肠杆菌中获得表达。在LCMV GP_(33-41)抗原肽(KAVYNFATC,KAV)和人β_2-微球蛋白存在时,通过稀释法复性获得H-2D^b/KAV单体。该单体经生物素化并纯化后与PE-链亲和素按4:1的比例混合,即形成四聚体。通过流式细胞术检测经KAV肽免疫的C57BL/6小鼠体内的LCMV特异性CD8^+T细胞的频率.结果表明在外周血、引流淋巴结和脾脏中均可检测到一定频率的LCMV特异性CD8^+T细胞,其中以对外周血标本染色的效果最佳。成功建立了小鼠H-2D^b四聚体制备技术平台,为监测及分析基于H-2D^b基因型小鼠的实验性免疫治疗创造了条件。
- 刘毅徐丽慧曾学思孙建方何贤辉
- 关键词：淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒原核表达
- 孕酮对人T淋巴细胞体外活化CD69表达的作用被引量：10
- 2000年
- 目的 :探讨孕酮 (Progesterone ,Prog)及地塞米松 (Dexamethasone,Dex )对人外周血T淋巴细胞体外活化CD6 9表达的作用。方法 :以女性健康志愿者 (10名 )为研究对象 ,以蛋白激酶C的刺激剂佛波醇酯 (Phorbolester,PDB)为T淋巴细胞的活化剂 ,采用双荧光染色流式细胞技术 ,检测CD3+的T淋巴细胞表达早期活化表面分子CD6 9的百分率 ,以观察Prog、Dex及Prog加上Dex对外周血T淋巴细胞体外活化的作用。结果 :在体外培养条件下 ,无论单独使用Prog还是Dex均增强低剂量PDB刺激CD6 9的表达。然而 ,与单独使用Prog或Dex的作用相比 ,Prog加上Dex明显减弱低剂量PDB的活化CD6 9的表达。结论 :同时使用Prog与Dex可明显抑制T淋巴细胞的体外活化 。
- 孙荭曾耀英黄柏炎何贤辉曾洁铭徐丽慧
- 关键词：孕酮CD69体外活化自身免疫性疾病
- 负载人恶性黑素瘤相关抗原gp100抗原肽HLA-A^＊2402四聚体制备及鉴定
- 2010年
- 目的:构建负载人恶性黑素瘤相关抗原gp100抗原肽的HLA-A*2402四聚体并进行鉴定,为分析gp100抗原肽诱发的特异性细胞免疫应答创造条件。方法:以羧基端融合生物素化酶BirA底物肽的HLA-A*2402重链胞外域融合蛋白、人β2-微球蛋白、gp100 VYFFLPDHL抗原肽、PE-链亲和素为材料,制备HLA-A*2402/VYF四聚体;非还原SDS-PAGE鉴定四聚体四聚化程度;三色免疫荧光标记流式细胞术分析HLA-A*2402+健康志愿者外周血gp100特异性CD8+T细胞的频率。结果:HLA-A*2402/VYF四聚体形成率为83%,所制备的四聚体具有与HLA-A*2402+供者抗原特异性CD8+T细胞的结合活性,特异性CD8+T细胞的频率为外周血总CD8+T细胞的0.02%～0.06%。结论:成功制备HLA-A*2402/VYF四聚体并用于检测gp100特异性CD8+T细胞,为研究HLA-A*2402+黑素瘤患者免疫治疗的机制及疗效监测创造了条件。
- 刘毅徐丽慧何贤辉孙建方
