张晓钰
- 作品数：9 被引量：117H指数：7
- 供职机构：北京大学生命科学学院蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学环境科学与工程轻工技术与工程更多>>
- 转金属硫蛋白突变体 alpha alpha 烟草对 Cd 抗性的提高及其抗性机理的研究
- 张晓钰
- 关键词：金属硫蛋白ALPHA重金属抗性转基因烟草
- 转金属硫蛋白突变体αα的烟草具有较高的重金属抗性被引量：18
- 2000年
- 金属硫蛋白 (MT)有α、β两个结构域 ,其中α结构域优先结合Cd2 + 、Hg2 + ,以α结构域代替 β结构域而得到的αα突变体在大肠杆菌构建及表达后 ,体外实验证明其具有同天然MT相似的稳定性 ,但结合重金属的能力稍强于天然MT。将αα突变体转入植物表达载体 ,以CaMV 35S为启动子 ,利用根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens(SmithetTownsend)Conn)介导的叶盘法转化烟草 (NicotianatabacumL .cv.NC89)。Southern、Western证明了外源基因在烟草内的整合与表达。重金属抗性结果证明 :转αα突变体烟草在含 30 0 μmol/LCdCl2 的培养基中可正常生长 ,转天然MT的烟草在含 2 0 0 μmol/LCdCl2 的培养基中生长 ,而野生型烟草只能在含 75 μmol/LCdCl2 的培养基中生长。Cd2 + 含量及分布实验证明 :转基因烟草同天然烟草相比 ,根部吸收了大部分的Cd2 + ,从而降低了叶部Cd2 + 含量。
- 张晓钰周慰茹炳根
- 关键词：转基因烟草重金属MT土壤污染
- 人小肠三叶因子(hITF)基因在生菜中的整合与表达被引量：16
- 2001年
- 用根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens (SmithetTownsend )Conn)介导的叶盘法 ,将人小肠三叶因子(hITF)导入生菜 (LactucasativaL .)中 ,在含有除草剂的培养基上筛选 ,获得抗性植株。通过PCR和Southern印迹分析证明 ,hITFcDNA已整合到生菜基因组中。Western印迹分析证明hITF在生菜中的表达。ELISA检测表明 ,hITF在生菜新鲜叶片中的表达量为 2 0 0～ 3 0 0ng/g ,最高达 70 0ng/g ,约占总可溶性蛋白的 0 .1%。
- 左晓峰张晓钰单龙肖传英何笃修茹炳根
- 关键词：人小肠三叶因子生菜转基因植物
- 转金属硫蛋白突变体αα烟草对Cd抗性的提高及其抗性机理的研究
- 该课题希望通过植物基因工程的方法,将MT将及其突变体αα转入烟草,以非转基因烟草和转MT基因烟草对对照,探讨αα在植物体内的表达特点及重金属结合能力的高低,以期获得结构域突变体αα金属结合能力的体内实验结果.利用绿色荧光...
- 张晓钰
- 关键词：金属硫蛋白重金属抗性转基因烟草
- 金属硫蛋白突变体的植物高效表达载体的构建及其在烟草中的表达被引量：14
- 1999年
- 金属硫蛋白有α、β两个结构域（ｄｏｍ ａｉｎ），其中α结构域优先结合Ｃｄ２＋ 和Ｈｇ２＋ ．小鼠αα突变体在大肠杆菌中已经构建并得到表达，其转基因植株已得到，可在Ｃｄ３００（３００ μｍ ｏｌ／Ｌ）中生长．为了进一步提高外源基因在烟草中的表达量，首先用ＰＣＲ 的方法设计引物，在基因翻译起始密码子ＡＴＧ 附近加入植物偏爱的碱基组合ＡＡＣＡＡＴＧ．另外，将该突变体基因插入具有双３５ Ｓ（ＣａＭＶ３５Ｓ）强启动子的植物双元表达载体ｐＧＰＴＶｄ３５Ｓ－ＢＡＲ中，获得了带有αα突变体的植物双元表达载体．通过农杆菌介导的叶盘转化法转化烟草ＮＣ８９，获得了抗除草剂的转基因植株．经ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 和蛋白Ｄｏｔ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ 检测，证明了αα突变体在烟草中的嵌合与表达．抗重金属实验证明转基因烟草可以在Ｃｄ４００（４００ μｍ ｏｌ／Ｌ）中生长．
- 张晓钰李伟张竞何笃修茹炳根
- 关键词：突变体抗性育种MT重金属
- 转金属硫蛋白αα突变体基因的矮牵牛对铅的抗性及积累的研究被引量：28
- 2001年
- 利用农杆菌介导的方法将MT及αα基因导入矮牵牛中 .转基因植株对铅 (Pb)的抗性及吸收能力明显高于对照 .转MT及αα基因的植株分别能在 15 0及 2 0 0 μmol/LPb中正常生长 ,而对照只能在 5 0 μmol/LPb中正常生长 .转MT及αα基因植株后代种子萌发与对照相比表现出明显的抗Pb优势 .Pb的吸收实验表明转MT、αα基因的植株对Pb的吸收分别比对照提高了 2 8%和 35 % .
- 李伟张竞张晓钰单龙茹炳根
- 关键词：金属硫蛋白铅吸收抗性重金属污染
- 小鼠金属硫蛋白突变体αα-cDNA在烟草中的表达及转基因烟草对Cd^(2+)抗性的提高被引量：17
- 2000年
- 金属硫蛋白是一类小分子量的金属结合蛋白 ,有 β,α两个结构域 .用另一个 α结构域取代金属硫蛋白的 β结构域 ,得到突变体 αα.通过 PCR法在 αα- c DNA翻译起始密码子 ATG前加入植物偏爱的碱基组合 AACA,构建 Ca MV双 35S启动子驱动的 αα- c DNA植物表达载体 p GPTVd35S-αα,此载体以抗除草剂基因 ( bar)作为选择标记物 .用根癌农杆菌介导的叶盘法对栽培种烟草 NC89进行转化 .Southern和 Western印迹分析表明突变体αα- c DNA已整合进入烟草基因组并且可以正常表达 .Northern印迹结果显示突变体αα- c DNA在烟草根部的表达强于叶部 .烟草根、茎、叶Cd2 +含量分析表明 ,转基因植物与对照相比 ,Cd2 +更多地集中在根部 ,在一定程度上降低了叶片中的 Cd2 + 含量 .Cd2 + 抗性实验进一步证明突变体αα- c DNA的表达提高了转基因烟草对 Cd2 + 的抗性 :转基因烟草在 2 0 0μmol/L Cd Cl2 条件下生长正常 ,在 40 0μmol/Cd Cl2 培养基内也可以存活 .而 1 0 0μmol/L Cd Cl2 即成为对照烟草的致死剂量 .
- 张晓钰左晓峰肖传英单龙茹炳根
- 关键词：转基因烟草土壤污染
- 植物类MT与植物络合肽被引量：30
- 2000年
- 金属硫蛋白在哺乳动物的解毒方面发挥着重要作用，植物本身也存在类似的解毒机制。研究表明，植物存在基因编码的类MT，另外还有非基因编码的植物MT，又称植物络合肽。类MT在必需重金属离子（例如Zn2＋、Cu2＋）的代谢中发挥着重要作用，而植物络会肽在非必需重金属离子（例如Cd2＋）的解毒中起到关键作用。本文综述了类MT和植物络合肽之间的关系以及各自的生物合成途径、相关的结构与功能、在植物中的分布等。
- 张晓钰茹炳根
- 关键词：代谢解毒金属硫蛋白
- 转金属硫蛋白及其突变体αα基因烟草的T_1代性状分析被引量：11
- 2001年
- 转金属硫蛋白ＭＴ及其突变体αα的烟草自交得到Ｔ１代，转基因植株的重金属抗性和除草剂抗性在后代中得到保持。不同的转基因株系在含有除草剂的培养基中萌发时表现出不同的抗性分离比，说明外源基因在植物染色体内可能有不同的整合拷贝数。两种转基因烟草在含有不同浓度Ｃｄ的培养基中萌发时表现出高的重金属抗性，其中转αα基因烟草对Ｃｄ的抗性优势在Ｔ１代种子萌发实验中更加明显。以ＭＴ ｃＤＮＡ为探针进行ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ杂交，在Ｔ０代和Ｔ１代同时检测到两种转基因烟草外源基因的存在，证明外源基因确实整合到烟草基因组内并稳定传递到后代。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ结果证明了外源基因在烟草第二代的表达。纯合株系仍需要进一步的筛选。
- 张晓钰左晓峰单龙茹炳根
- 关键词：转基因烟草金属硫蛋白杂种一代
