张晓田
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
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- A型流感病毒通用型人源化抗体的构建及初步鉴定被引量：5
- 2014年
- 目的制备A型流感病毒通用型人源化抗体并进行鉴定。方法通过文献检索、蛋白质序列数据库(Swissprot)、蛋白质结构数据库(PBD)等获得抗流感抗体的序列信息,经计算机分析软件InsightⅡ分析抗体结构,采用分子模拟、分子对接等方法分析抗体的轻、重链可变区基因结构,用昆虫细胞偏嗜密码子优化氨基酸序列,合成抗流感病毒抗体轻、重链可变区基因;对合成氨基酸序列中的轻、重链可变区基因作酶切鉴定,将轻链可变区基因与杆状病毒表达载体PAC-κ-CH3连接,构建PAC-κ-L-CH3,酶切合成的重链可变区基因与PAC-κ-L-CH3连接,构建PAC-κ-L-H-CH3重组表达载体,鉴定正确后,同杆状病毒DNA共转染至昆虫细胞(sf9)中,于27℃用无血清培养基培养,收集上清,应用各亚型流感病毒株灭活后进行血凝抑制试验和ELISA试验,检测制备的抗体对流感病毒的通用性;通过荧光抗体试验检测抗体在细胞中的表达。结果重组杆状病毒表达载体转染sf细胞后,传代上清中检测到抗体;血凝抑制试效价为1︰2;ELISA结果显示有3株制备的抗体对3种流感病毒呈阳性反应,1株对实验用的流感病毒株没有反应;转染后传代细胞的荧光抗体鉴定结果显示有阳性抗体表达。结论成功采用计算机筛选合成抗流感病毒抗体基因,初步获得A型流感病毒通用型抗体。
- 王铁成任志广桑晓宇于志君张坤高晓龙孙伟洋李元果郑学星高玉竹耿海东徐钰解林红吴长江张晓田孙贺廷初冬赵永坤杨松涛王化磊高玉伟夏咸柱
- 关键词：人源化抗体流感病毒可变区
- 两株野鸭源新城疫病毒分离株F基因和HN基因的分子特性分析被引量：3
- 2014年
- 为了分析从湖南长沙分离到的野鸭源新城疫病毒（NDV）融合蛋白基因（F基因）和血凝素-神经氨酸酶基因（HN基因）分子特性,采用RT-PCR方法对分离自野鸭粪便的2株NDV的F基因和HN基因进行了扩增和遗传进化分析。F基因序列分析表明,编码区核苷酸为1 662bp,编码553个氨基酸,F基因碱性裂解位点序列为^112E-R-Q-E-R-L^117,符合NDV弱毒特征,与ClassⅠ类NDV代表毒株核苷酸同源性在92.3%-93.8%之间。HN基因序列分析表明,编码区核苷酸为1 851bp,编码616个氨基酸,与ClassⅠ类NDV代表毒株核苷酸同源性在91.6%-93.9%之间。根据F基因和HN基因遗传进化分析表明,此次分离到的2株NDV同属于ClassⅠ类Genotype 3型。
- 徐钰解林红耿海东高晓龙王海军范胜涛李元果王铁成吴长江张晓田孙贺廷初冬高玉伟
- 关键词：新城疫病毒F基因HN基因
- 吉林省部分地区野禽携带新城疫病毒情况调查
- 2014年
- 为调查吉林省候鸟迁徙路线中野禽类携带新城疫病毒情况,对吉林省七个地区野禽新鲜环境样品或泄殖腔拭子进行样品采集。对采集的821样品进行新城疫病毒携带的检测,其中有32份阳性样品,阳性分离率为3.9%。经GenBank序列比对32株均为弱毒ClassⅠ群基因3型。本次对吉林省新城野禽携带新城疫病毒调查结果中未见新城疫强毒株。
- 耿海东解林红徐钰高晓龙李元果王海军范胜涛孙贺廷王铁成吴长江张晓田初冬高玉伟
- 关键词：野禽新城疫病毒
