张念慈
- 作品数：10 被引量：23H指数：3
- 供职机构：湖州师范学院生命科学学院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金国家自然科学基金湖州市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 抗病毒基因MxA真核表达载体的构建及在鸡细胞中的表达被引量：6
- 2008年
- 将人抗病毒蛋白基因MxA与携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的真核表达质粒重组后构建MxA基因真核表达载体pEGFP-C1-MxA。经PCR和酶切方法鉴定后,重组质粒在脂质体介导下转染鸡成纤维细胞和睾丸组织原代细胞,通过荧光观察,RT-PCR及细胞免疫组化检测目的基因的表达。结果表明,MxA基因片段已经被克隆到pEGFP-C1表达载体,成功构建了MxA基因真核表达载体pEGFP-C1-MxA。经该重组质粒转染后的鸡细胞的胞质中呈现颗粒状分布的绿色荧光,RT-PCR扩增出EGFP和MxA基因的特异性片断,免疫组化结果显示EGFP报告基因在细胞内的阳性表达,并表现出MxA的表达特征,间接证明了MxA可在鸡细胞中表达。MxA基因真核表达载体的成功构建以及在鸡细胞中的表达为进一步研究MxA基因在抗禽病毒性疾病中的应用打下了基础。
- 刘莉采克俊张易祥何湃丁志丽张念慈
- 关键词：转染
- 18天鸡胚睾丸支持细胞的分离纯化与鉴定
- 支持细胞(sertoli cell,Sc)在体内是一种外形极不规则的高柱状细胞,分布在各期生精细胞之间,基底面紧贴基底膜,顶端伸向管腔,是构成血睾屏障的基础。有关禽类睾丸 Sc 的分离纯化、体外培养和特征至今未见正式报道...
- 采克俊张易祥丁海雷丁志丽张念慈刘莉
- 关键词：睾丸支持细胞原代培养
- 文献传递
- 鸡原始生殖细胞的分离培养研究
- 原始生殖细胞(PGCs)作为一种多能性胚胎细胞,具有与胚胎干细胞相似的特性,在一定条件下能保持未分化状态和多向分化潜能,具有很高的应用价值。本研究以孵化5．5天的广西土鸡鸡胚为实验材料,用胰酶消化法从性腺中分离获得 PG...
- 丁海雷采克俊丁志丽张易祥张念慈刘莉
- 关键词：原始生殖细胞体外培养
- 文献传递
- 鸡胚睾丸支持细胞的分离、纯化与鉴定被引量：3
- 2008年
- 以18天鸡胚睾丸为实验材料,经胶原酶和胰蛋白酶两步酶消化法得到生精上皮细胞悬液。在原代培养过程中经差异贴壁和低渗处理后,获得了纯度约为90%的单层支持细胞。对纯化的培养物染色鉴定,结果显示支持细胞为碱性磷酸酶(AKP)阴性,而混杂在其中的另一种体细胞管周细胞为AKP阳性;油红O染色显示,支持细胞胞质内含有大量的脂肪滴,核内见双极小体;吖啶橙染色证实支持细胞富含RNA;罗丹明123染色显示支持细胞富含线粒体;Hoechst33342染色显示支持细胞细胞核呈长卵圆形,核的长轴与细胞长轴平行;免疫荧光染色显示支持细胞胞质中表达波形蛋白。建立了一套简单、易行的鸡胚睾丸支持细胞分离纯化与鉴定方法。
- 采克俊刘莉丁海雷张易祥丁志丽张念慈
- 关键词：鸡胚睾丸支持细胞纯化
- MxA抗病毒基因在鸡体内的表达
- Mx 蛋白是干扰素诱导表达的一种抗病毒蛋白,至今已在多种动物体内发现此类蛋白质,包括禽类。但鸡 Mx 蛋白的抗病毒活性受631位氨基酸的影响,当631位氨基酸为天冬酰胺时有抗病毒活性,为丝氨酸时则无抗病毒活性。人的 Mx...
- 何湃刘莉张易祥采克俊丁志丽张念慈
- 文献传递
- 白消安去除公鸡精原干细胞的研究
- 精原干细胞移植技术对于研究睾丸内精子的发生和睾丸内细胞相互作用提供了独一无二的途径,同时, 该技术还可用来制备转基因动物、治疗人类精子异常或用于有重要经济价值或濒危动物的繁殖。供体精原干细胞在受体睾丸内能否有效存活、迁移...
- 陈云波张易祥张念慈采克俊刘莉
- 关键词：白消安精原干细胞
- 文献传递
- 第28期鸡胚原始生殖细胞的分离培养被引量：1
- 2009年
- [目的]进一步优化生殖细胞(PGCs)细胞体外培养条件。[方法]从第28期(5.5 d)鸡胚生殖嵴分离PGCs,将PGCs与性腺基质细胞共培养进行原代培养,比较2种培养温度和3种培养浓度对PGCs原代培养的影响,以及2种饲养层细胞对PGCs传代培养的影响,并通过倒置显微镜下形态学观察、碱性磷酸酶(AKP)和过碘酸希夫反应(PAS)染色方法鉴定PGCs。[结果]培养浓度为2.5×105个/m l和培养温度为37℃时PGCs增殖较多,不易分化,存活能力较强,以第2代鸡胚成纤维细胞作饲养层时传代培养效果较好,获得了PGCs增殖的未分化集落,为后期的细胞标记及移植研究提供了较多数量和较高活力的PGCs。[结论]获得了PGCs原代与传代培养较好的培养体系,为禽类EG细胞系的建立和转基因研究奠定了基础。
- 丁志丽采克俊刘莉张易祥张念慈
- 关键词：鸡胚原始生殖细胞
- 禽类胚胎干细胞的研究进展被引量：5
- 2008年
- 采克俊周国庆李连茅张易祥张念慈刘莉
- 关键词：胚胎干细胞禽类产品STEM分化潜能增殖能力发育分化
- 鸡精原干细胞分离与体外培养的初步研究
- 精原干细胞(SSCs)是指既能自我更,又能定向分化,最终形成精子的一类成体干细胞。由于其在转基因动物生产、种质资源保存及治疗不育症等方面有着诱人的前景,已经成为干细胞研究领域的一个热点。不过,目前对 SSCs 的研究主要...
- 采克俊丁海雷丁志丽张易祥张念慈刘莉
- 关键词：精原干细胞体外培养
- 文献传递
- 精原干细胞的分离纯化方法被引量：10
- 2008年
- 采克俊张易祥丁志丽丁海雷张念慈刘莉
- 关键词：精原干细胞分离纯化方法遗传资源保护精子细胞增殖分化生精细胞
