宁亚蕾
- 作品数：31 被引量：49H指数：4
- 供职机构：第三军医大学野战外科研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 新月柄杆菌RsaA分泌系统用于大肠杆菌胞外递送重组蛋白的初步研究被引量：2
- 2008年
- 目的:构建基于新月柄杆菌RsaA外运机制的以大肠杆菌为宿主的原核胞外分泌表达载体系统。方法:利用分子克隆手段,按RsaA分泌系统操纵子组织方式,将RsaA系统外运功能基因配合以异源调控序列克隆至pQE30骨架质粒。以绿色荧光蛋白(GFP)为报告分子、大肠杆菌M15为宿主菌,诱导表达后通过Western Blotting检测培养上清中GFP的表达。结果:获得了与设计完全一致的pQABPS载体,利用该载体系统,在培养上清中报告分子GFP的表达明显增加,且是通过特异的RsaA外运机制被分泌至胞外的,而非渗漏表达或简单的信号肽引导。结论:在大肠杆菌中重现了RsaA分泌系统的外运功能,为该系统在基因工程领域的应用研究打下了良好基础。
- 宁亚蕾周立雄肖斌张卫军曾浩毛旭虎邹全明
- 关键词：大肠杆菌
- 胞外分泌型表达系统pES2c及其制备方法
- 本发明公开了一种胞外分泌型表达系统pES2c及其制备方法。本发明利用DNA操作技术，获得所需的RsaA分泌系统功能基因及调控序列，基于相容质粒pQE30/pBIOEx，按照RsaA分泌系统功能基因的野生型组织方式安排其在...
- 邹全明宁亚蕾周立雄毛旭虎郭刚杨珺肖洁张卫军
- 文献传递
- 人ski基因真核表达载体、制备方法及其应用
- 本发明涉及一种人ski基因真核表达载体、制备方法及其应用。该人ski基因真核表达载体包含载体pUC118片段和人ski基因片段。本发明还涉及该人ski基因真核表达载体的制备方法及其在制备促进组织修复、伤口愈合及抑制瘢痕形...
- 周元国李平彭艳赵晓光刘苹熊仁平陈磊陈星云赵艳宁亚蕾杨楠
- 文献传递
- 小鼠颅脑创伤急性期腺苷A2A受体对垂体-肾上腺轴应激反应的影响被引量：3
- 2013年
- 目的研究腺苷A2A受体在中度颅脑创伤急性期垂体-肾上腺轴应激反应中的作用。方法将野生型、基因敲除小鼠各18只按随机数字表法分别分为正常对照组、伤后4，24h组，每组6只。使用腺苷A2A受体基因敲除小鼠和野生型C57BL／6小鼠复制颅脑创伤模型，ELISA法测定伤后4h和24h血浆中促肾上腺皮质激素（adrenoeorticotropichormone，ACTH）和皮质酮浓度。结果野生型伤后4，24h组脑含水量分别为（80．950±0．184）％、（82．178±0．255）％，基因敲除伤后4，24h组脑含水量分别为（80．006±0．199）％、（81．091±0．295）％，均高于各自对应的正常对照组（P〈0．01），且野生型损伤组脑含水量高于基因敲除损伤组（P〈0．01）。基因敲除正常对照组血浆ACTH浓度为（120．2144-2．472）ng／L，皮质酮浓度为（27．814±0．888）μg/L，均高于野生型正常对照组（91．767±7．395）ng／L和（11．430±0．644）μg/L（P〈0．01）。基因敲除损伤组血浆ACTH浓度4h为（174．776±5．040）ng／L，24h为（189．613±4．802）ng／L；皮质酮浓度4h为（40．138±0．805）μg/L，24h为（37．440±0．485）μg/L。野生型损伤组血浆ACTH浓度4h为（119．594±6．945）ng／L，24h为（124．93±11．0017）ng／L；皮质酮浓度4h为（19．702±0．804）μg/L，24h为（17．602±0．743）μg/L，基因敲除损伤组增高幅度显著高于野生型损伤组（P〈0．05）。结论敲除腺苷A2A受体在中度颅脑创伤急性期可增加ACTH和皮质酮释放，对垂体一肾上腺轴应激反应有促进作用，为敲除A2A受体发挥神经保护作用提供了新的解释。
- 杨楠宁亚蕾陈惺张岫竹代维赵艳周元国
- 关键词：受体腺苷A2A
- 显微切割联合全自动Western blot在小鼠大脑标记神经元微量蛋白定量中的应用被引量：1
- 2018年
- 目的构建及评价收集特定部位的标记神经元,对这类神经元的微量蛋白水平采用定量的方法,并将此方法初步应用于小鼠颅脑创伤后海马亚区神经元中。方法硫堇染色未固定处理的冰冻切片脑组织神经元,激光显微切割收集海马CA1区和DG区神经元,全自动毛细管Western blot检测收集细胞的磷酸化蛋白激酶A(p-PKA)蛋白水平。结果全自动毛细管Western blot对低浓度蛋白的检测下限低于传统Western blot 1个数量级,其线性相关系数为98. 85%,日内和日间精密度分别为2. 50%和4. 09%。本方法应用于颅脑创伤小鼠脑组织,发现伤后1 d海马DG区神经元p-PKA显著增高(P <0. 01),CA1区无变化。结论本方法基于激光显微切割和全自动毛细管Western blot,能够实现精确收集指定神经元并准确定量微量蛋白,成功应用于目标神经元蛋白定量,具有在细胞类型众多且混杂分布的组织中进行细胞和分子水平研究的应用前景。
- 杨楠谭思维彭艳周元国宁亚蕾
- 关键词：激光显微切割
- ROCK1在地塞米松抑制中性粒细胞释放和单核细胞黏附中的作用
- 2012年
- 目的探讨ROCK1在地塞米松(dexamethasone,Dex)抑制中性粒细胞释放和单核细胞黏附中的作用。方法检测地塞米松和法舒地尔(Fasudil,Fas)抑制佛波脂(PMA)诱导的中性粒细胞释放超氧化物阴离子(O2-)和髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)以及U937单核细胞黏附的程度,并检测ROCK1和RhoA的表达和活性改变。此外观察糖皮质激素受体拮抗剂——米非司酮(mifepristone,M)和蛋白质合成抑制剂——放线菌酮(cycloheximide,C)对地塞米松这些作用的影响。实验分组:对照组、PMA组、PMA+Dex组、PMA+Dex+M组、PMA+Dex+C组和PMA+Fas组。结果地塞米松可以显著抑制中性粒细胞释放O2-和MPO[(1.25±0.10)vs(1.95±0.10);(1.07±0.06)vs(1.75±0.08),P<0.05],而法舒地尔对其无明显抑制作用(P>0.05)。地塞米松和法舒地尔均可抑制U937细胞黏附[(0.09±0.01)vs(0.08±0.01)vs(0.28±0.06),P<0.05]。米非司酮和放线菌酮并不能影响地塞米松的这些作用(P>0.05)。结论地塞米松以非ROCK1依赖方式抑制中性粒细胞释放;以ROCK1依赖方式通过非基因组效应抑制U937单核细胞的黏附。
- 刘冬熊仁平陈星云李平宁亚蕾彭艳赵艳杨楠周元国
- 关键词：地塞米松非基因组效应
- 原核融合表达载体的设计、构建及应用被引量：7
- 2008年
- 目的利用EspA(肠出血性大肠杆菌O157:H7Ⅲ型分泌蛋白A)作为融合伴体分子,构建一种高效原核融合表达载体。方法在EspA的羧基端设计一Linker,包括柔韧区,肠激酶酶切位点和多克隆位点。PCR分别扩增EspA、Linker基因,利用重叠延伸PCR技术获得二者融合基因,T-A克隆后插入表达载体pET-28a(+),构建高效原核表达载体-pEspA。分别将IL-24、GFP等六种基因克隆入pEspA,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导融合蛋白表达,SDS-PAGE检测融合蛋白。以EspA单克隆抗体亲和层析柱纯化融合蛋白,融合蛋白经肠激酶酶切后再通过Ni2+亲和层析柱获得外源蛋白。分别利用MTT法和紫外光激发实验鉴定IL-24、GFP生物学活性。结果构建的表达载体pEspA可高效表达外源目的蛋白,使本身不表达或表达量低的目的蛋白获得高效表达。先以EspA单克隆抗体亲和层析一步纯化获得高纯度的融合蛋白,融合蛋白经肠激酶酶切后再以Ni2+亲和层析柱获得了外源蛋白,同时生物学活性实验显示纯化的IL-24、GFP具有较好的生物学活性。结论成功构建了基于EspA的新型高效原核融合表达载体,为蛋白的融合表达及纯化又提供了一种可供选择的工具。
- 程琰毛旭虎王庆旭余抒刘艳青张晓丽宁亚蕾邹全明
- 关键词：融合表达载体肠出血性大肠杆菌O157:H7
- 基于新月柄杆菌RsaA分泌机制的高效通用胞外分泌表达系统pQABPS/E.coli M15的构建及应用研究
- 缺乏高效、稳定、低成本、易纯化的重组蛋白表达系统是目前基因工程药物/疫苗研发、生产和相关生物技术的瓶颈之一。目前的表达载体几乎均以胞浆或周质间隙形式表达重组目的蛋白，存在种种缺陷，给下游工作带来重重困难。例如高表达的重组...
- 宁亚蕾
- 关键词：分泌表达大肠杆菌基因工程疫苗
- 文献传递
- 小鼠颅脑创伤急性期的脑脊液谷氨酸浓度监测
- 颅脑创伤(traumatic brain injury,TBI)的发生率很高,且致残率和致死率居第1位,近年来神经外科逐渐重视颅脑外伤的基础和临床研究。但是目前还没有一种药物通过前瞻性随机双盲临床对照研究证实对TBI具有...
- 杨楠宁亚蕾戴双双周元国
- 关键词：颅脑创伤谷氨酸
- 文献传递
- 人ski基因真核表达载体、制备方法及其应用
- 本发明涉及一种人ski基因真核表达载体、制备方法及其应用。该人ski基因真核表达载体包含载体pUC118片段和人ski基因片段。本发明还涉及该人ski基因真核表达载体的制备方法及其在制备促进组织修复、伤口愈合及抑制瘢痕形...
- 周元国李平彭艳赵晓光刘苹熊仁平陈磊陈星云赵艳宁亚蕾杨楠
