单冰
- 作品数：9 被引量：9H指数：2
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技攻关计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 河南省致死性家族性失眠症家系的流行病学调查及遗传规律研究被引量：2
- 2009年
- 目的调查致死性家族性失眠症（FFI）家系谱特征及家族发病史；分析病例的临床特点和病理学改变；研究FFI家系的流行病学特征及相关基因遗传规律。方法通过7代135名家族成员的流行病学调查，了解家族史、家族迁徙史及发病史；对患者及部分家族成员抽取静脉血进行PRNP基因PCR扩增，序列测定和Nsp I酶切鉴定；尸检采集脑组织进行神经病理学检测和Western blot法PrP^Sc蛋白检测。结果2例确诊患者临床症状典型；11名家族成员死于相似的神经性疾病；32名家族成员血标本检测，其中11人出现PRNP基因178位密码子点突变（D178N），突变检出率34.38％，第129位密码子为甲硫氨酸；病例脑组织海绵样变性和神经元缺失，可检测到PrP^Sc蛋白。结论该家系为FFI家系，病例临床症状典型，病理特征明显。流行病学调查、基因特征分析、神经病理学和Western blot法检测对确立FFI病例和家系有至关重要的作用。
- 张锦韩俊史晓红郭万申夏胜利石琦陈建明赵伟秦谢志强申晓靖李孟磊雷艳军石崧周伟张保云高晨单冰郭燕军王得新许汴利董小平
- 关键词：朊病毒病致死性家族性失眠症家系调查基因突变
- PrP及其缺失突变体与GFAP体外相互作用的初步研究
- 2007年
- 目的研究PrP蛋白与GFAP蛋白是否发生分子间相互作用以及PrP蛋白多肽链中与GFAP蛋白相互作用的区域。方法制备仓鼠脑组织匀浆上清，通过原核表达系统以及体外翻译系统表达了全长的小鼠GFAP蛋白、人PrP蛋白以及各种缺失突变体，利用Pull-down及免疫共沉淀实验检测PrP与GFAP的分子间相互作用。结果不仅重组的GFAP与PrP发生分子间的相互作用，而且脑组织中的GFAP与prpc及Prp也发生相互作用。PrP与GFAP蛋白相互作用的区域位于PrP的C端第91至231位氨基酸。结论PrP及其缺失突变体与GFAP在体外能够发生分子间的相互作用，提示GFAP可能参与朊蛋白的正常生理功能或者朊病毒病的病理过程。
- 董辰方单冰王小凡韩俊董小平
- 关键词：朊病毒分子诊断技术
- 重组人Doppel蛋白的表达及其细胞毒性作用的研究
- 2007年
- Doppel(Dpl)蛋白是新近发现的PrP相关蛋白。根据GenBank公布的人PRNDcDNA序列设计合成特异性引物,用PCR方法从人外周血白细胞总DNA中扩增获得531 bp的人PRND完整基因序列,测序正确后克隆至表达载体,转化大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达重组人Doppel(rhDpl)蛋白。目的蛋白以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的60%以上。表达产物用Ni2+亲和层析柱纯化及羟胺化学裂解法去除标签蛋白,SDS-PAGE检测证实,纯化的rhDpl蛋白相对分子量约为15 kD。Trypan Blue及MTT实验显示,在50μg/mL及以上剂量时,rhDpl蛋白具有抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞生长的作用,在100μg/mL及以上剂量时,rhDpl具有杀伤HeLa细胞的活性,呈现明显的剂量和时间依赖性。Hoechst33342荧光染色观察显示经rhDpl作用的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y呈现出细胞凋亡现象。这些结果提示Dpl蛋白具有体外细胞毒作用,并呈现明显的组织类型特异性。以上工作为进一步了解人Dpl蛋白体内外生物学作用奠定了基础。
- 李萍韩俊单冰雷艳君周伟姜慧英董小平
- 关键词：细胞毒作用
- 血管内皮生长因子的神经保护作用被引量：4
- 2007年
- 血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)是内皮细胞特异性的生长因子,大多数关于VEGF的研究都是致力于其在血管生长方面的作用,而近年来有大量文献报道VEGF具有神经营养和促神经发生作用,它能够直接作用于神经元细胞和神经胶质细胞甚至是神经干细胞,促进其生长及存活。VEGF的多种功能使其和多种神经退行性疾病相关,如阿茨海默病,肌萎缩侧索硬化症,帕金森病等。导入VEGF基因能够改善肌萎缩侧索硬化症、帕金森病动物模型的病情。
- 单冰高晨董小平
- 关键词：血管内皮生长因子神经退行性疾病
- VEGF的ELISA检测方法的建立及在肝癌患者血清检测中的初步应用
- 本文以质粒pBLAST49-hVEGF为模板，PCR扩增出人VEGF-165全长cDNA序列(nt 1-498)，以及其5’-端(nt 1-300)和3’-端(nt 300-498)cDNA序列，插入到His或GST融合...
- 单冰
- 关键词：肝细胞癌外周血VEGF血清检测
- 文献传递
- 蛋白激酶CK2与PrP蛋白的体外相互作用研究
- 2008年
- 为了探讨蛋白激酶CK2与PrP是否存在分子间相互作用,利用RT-PCR方法从人源细胞系SH-SY5YcDNA中分别扩增出蛋白激酶CK2α和CK2β基因,并在E.coli中表达了融合蛋白HIS-CK2α和GST-HIS-CK2β。利用pull-down及免疫共沉淀实验检测PrP与CK2的分子间相互作用。结果显示,重组PrP可与CK2α出现特异性结合,但不与CK2β发生反应。天然状态下脑组织中的CK2与PrPC也发生相互作用。PrP与CK2α亚基相互作用的区域位于PrP的C-端90～231位氨基酸。本研究从分子水平上提供了人重组和天然CK2和PrP蛋白相互作用的实验依据,为深入探讨CK2与朊蛋白作用的生物学意义和在朊病毒病发病过程中的作用提供了科学线索。
- 陈建明高晨石琦高永军雷艳君单冰董辰方王桂荣石崧韩俊董小平
- 关键词：朊蛋白酪蛋白激酶蛋白相互作用
- PrP及其缺失突变体与微管蛋白的体外相互作用的初步研究被引量：1
- 2007年
- 为了进一步确定PrP蛋白与微管蛋白是否发生分子间相互作用以及PrP蛋白多肽链中与微管蛋白相互作用的区域,我们表达纯化了全长的PrP以及PrP蛋白缺失突变体,提取了兔脑组织中天然微管蛋白。利用pull-down及免疫共沉淀方法检测全长PrP及PrP蛋白缺失突变体与微管蛋白是否发生分子间相互作用。结果显示,全长His-PrP23-231能与微管蛋白发生体外相互作用,并首次证实了PrP与微管蛋白相互作用的区域位于PrP N端第23位至91位氨基酸。此研究为进一步研究PrP在神经细胞的主动转运机制以及Prion疾病的发病机制提供了一定的理论基础。
- 董辰方王小凡安润陈建明单冰韩露雷艳君韩俊董小平
- 关键词：微管蛋白分子间相互作用
- 一种基于链霉素沉淀的PrP^(Sc)检测方法的建立被引量：1
- 2008年
- 建立一种新的基于链霉素沉淀的PrPSc的Western blot检测方法,用终浓度为60mmol/L的链霉素处理蛋白酶K消化的PrPSc贮存液,通过离心沉淀PrPSc,用Western blot对PrPSc的链霉素富集效果进行检测。结果显示,链霉素能够与PrPSc结合形成高分子量复合物,但不影响糖基化形式。此外,基于链霉素沉淀的Western blot,无论是在低浓度或是大容积的条件下,均可显著地提高对PrPSc检测的敏感性。基于链霉素沉淀的Western blot试验是一种敏感、特异、快速及灵活的检测方法,有潜力用于脑组织、外周组织及体液中低水平的PrPSc的检测。
- 董辰方黄银霞安润陈建明王小凡单冰雷艳君韩露张宝云韩俊董小平
- 关键词：朊病毒WESTERNBLOT分子诊断技术
- 血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的:制备血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体(mAb),并对其特性进行鉴定。方法:以重组His-Trx-VEGF1-165蛋白为抗原,通过免疫、融合、克隆和筛选等方法制备VEGF mAb,制备小鼠腹水并测定其效价、染色体数目及免疫球蛋白亚类,用Western blot方法分析其特异性。结果:成功筛选出能稳定分泌的VEGF mAb杂交瘤细胞株4E4-H5,制备腹水的ELISA效价为1∶106;染色体数目为105条;抗体分型为IgG1亚型,κ轻链;Western blot证实所获得的mAb可与VEGF全长蛋白发生特异性反应,但是与融合蛋白的标签蛋白His-Trx不发生反应。结论:制备的杂交瘤细胞株能稳定分泌高滴度和高特异性的VEGF mAb,为建立能够用于肝癌诊断的血清VEGF检测技术提供了参考。
- 石琦单冰高晨姜慧英张宝云韩俊董小平
- 关键词：血管内皮生长因子单克隆抗体酶联免疫吸附试验
