龙凯
- 作品数：28 被引量：251H指数：11
- 供职机构：江西中医药大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江西省教育厅科学技术研究项目国家中医药管理局度中医药行业科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 半夏曲炮制过程中微生物数量动态变化的初步分析被引量：3
- 2019年
- 目的:检测半夏曲炮制过程中细菌、酵母菌、霉菌的菌落数量并定量分析其中4种优势微生物数量的动态变化,为研究半夏曲炮制机制提供实验依据。方法:参照《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂》(第十册)制备半夏曲,取半夏曲炮制过程中0,30,60,90,120 h共5个不同时间点样品,分别用选择性培养基进行细菌、霉菌、酵母菌的培养和分离纯化,并进行菌落计数;应用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术对枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis,宛氏拟青霉Paecilomyces variotii,丝衣霉菌Byssochlamys spectabilis,黑曲霉Aspergillus niger进行绝对定量,分别以枯草芽孢杆菌、宛氏拟青霉、丝衣霉菌、黑曲霉重组质粒为对照品,经倍比稀释后制作标准曲线,对半夏曲炮制至5个不同时间点(0,30,60,90,120 h)样品中的4种微生物进行定量分析。结果:半夏曲炮制过程中细菌数量少且变化平缓,而酵母菌和霉菌数量至发酵后期时迅速增加,至发酵结束时均>1×10^6CFU·m L^-1。枯草芽孢杆菌5个不同时间点样品中的拷贝数分别为3.53×10^5,7.56×10^4,1.58×10^5,1.90×10^6,1.85×10^6copies·g^-1;宛氏拟青霉的拷贝数为0,0,0,3.45×10^7,4.15×10^8copies·g^-1;丝衣霉菌的拷贝数为0,0,0,1.04×10^8,2.28×10^8copies·g^-1;黑曲霉的拷贝数为0,0,9.48×10^5,1.47×10^6,7.56×10^6copies·g^-1。结论:半夏曲炮制过程中微生物菌群变化趋势可以用4种优势微生物的动态变化来反映,霉菌在半夏曲炮制中可能起重要作用。荧光定量PCR技术具有快速灵敏、重复性好和特异性高的优点,适用于半夏曲的炮制机制研究。
- 龙凯王立元郭佳佳翁美芝谢卫华苏明声杨明谢小梅
- 关键词：半夏曲菌群变化优势菌种黑曲霉
- TLR4基因的沉默下调了NOD1信号通路在RAW264．7细胞中抗烟曲霉孢子刺激作用被引量：3
- 2012年
- 为研究单核巨噬细胞RAW264.7受烟曲霉孢子刺激时NOD1和TLR4信号通路在细胞处于正常状态和免疫抑制状态时发挥的作用,以及沉默TLR4基因后对NOD1信号通路的影响,通过建立细胞免疫抑制模型,利用RNAi技术将TLR4-siRNA转染细胞24h后给予烟曲霉孢子刺激12h,运用RT-PCR和Western blot法检测细胞受烟曲霉孢子刺激后NOD1,TLR4,RIP2,MyD88 mRNA及TNF-α蛋白表达变化.研究发现:(1)给予RAW264.7细胞含免疫抑制剂甲泼尼龙琥珀酸钠浓度为0.04mg/mL的RPMI1640培养液培养12h后,细胞抑制效果最佳,存活率约为90%.(2)正常RAW264.7细胞受烟曲霉孢子刺激时,NOD1和TLR4信号通路被激活,通过释放促炎细胞因子TNF-α发挥抗烟曲霉孢子刺激作用,当细胞处于免疫抑制状态时,NOD1和TLR4信号通路不能激发其有效的免疫应答.(3)TLR4-siRNA转染RAW264.7细胞,沉默效率达83%.(4)TLR4基因的沉默,使NOD1信号通路不能被很好地激活来抵抗烟曲霉孢子对细胞的刺激作用,表明沉默TLR4基因下调了NOD1信号通路在RAW264.7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用.
- 饶振华谢卫华苏明声龙凯罗闳丹谢小梅
- 再闷过程影响淡豆豉炮制工艺研究被引量：26
- 2014年
- 目的优化淡豆豉的发酵炮制工艺,明确再闷过程是淡豆豉发酵炮制中不可缺少的重要环节。方法按《中国药典》2010年版制法结合古法炮制,以总异黄酮及大豆苷元和染料木素质量分数为考察指标,结合成品性状（色泽、气味、皱缩程度以及断面和硬度）为感官指标,优化炮制过程中再闷前（包括蒸煮时间、发酵温度、发酵时间）和再闷过程（包括再闷温度、再闷时间）的炮制工艺参数。结果优化的炮制工艺为黑大豆在吸尽药液后蒸煮1.5 h,（30±2）℃条件下发酵6~8 d至黄衣上遍;洗去黄衣后,置于容器内,用水密封,进入再闷过程：置于温度为（30±2）℃的培养箱内再闷12~15 d。再闷期间每3天倒出,翻动,稍晾干,反复4~5次,最后略蒸,干燥。经过再闷的淡豆豉其品质较未经再闷过程的淡豆豉具有明显优势,其成品具有芳香气味,色泽光亮,质地柔软,断面为棕黑色,表皮皱缩;总异黄酮及大豆苷元和染料木素质量分数也达到最高值。结论再闷过程是淡豆豉发酵炮制中不可缺少的重要环节,是影响淡豆豉主要化学成分量和成品性状改变的关键因素,优化后的淡豆豉炮制工艺将为指导淡豆豉规范化生产、研究淡豆豉的发酵炮制机制奠定基础。
- 李刚梁永红龙凯杨安金苏明声谢小梅
- 关键词：淡豆豉异黄酮大豆苷元染料木素
- 桦褐孔菌菌质提取物对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制作用研究被引量：8
- 2017年
- 目的:研究桦褐孔菌菌质不同溶剂提取组分对α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶的抑制作用。方法:将桦褐孔菌菌质醇提后分别梯度萃取获得石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水提物,将残渣沸水浸提醇沉得粗多糖;将获取的各活性组分分别用于α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定,同时与桦褐孔菌菌核进行比较。结果:桦褐孔菌菌质和菌核各组分对α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶均有一定的抑制作用,且随其质量浓度的递增而增强(其中石油醚提取组分的抑制率为0);菌质和菌核粗多糖组分对这两种酶的抑制作用明显优于各自的其它组分(P<0.01);菌质粗多糖对这两种酶的抑制率比菌核粗多糖低(P<0.05)。结论:运用双向固体发酵技术获得的桦褐孔菌菌质粗多糖有较好的抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的作用。
- 李东文苏明声龙凯梁永红谢小梅
- 关键词：Α-淀粉酶Α-葡萄糖苷酶
- TLR4基因沉默下调TLR2信号通路在RAW264．7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用被引量：2
- 2012年
- 目的研究单核巨噬细胞RAW264．7受烟曲霉孢子刺激时，TLR2和TLR4信号通路发挥的作用，以及沉默TLR4基因后，对TLR2信号通路的影响。方法利用RNAi技术将11LR4-siRNA转染RAW264．7细胞24h后给予烟曲霉孢子刺激12h，将细胞随机分为正常组（N组）、正常＋烟曲霉孢子刺激组（N＋Af组）、正常＋TLR4-siRNA组[TLR4（RNAi）组]、正常＋TLR4-siRNA＋烟曲霉孢子刺激组[TLR4（RNAi）＋Af组]，RT-PCR和Westernblot法检测细胞受烟曲霉孢子刺激后TLR2、TLR4、MyD88mRNA及TNF-α蛋白的表达变化。结果（1）TLR4基因沉默前：与N组比较，N＋Af组TLR2、TLR4、MyD88mRNA及TNF．Ot蛋白表达量均显著升高（P〈0．05）。（2）TLR4-siRNA（100nmol／L）转染RAW264．7细胞，沉默效率达83％。（3）TLR4基因沉默后：与N组比较，TLR4（RNAi）组TLR2、MyD88mRNA的表达量均显著降低（P〈0．05）；与N＋缈组比较，rrLR4（RNAi）＋4厂组的TLR2、MyD88mRNA和TNF-α蛋白的表达量均显著降低（P〈0．05）；与TLR4（RNAi）组比较，TLR4（RNAi）＋A厂组MyD88mRNA表达量显著升高（P〈0．05），而TLR2mRNA及TNF．仪蛋白表达量却无显著变化（P〉0．05）。结论RAW264．7细胞受烟曲霉孢子刺激时，TLR2和TLR4信号通路被激活，通过释放促炎细胞因子TNF-α发挥抗烟曲霉孢子刺激作用；当沉默TLR4基因后，TLR2信号通路不能被很好地激活来抵抗烟曲霉孢子对细胞的刺激作用，沉默TLR4基因下调了TLR2信号通路在RAW264．7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用，可能TLR4较TLR2在抵抗烟曲霉孢子刺激时发挥更重要的作用。
- 饶振华朱根华谢卫华苏明声龙凯罗闳丹谢小梅
- 肉桂醛和柠檬醛对黄曲霉及烟曲霉细胞DNA与RNA的影响被引量：40
- 2005年
- 目的研究肉桂醛、柠檬醛对黄曲霉和烟曲霉细胞DNA、RNA水平的影响,以期探明其抗真菌的作用机制。方法黄曲霉、烟曲霉接种在含有不同浓度药物的蔡氏固体培养基中,同时设不加药物为空白对照,置26.5℃恒温培养3～6d,将对照组和用药组真菌细胞进行激光扫描共聚焦显微镜观察并作细胞扫描图像分析,以对DNA、RNA进行定量和定位观察。结果用药组DNA、RNA水平发生不同变化,出现多核分生孢子。结论肉桂醛、柠檬醛直接或间接影响了真菌细胞遗传物质的正常合成,以至不能完成正常细胞周期,影响分生孢子梗的正常分化,从而抑制真菌生长、繁殖。
- 谢小梅龙凯许杨方建茹
- 关键词：肉桂醛柠檬醛黄曲霉烟曲霉RNA
- 淡豆豉炮制中产γ-氨基丁酸微生物在不同pH值和不同温度下产酶能力比较研究被引量：4
- 2020年
- 目的阐明淡豆豉炮制中微生物调控γ-氨基丁酸(γ-amino butyric acid,GABA)的形成机制。方法采用Berthelot比色法、福林酚法测定枯草芽孢杆菌、鸟肠球菌、屎肠球菌、解淀粉芽孢杆菌、黑曲霉、黄曲霉、溜曲霉、桔青霉、极细支孢霉、白腐菌、米根霉、鲑色锁掷酵母菌12种微生物在不同pH值和不同温度条件下产谷氨酸脱羧酶(glutamicacid decarboxylase,GAD)、蛋白酶(中性蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶)能力。结果 12种微生物在pH 5~7、28~37℃时产GAD和蛋白酶酶活较高。其中黄曲霉产GAD酶活最高,为41.97 U/h,最适pH 7、温度28℃;其次是鲑色锁掷酵母菌、黑曲霉、米根霉、枯草芽孢杆菌,酶活分别为29.04、25.78、22.42、19.43 U/h。枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶活最高,为24.80 U/mL,最适pH 7、温度37℃;其次是解淀粉芽孢杆菌、米根霉、鸟肠球菌,酶活分别为16.86、12.51、9.18 U/mL。解淀粉芽孢杆菌产碱性蛋白酶活最高,为13.29U/m L,最适pH7、温度34℃;其次是枯草芽孢杆菌、米根霉,酶活分别为8.86、6.20 U/mL。12种微生物产酸性蛋白酶能力普遍较差。结论所选的12种微生物产酶最适pH值、温度与淡豆豉自然炮制基本一致,其中真菌有较强的产GAD能力,细菌有较强的产中性蛋白酶能力,淡豆豉高富集GABA是多菌种共同作用所致。
- 周姝含黄越燕熊京京刘宇星苏明声王立元龙凯谢卫华谢小梅
- 关键词：淡豆豉Γ-氨基丁酸微生物溜曲霉桔青霉米根霉
- 高良姜、草果防霉作用的实验研究被引量：38
- 2002年
- 观察高良姜、草果的防霉作用。方法:测定高良姜、草果挥发油对６种霉菌的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度。结果:高良姜、草果挥发油有明显的抗霉菌作用。结论:高良姜、草果是高效、安全、价廉的天然防霉药物,可广泛用于食物、中药材及其制品等的防霉。
- 谢小梅龙凯钟裔荣陈和利
- 关键词：高良姜草果
- 不同产地淡豆豉多指标成分含量测定的质量和安全性评价
- 2024年
- 目的对自制和不同产地来源的12个淡豆豉样品进行性状、显色鉴别和多指标成分含量测定,为完善淡豆豉药材质量和安全性评价提供参考。方法根据2020年版《中国药典》淡豆豉项下的性状、显色鉴别方法对淡豆豉进行鉴别,用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)和超高效液相色谱-串联质谱法(Ultra Performance Liquid Chromatography Mass Spectrometry,UPLC-MS/MS)测定各样品中大豆苷元、染料木素、γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(GLu)和黄曲霉毒素(AFTs)含量。结果12个淡豆豉样品性状均符合药典标准,显色鉴别中9个样品显紫红色反应,3个不符合药典规定。不同产地淡豆豉的大豆苷元、染料木素、GABA和GLu含量差异较大,大豆苷元、染料木素总量依次是安徽3(SSP6)>江西3(SSP3)>自制淡豆豉(SSP0),分别为1.992、1.713 mg/g和1.673 mg/g;GABA含量依次为自制淡豆豉(SSP0)>安徽3(SSP6)>四川(SSP10),分别为7.940、5.336 mg/g和2.145 mg/g,另有4个样品的大豆苷元、染料木素总量不符合药典规定,且它们的GABA含量很低;有6个样品检测出AFTs,其中2个样品超出药典限量标准,分别为安徽1(SSP4)和安徽3(SSP6),SSP4的AFB1、AFB2含量最高分别为6.48,0.63μg/kg。结论各产地淡豆豉品质良莠不齐,存在一定安全隐患。新引入的活性成分GABA和AFTs含量测定可作为淡豆豉质量优劣和安全性评价的指标。
- 李刚李翠英戴家齐杨安金杨安金龙凯周立分谢小梅
- 关键词：淡豆豉大豆苷元染料木素Γ-氨基丁酸黄曲霉毒素高效液相色谱超高效液相色谱-串联质谱
- 富集γ-氨基丁酸的淡豆豉纯种发酵方法及淡豆豉和应用
- 本发明适用于发酵技术领域，提供了一种富集γ‑氨基丁酸的淡豆豉纯种发酵方法及淡豆豉和应用，该淡豆豉的纯种发酵方法包括以下步骤：将桑叶和青蒿进行混合，用水煎煮，得到煎煮液和药渣；将黑大豆置于煎煮液中进行浸泡后，再与药渣进行混...
- 谢小梅杨明熊京京龙凯苏明声马书伟谢小琴
