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抗CD20嵌合抗体的构建与表达被引量：7: 2006年; 目的构建抗CD20嵌合抗体的真核表达载体并实现在真核细胞中的表达。方法采用RT-PCR,从分泌鼠源抗人CD20抗体的杂交瘤细胞系1-28中钓取其轻、重链基因,连接至T载体,进行序列测定。还原SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离抗CD20单克隆抗体(mAb)1-28的轻、重链蛋白,切取轻链及重链条带,质谱测定氨基酸序列,Biolynx和pepeseq软件分析可信度。对比所测DNA序列与蛋白序列,确定所钓取基因的正确性。将mAb1-28轻重链可变区基因,连接至表达载体pCMV-VH和pCMV-VL,构建成嵌合抗体C1-28的轻链真核表达载体C1-28L及重链真核表达载体C1-28H。PCR、酶切及序列测定以确定连入基因的正确性。脂质体介导法将嵌合抗体的轻重链真核表达载体共转染入293T细胞,RT-PCR检测mRNA水平的表达,夹心ELISA法检测蛋白表达量,Westernblot检测目的蛋白的大小。结果钓取到mAb1-28基因。mAb部分蛋白序列测定结果与根据所钓取基因推出的蛋白序列相对应。成功构建了嵌合抗体的真核表达载体,并实现真核表达,表达量可达257mg/L,其相对分子质量(Mr)与人IgG的Mr一致。结论为后续研究嵌合抗CD20抗体对非霍奇金淋巴瘤的治疗提供了一定的依据。; 王玉刚黄英谷欣于鸣冯健男孙瑛勋黎燕沈倍奋; 关键词：杂交瘤质谱分析嵌合抗体

基因工程产品中CHO细胞蛋白残余量测定方法的建立被引量：1: 1999年; 目的：建立简便、快速、高灵敏度的基因工程产品中ＣＨＯＤＨＦＲ－细胞蛋白的检测方法。方法：以基因工程用宿主细胞ＣＨＯＤＨＦＲ－的全细胞蛋白和该细胞培养上清浓缩蛋白的混合物，免疫家兔制备抗血清，并用间接ＥＬＩＳＡ测定其效价；用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析该抗体的特异性；用该抗体建立直接、间接ＥＬＩＳＡ，分别测定两种检测方法的动力学曲线、检测范围及灵敏度。结果：抗ＣＨＯＤＨＦＲ－细胞蛋白的抗血清效价为２×１０－７，该抗体只与ＣＨＯＤＨＦＲ－细胞蛋白起反应，不与基因工程产品ＥＰＯ起反应；用该抗体建立的直接、间接ＥＬＩＳＡ法检测范围较宽，灵敏度小于１μｇ／Ｌ。结论：建立了高灵敏度、高特异性、操作简单、快速，可检测基因工程产品中ＣＨＯ细胞蛋白残余量的两种ＥＬＩＳＡ法。; 邓瑞春张明伟白云秀汪劲松黄英毛宁; 关键词：ELISA 促红细胞生成素贫血

大容量天然噬菌体抗体库的建立及多样性初步验证被引量：2: 2008年; 目的:构建超大容量天然噬菌体抗体库。方法:从正常人外周血和新生儿脐血中分离淋巴细胞(>180份),提取RNA,用RT-PCR分别扩增抗体可变区轻重链基因(VH和VL),通过重叠PCR技术将VH和VL连接为单链抗体ScFv形式,克隆插入到pDF噬菌粒载体,转化XL1-Blue细菌得到ScFv初级抗体库,并以高感染复数(MOI≥100)感染Cre+菌株BS1365,利用Cre/LoxP位点特异性重组原理,使VH和VL基因定向同源重组匹配,随后以低感染复数(MOI<1)感染XL1-Blue,获取次级工作库。分别用5种不同抗原进行筛选,所获阳性克隆送测序以获取抗体基因。结果:抗体V区基因得到有效扩增,初级库库容3.6×107,工作库容1.8×1011,5种不同抗原筛选均得到特异性结合噬菌体抗体;测序结果表明,所获取抗体涵盖了不同的基因亚群,进一步证明抗体库具有良好的多样性。结论:经Cre/Loxp定位重组系统成功构建了超大容量天然噬菌体抗体库,初步尝试对5种抗原进行筛选均获成功,提示该抗体库多样性较好,可用于制备人源抗体。; 王辉黄英王琰沈倍奋; 关键词：噬菌体抗体库 CRE/LOXP重组系统单链抗体

新型抗CD20嵌合抗体TGLA体内、外活性的研究: ＜正＞目的:针对B细胞非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin’s lymphoma,NHL）的表面抗原CD20分子,已有三种抗体成功应用于临床,分别是美罗华（Rituximab）、Zevalin（放射性核素90Y与美罗华...; 耿树生孙瑛勋谷欣王玉刚冯健男黄英沈倍奋黎燕; 关键词：CD20 抗CD20抗体 B淋巴细胞瘤肿瘤模型; 文献传递

不同细胞因子基因转导对小鼠B16细胞体内生长及免疫原性的影响被引量：2: 1999年; 目的：通过比较不同细胞因子基因转导对肿瘤细胞体内生长及对机体免疫活性的影响，探讨其可能的作用机制及因子间的协同效果。方法：采用逆转录病毒介导的方法将ＩＬ６／ＩＬ２融合基因及ＩＬ６、ＩＬ２单基因分别导入小鼠Ｂ１６黑色素瘤细胞中，检测基因修饰瘤细胞体内成瘤及对机体ＬＡＫ、ＣＴＬ活性的诱导。结果：三种基因修饰的肿瘤细胞均可表现出体内生长抑制及免疫原性增强，但融合基因转导细胞的改变，较单一基因修饰细胞更为明显。; 唐佩弦张明伟黄英彭善云侯春梅刘元林毛宁; 关键词：基因转导肿瘤细胞免疫调控 B16细胞

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黄英