黄扬中
- 作品数：8 被引量：7H指数：2
- 供职机构：中国人民解放军第一军医大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Ribozyme阻断体内基因表达的研究
- 1995年
- 利用ribozyme专一水解RNA的特性,设计ribozyme定点切割基因表达的中间物mRNA以及病毒RNA,可以阻断基因表达和抑制病毒复制,从而达到治病和防病的目的。自1990年以来,利用ribozyme技术,已经对爱滋病、肿瘤等疾病进行了大量的研究。本文着重介绍ribozyme体内阻断基因表达的应用和一些规律性问题。
- 张晓岚黄扬中祁国荣
- 关键词：RIBOZYME基因治疗基因表达
- 抗HPV16 E7-ribozyme在CV-1细胞中的稳定表达被引量：1
- 1996年
- 构建了由RSV-LTR启动子带动并能在细胞内稳定复制的Ribozyme的自身修剪表达质粒pRSV-Rz523、Ribozyme反义对照质粒pRSV-AE7及人增殖细胞核抗原基因(PCNA)启动子带动的HPV16 E7片段(+554～+686)的真核表达质粒pPCNA-E7。经G418抗性筛选获得了稳定表达Ribozyme的CV-1细胞克隆,其表达水平约为9.0pmol/10~6个细胞,其中活性Ribozyme的量大于50fmol/10~6个细胞,分离得到的Ribozyme可在体外特异切割E7靶RNA片段。通过共转染Ribozyme(或反义对照)和底物表达质粒并筛选出细胞克隆,研究了Ribozyme在细胞中对底物表达水平的影响。初步结果显示,Ribozyme的导入可使细胞内底物E7的RNA表达水平降低了90％(反义对照使E7 RNA表达降低20％)。上述结果提示:在CV-1细胞中表达的Ribozyme不仅在体外,同时在细胞内具有一定的生物学活性,有可能应用于逆转宫颈癌细胞的恶性表型。
- 黄扬中孔玉英汪垣祁国荣陆长德
- 关键词：RIBOZYME乳头状瘤病毒子宫颈癌
- 用反向点杂交法诊断生殖道肿瘤中HPV的基因型
- ＜正＞人乳头瘤病毒（HPV）迄今鉴定已有70多型,HPV的分型对于诊断与预后有着十分重要的意义。用目前DNA诊断方法,对未知样本进行基因分型是比较困难的,为此本文建立了反向点杂交法 （RDB）。我们选用了HPV6B,11...
- 齐凤菊徐钤黄扬中
- 文献传递
- 抗HPV16E7－ribozyme的体外制备与活性鉴定被引量：1
- 1996年
- 通过体外转录结合乙醇沉淀，建立了体外大量制备抗ＨＰＶ１６Ｅ７－Ｒｚ的方法。切割实验表明，ｒｉｂｏｚｙｍｅ可在体外准确和有效地切割Ｅ７靶ＲＮＡ，形成８５ｎｔ和８６ｎｔ大小的切割产物。体外制备的ｒｉｂｏｚｙｍｅ的切割活性、Ｋｍ和ｋｃａｔ值与人工合成的相似。结果说明，体外制备的ｒｉ－ｂｏｚｙｍｅ具有特异的催化切割活性。
- 黄扬中祁国荣王昌才陆长德
- 关键词：RIBOZYME人乳头瘤病毒16型活性鉴定
- 抗HPV16E7－ribozyme和靶RNA相互作用的计算机分析被引量：1
- 1996年
- 应用计算机分析了抗ＨＰＶ１６Ｅ７－ｒｉｂｏｚｙｍｅ的体外切割反应结果，发现ｒｉｂｏｚｙｍｅ和靶ＲＮＡ的二级结构及其能量变化能影响ｒｉｂｏｚｙｍｅ的切割活性。根据锤头结构ｒｉｂｏｚｙｍｅ的能量变化模型，对抗ＨＰＶ１６Ｅ７－ｒｉｂｏｚｙｍｅ和靶ＲＮＡ在痘苗表达体系及稳定表达体系中的相互作用，进行计算机模拟分析。结果表明，计算机分析ｒｉｂｏｚｙｍｅ和靶ＲＮＡ在细胞内的相互作用，可以指导ｒｉｂｏｚｙｍｅ的设计和在体内的应用研究。
- 黄扬中陈农安祁国荣王昌才陆长德
- 关键词：RIBOZYME计算机人乳头状瘤病毒RNA
- 核糖核酸和焦炭酸二乙酯修饰影响ribozyme切割活性的初步研究
- 1997年
- 以抗HPV16E7－ribozyme作为研究模型，对影响ribozrme切割活性的一些因素进行了初步探讨。结果发现，核糖核酸（RNA）可以明显影响ribozyme的体外切割活性，且其活性随着加入反应的RNA量和RNA种类的不同而异，细胞内的RNA可能会明显影响ribozyme的体内切割活性。另外，ribozyme的焦炭酸二乙酯修饰也可明显影响ribozyme的切割活性，说明ribozyme保守序列中的腺苷酸（A）对其活性的维持是重要的。
- 黄扬中任秀容祁国荣王昌才陆长德
- 关键词：RIBOZYME修饰
- CV-1细胞内表达的抗HPV16E7-ribozyme的活性鉴定被引量：2
- 1996年
- 近年来的研究证实,人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E6和E7基因表达在人类生殖道肿瘤,特别是宫颈癌的发生及其恶性表型的维持中起着重要作用。我们针对HPV16 E7 mRNA设计的ribozyme经体外实验证明能特异地切割E7 RNA片断,本文利用T7-痘苗病毒表达体系研究了ribozyme在真核细胞内的表达.结果表明,利用痘苗病毒表达系统在CV-1细胞中表达了具有体外切割活性的抗HPV16 E7-ribozyme。同时观察到ribozyme能使细胞内HPV16 E7 RNA的表达水平降低。提示ribozyme在细胞内具有一定的生物学活性,有可能利用ribozyme逆转HPV16阳性的宫颈癌细胞的恶性表型。
- 黄扬中孔玉英汪垣祁国荣陆长德
- 关键词：痘苗病毒
- 反向点杂交法快速检测HPV基因型的临床应用被引量：2
- 1998年
- 应用反向点杂交法（ＲＤＢ）的原理，针对ＨＰＶ６Ｂ，１１，１６，１８，３１，３３和３５设计了７条序列作为未标记的特异性寡核苷酸（ＳＳＯ）探针，分别固定在尼龙膜条上，形成７个点，再与经ＰＣＲ扩增的样品ＤＮＡ序列杂交，即可在一个膜条上分辨出这７型ＨＰＶ中的任一型．此法快速简便，特异性高，不存在假阳性；且因ＰＣＲ灵敏度高，亦不易出现假阴性．用ＰＣＲＲＤＢ法检测保存的宫颈癌组织石蜡包埋标本３２例，结果：ＨＰＶ１６阳性２２例（６８８％），ＨＰＶ１８阳性５例（１５６％），ＨＰＶ１６／１８双重感染２例（６３％），阴性仅３例（９３％）．
- 齐凤菊徐钤黄扬中
- 关键词：反向点杂交聚合酶链反应子宫颈癌
