黄保英
- 作品数：77 被引量：78H指数：5
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学化学工程更多>>
- 基于多重PCR-质谱的18种呼吸道病毒高通量检测引物组、试剂盒和检测方法
- 本发明公开了基于多重PCR‑质谱的18种呼吸道病毒高通量检测引物组、试剂盒和检测方法，属于生物技术领域。本发明针对18种常呼吸道病毒分别设计扩增引物和延伸引物，并开发一种可以同时检测和特异性识别18种呼吸道病毒的高通量方...
- 谭文杰陆柔剑秦影黄保英翟德胜
- 广谱流感疫苗研究进展被引量：6
- 2008年
- 黄保英王文玲阮力
- 关键词：流感疫苗广谱呼吸道传染病流感病毒病毒亚型疫苗接种
- 甲型流感病毒核蛋白在大肠杆菌中的可溶性高效表达与纯化被引量：4
- 2011年
- 为了在大肠杆菌中高效表达甲型流感病毒A/京科/30/95(H3N2)核蛋白NP,以便对原核表达的NP蛋白进行免疫原性研究,本研究通过密码子优化及全基因合成等方法,将3种形式的NP基因:与6×His标签融合的NP基因NP(His)、非融合的野生型NP基因NPwt及非融合的按大肠杆菌优势密码子改造的基因NP(O)分别插入原核表达载体pET-30a,构建了表达3种形式NP基因的3种原核表达质粒并研究不同质粒中NP蛋白的表达形式、条件、纯化工艺及抗原性。限制性酶切反应与测序表明,三种形式的NP基因均正确插入原核表达质粒pET-30a;SDS-PAGE凝胶电泳显示,三种形式的NP基因均能在大肠杆菌中表达,NP(O)基因的表达量最高;在不同温度诱导条件下,NP蛋白呈现可溶性表达,NP(O)基因可溶性高效表达的条件为:T=25℃,t=10 h;经阴离子交换和凝胶过滤层析两步纯化,可溶性表达的NP蛋白纯度可达90%;Western blot检测显示,纯化的NP能与流感病毒A/PR/8/34(H1N1)株感染小鼠的血清发生特异性结合。这些结果表明,非融合表达的密码子优化甲型流感病毒NP蛋白能在大肠杆菌中高效表达和纯化,同时保持良好的免疫反应活性。
- 黄保英王文玲王秀平蒋涛谭文杰阮力
- 关键词：甲型流感病毒核蛋白原核系统密码子优化蛋白质表达
- 表达呼吸道合胞病毒G蛋白胞外区的重组H1N1流感病毒单剂滴鼻免疫可在小鼠诱导强免疫应答与保护
- 2024年
- 目的基于重组流感病毒载体的呼吸道合胞病毒(RSV)疫苗的构建及在小鼠体内的免疫保护效果评价。方法构建并拯救表达RSV A2型G蛋白胞外结构域(Gecto)的重组甲型流感病毒,将其命名为PR8NAGecto/WSN。体外验证重组病毒G蛋白表达与病毒生长动力学后,单剂滴鼻免疫BALB/c小鼠,并评价体液免疫、黏膜免疫与细胞免疫。免疫4周后,分别用RSV A2与RSV B9320进行攻毒,通过小鼠体重变化、肺组织病毒滴度及病理评价免疫保护效果。结果单剂滴鼻免疫PR8NAGecto/WSN能在小鼠体内产生较强的体液免疫、黏膜免疫及细胞免疫。与对照组比较,免疫组小鼠经RSV A2或B9320两个亚型病毒攻毒后肺病毒载量与肺组织病理均明显改善。结论单剂滴鼻免疫重组PR8NAGecto/WSN疫苗可在小鼠体内诱导较强的RSV特异免疫应答与攻毒保护。本研究为新型RSV黏膜疫苗的研发提供新的思路与实验资料。
- 韩瑞雯王东红王瑭琪程雪婷邴佳洛翟程程孙树才邓瑶黄保英谭文杰
- 关键词：呼吸道合胞病毒流感病毒病毒载体G蛋白
- 广谱抗病毒药物吐根碱抑制HCoV-OC43的转录组分析
- 2024年
- 本研究旨在探索吐根碱对人冠状病毒OC43(Human coronavirus OC43, HCoV-OC43)的作用时相和抗病毒机制。首先,在MRC-5细胞上建立了HCoV-OC43病毒的体外感染复制动力学曲线,测定了药物的EC_(50)和CC_(50)。结果表明吐根碱能够在感染早期有效地抑制HCoV-OC43病毒在MRC-5细胞中的复制。通过转录组分析,发现HCoV-OC43感染和吐根碱处理均导致宿主基因表达的紊乱,并且两者共同激活了抗病毒通路。吐根碱可能通过激活OASL、Mx1和IFIT2等抗病毒基因来增强宿主对病毒的抵抗能力。此外,吐根碱还可能通过抑制TMEM41B表达而进一步影响病毒复制过程。这些研究结果为深入探究吐根碱作为抗冠状病毒药物的机制和潜在靶点提供了重要线索。
- 李涵张高倩吴长城张钟贤牛军伟霍恕婷叶飞邓瑶黄保英赵莉沈晓玲谭文杰
- 关键词：吐根碱抗病毒作用转录组学
- 甲型流感病毒病灶形成滴定方法的建立与应用
- 2025年
- 目的建立并优化一种甲型流感病毒(influenza A virus,FluA)滴度检测方法——病灶形成试验(focus forming assay,FFA),并与传统噬斑形成试验(plague forming assay,PFA)应用性能进行比较。方法比较3种过氧化物酶底物在免疫染色中的病灶效果,采用PFA法与FFA法在12孔板上探索FluA培养时间及噬斑形态,并在96孔板上确定不同亚型FluA的最佳孵育时间和优化病毒吸附量。比较优化后FFA法与PFA法的相关性,并将改进优化的FFA法应用于法匹拉韦体外抗病毒药效分析和不同亚型FluA中和抗体检测。结果研究发现,TRUEBLUE显色液是病灶显色的优选底物。FFA法较PFA法在病毒滴定检测中的灵敏度提升且检测时间缩短,2种方法检测结果具有较高的相关性。将96孔板替换12孔板后进行不同亚型FluA的FFA滴定,检出时间可缩短,并通过优化病毒吸附体积,可进一步减少血清样本的使用量。FFA法与PFA法测定的法匹拉韦抗流感病毒半数效应浓度无显著差异,且和荧光定量PCR法检测结果相一致。病灶减少中和试验和血凝抑制试验在抗FluA血清中和抗体滴度测定中也具有良好相关性。结论改进的FFA方法可为FluA滴度测定、抗病毒药物和广谱疫苗评价提供高通量且应用性能更优的实验技术与替代方案。
- 李佳楚巧鸿张菱芳单徐畅王瑭琪韩瑞雯蒋宇婕王东红黄保英邓瑶谭文杰
- 关键词：甲型流感病毒血凝抑制试验抗病毒药物中和抗体
- 石蒜碱在制备广谱抗冠状病毒药物中的应用
- 本发明公开了石蒜碱在制备广谱抗冠状病毒药物中的应用。本发明选用无毒性浓度的石蒜碱进行广谱抗冠状病毒研究，发现石蒜碱能在体外有效抑制β群冠状病毒HCoV‑OC43、MERS‑CoV、MHV‑A59以及α群冠状病毒HCoV‑...
- 谭文杰申梁黄保英牛军伟
- 甲型流感病毒NP和M2e融合蛋白高效表达和纯化
- 2015年
- 目的 探索甲型流感病毒NP-M2e融合蛋白在大肠埃希菌中可溶性高效表达和纯化的条件.方法 将NP-M2e融合基因（NM2e）经密码子优化后插入pET30a后获得pET30a-NM2e原核表达质粒,通过转化BL21（DE3）后的克隆筛选、诱导温度与诱导时间等条件的优化实现NM2e蛋白在大肠埃希菌中的可溶性高效表达;表达产物经离子交换层析与分子筛层析纯化并通过Western-Blot鉴定其抗原性.结果 NM2e基因正确插入pET30a中并能在大肠埃希菌中表达;25℃温度诱导下NM2e蛋白出现可溶性表达,诱导时间由4h延长至10 h可明显提高蛋白表达量;可溶性NM2e蛋白经阴离子交换和凝胶过滤层析两步纯化后的纯度可达90％,纯化产物能特异性结合NP鼠多抗及M2e鼠单抗.结论 甲型流感病毒NM2e融合蛋白能在大肠埃希菌中高效表达和纯化并保持良好的免疫反应活性。
- 黄保英王秀平谭文杰王文玲阮力
- 关键词：流感病毒A型原核细胞蛋白质工程
- 一种人诱导多能干细胞来源小肠类器官的稳定传代方法及其应用
- 本发明属于类器官培养技术领域，具体涉及一种人诱导多能干细胞来源小肠类器官的传代方法及其应用。本发明所述传代方法在以解离试剂温和去除基质胶后，再通过吸头轻微破碎小肠类器官的方法能够保持小肠类器官长程稳定传代，维持小肠类器官...
- 霍威邦谭文杰陆柔剑黄保英朱娜
- 一种高效表达增强型绿色荧光蛋白的重组冠状病毒基因组及其重组冠状病毒的制备方法和应用
- 本发明属于重组病毒及生物医药技术领域，具体涉及一种高效表达增强型绿色荧光蛋白的重组冠状病毒基因组及其重组冠状病毒的制备方法和应用。本发明针对人冠状病毒OC43的基因组的ns2编码区域进行改造，采用部分替代的方式将报告基因...
- 谭文杰黄保英 王梦微叶飞 管琼阁
