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陈华伟
作品数:
1
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供职机构:
山西大学生命科学学院生物技术研究所
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发文基金:
山西省青年科技研究基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
杨斌盛
山西大学分子科学研究所
钮利喜
山西大学分子科学研究所
李娇
山西大学生命科学学院生物技术研...
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陈华伟
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杨斌盛
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2011
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肿瘤基因靶向治疗载体的构建和鉴定
2011年
目的构建并鉴定人端粒酶反转录酶(human telomerase reverse transeriptase,hTERT)基因核心启动子调控的EGFP基因表达载体。方法从体外培养的HepG2细胞中提取全基因组DNA,以此为模板,克隆得到hTERT基因启动子核心区基因片段(hTERTp)。设计引物以质粒pEGFP-N1为模板利用PCR扩增得到EGFP基因片段,将两者通过搭桥PCR扩增得到hTERTp-EGFP片段,经SacⅠ、XbaⅠ双酶切定向插入到pGL3-Enhancer载体中,得到重组表达载体pGL3-hTERTp-EGFP。将该表达载体瞬时转染HELF细胞和HeLa细胞后观察EGFP蛋白表达情况。结果重组质粒经测序后确认插入序列正确无误,瞬时转染48h后在HeLa细胞中可以看到EGFP蛋白的大量表达,而在HELF细胞中未见表达。结论成功构建了可以通过hTERT核心启动子调控治疗基因在肿瘤细胞中特异表达的重组表达载体pGL3-hTERTp-EGFP。
钮利喜
陈华伟
李娇
杨斌盛
关键词:
肿瘤
靶向性
基因治疗
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