郑谨
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：汕头大学医学院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- LipofectAMINE2000与Fugene6转染细胞的效率比较被引量：4
- 2007年
- 目的:比较LipofectAMINE2000与Fugene6转染细胞的效果。方法:将含有Firefly和Renilla荧光素酶基因的质粒分别用LipofectAMINE2000和Fugene6转染293T、HepG2和DLD-1细胞,于48h后裂解细胞测定荧光素酶活性。结果:在293T细胞中,LipofectAMINE2000转染组的萤火虫(Firefly)和Renilla荧光素酶活性分别是Fugene6转染组的6.5和5.6倍(P<0.005);在HepG2细胞中,LipofectAMINE2000转染组的Firefly和Renilla荧光素酶活性分别是Fugene6转染组的44和49倍(P<0.001);而在DLD-1细胞中,两者无差别。结论:转染试剂LipofectAMINE2000和Fugene6对不同细胞的转染效果存在差异,当进行转染实验时,对于不同的细胞须根据情况进行选择。
- 张宝霍霞徐锡金齐宗利郑谨彭琳
- 关键词：转染
- CYP2 B6基因表达质粒的构建及在大肠杆菌中的表达
- 2007年
- 目的:构建CYP2 B6基因原核表达质粒,在大肠杆菌[Rosetta2(DE3)pLysS]中高效表达重组蛋白。方法:以质粒为模板,用PCR技术扩增出CYP2 B6基因,并将其分别插入pET-22b(+)、pET-28b(+)和pET-32a(+)质粒中,经PCR、测序鉴定后,转化Rosetta2(DE3)pLysS,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果:经PCR、测序鉴定,构建了CYP2 B6基因表达质粒;采用考马斯亮蓝染色法检测重组蛋白表达,pET-22b(+)-CYP2 B6未见目的蛋白表达;pET-28b(+)-CYP2 B6有目的蛋白表达,约占蛋白总量的5%;而pET-32a(+)-CYP2 B6可以高效地表达CYP2 B6,在低浓度(50μmol/L)IPTG诱导3 h后,所表达的CYP2 B6蛋白约占细菌总蛋白的30%;质谱分析结果进一步证实所表达的蛋白为CYP2 B6。结论:成功地使CYP2 B6基因在原核系统中高效表达。
- 张宝霍霞徐锡金齐宗利郑谨彭琳
- 关键词：CYP2B6大肠杆菌
