邓敬桓 作品数:20 被引量:68 H指数:5 供职机构: 广西医科大学公共卫生学院 更多>> 发文基金: 广西壮族自治区自然科学基金 国家自然科学基金 广西青年科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 文化科学 理学 更多>>
肝癌细胞外泌体的分离与鉴定 被引量:15 2016年 目的:针对目前尚缺理想的肿瘤细胞提取方案,探寻分离纯化肝癌细胞培养液中外泌体的新方法.方法:连续适应无血清培养肝癌SMMC-7721细胞,收集细胞上清液,采用改良超速离心法分离、纯化培养上清液中肝癌细胞外泌体;透射电镜观察其形态,Nanosight技术分析粒径;Western blot分析其特异蛋白Alix、CD63、CD9的表达并利用SDS-PAGE电泳分析肝癌细胞和外泌体的蛋白谱.结果:透射电镜观察到的肝癌细胞外泌体,外形呈圆形或椭圆形;Nanosight技术分析颗粒直径峰值为122 nm,直径30-150 nm之间颗粒占72.16%;Western blot证实在细胞培养上清液和外泌体提取液中均能检测到Alix、CD63、CD9的蛋白表达;SDS-PAGE电泳清晰显示外泌体中高丰度大分子结构蛋白明显少于肝癌细胞.结论:利用连续适应无血清细胞培养结合改良超速离心法能提取高纯度的外泌体,为肝癌细胞外泌体标志物研究奠定基础. 陈加贵 邓敬桓 何敏关键词:肝癌细胞 外泌体 原发性肝癌发生机制的研究进展 被引量:17 2007年 原发性肝癌是最常见的10种恶性肿瘤之一,在我国占居民恶性肿瘤死亡的第2位。国内外诸多学者长期致力于防治肝癌的研究。笔者综述了近年来关于原发性肝癌的病因,包括外环境致癌因素(病毒、寄生虫、细菌的感染、黄曲霉毒素的摄入、水源污染以及吸烟、饮酒)和自身遗传影响因素的流行病学的研究进展,重点阐明它们在原发性肝癌发生过程中的具体作用机制。对预防和治疗原发性肝癌具有重要意义,为今后进一步向基因、蛋白水平方向的深入研究提供一定参考。 邓敬桓 秦雪关键词:原发性肝癌 发病机制 SELDI-TOF-MS在筛选肝癌高发家系与无癌家系血清蛋白差异中的应用 被引量:1 2014年 目的比较肝癌高发家系患者和无癌家系患者血清蛋白质谱图,探寻两者间的血清蛋白差异。方法用表面增强激光解吸电离-飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)及CM10蛋白芯片对25例肝癌高发家系患者和25例无癌家系患者血清样本进行分析,将获得的血清蛋白质指纹图谱,用计算机软件进行比较分析,建立高发家系患者和无癌家系患者的比较筛选模型。结果肝癌高发家系组与无癌家系组共有15个蛋白质差异有统计学意义。筛选出4个蛋白峰建立诊断模型的灵敏度为96.0%(24/25),特异度为88.0%(22/25),准确率为92.0%(46/50)。结论肝癌高发家系患者组和无癌家系患者组的血清存在一定的差异蛋白,SELDI技术在特异性蛋白生物标志分子的筛选等方面具有较好的临床应用前景。 邓敬桓 陈智平 李山 黄东萍 秦雪关键词:肝癌 家系 晚期转移性肝癌血清外泌体介导TGF-β通路对HepG2细胞上皮间质转化的影响 被引量:1 2023年 目的探讨转移性肝癌患者血清中外泌体对肝癌细胞HepG2上皮间质转化(EMT)的影响及与转化生长因子-β(TGF-β)通路的关联性。方法收集广西医科大学第一附属医院2018-01-01-2021-11-305例TNMⅠ非转移性和15例TNMⅣ转移性肝癌患者血清作为对照组和实验组。运用超速离心法提取血清中外泌体,使用透射电镜、纳米颗粒跟踪技术(Nanosight)和蛋白质印迹进行鉴定,将血清、外泌体和去外泌体血清分别与HepG2共培养,使用倒置显微镜观察细胞形态变化,依照形态学改变划分为发生EMT转化和未发生EMT转化。蛋白质印迹和实时荧光定量聚合酶链反应法(RT-qPCR)检测上/间皮标志物、TGF-β通路分子,酶联免疫吸附法(ELISA)检测TGF-β1含量。应用Kaplan-Meier分析TGF-β通路介导的EMT对转移性肝癌患者预后的影响。结果透射电镜、Nanosight和蛋白质印迹结果提示,超速离心法能较好分离血清外泌体。与HepG2共培养后,对照组肝癌细胞均未发生形态学改变,实验组中有10例血清和8例外泌体使癌细胞发生长梭形改变。蛋白质印迹结果显示,E-cadherin在空白组(0.5969±0.0018)、对照组(0.5944±0.0024)和实验组(0.5896±0.0092)中未发生EMT转化的相对蛋白表达量差异无统计学意义,F=2.865,P>0.05。实验组中血清和外泌体诱导发生EMT转化的E-cadherin相对蛋白表达量(0.3409±0.0175)低于未发生EMT转化(0.5896±0.0092),差异有统计学意义,t=-55.50,P<0.05。N-cadherin在空白组(0.4491±0.0070)、对照组(0.4499±0.0058)和实验组(0.4529±0.0317)中未发生EMT转化的相对蛋白表达量差异无统计学意义,F=0.085,P>0.05。实验组中发生EMT转化的N-cadherin相对蛋白表达量(0.7873±0.0238)高于未发生EMT转化(0.4529±0.0317),差异有统计学意义,t=38.12,P<0.05。空白组(0.2188±0.0098)、对照组(0.2145±0.0078)和实验组(0.2169±0.0116)未发生EMT转化中磷酸化Smad3(p-Smad3/t-Smad3)的相对蛋白表达量差异无� 邓敬桓 卢国栋 周静 朱广志 曾智明 吴勇 黄士杰关键词:外泌体 血清 上皮间质转化 转化生长因子 体外染尘细胞模型中不同时段HSP70各亚型的诱导表达 2010年 本实验拟观察染尘巨噬细胞上清液对人胚肺成纤维细胞热休克蛋白70(HSP70)各亚型(HSP70-1、HSP70-2,HSP70-hom)诱导表达的时间-效应关系。采用大鼠巨噬细胞(AMs)和人胚肺成纤维细胞(HELF)组成体外模型,以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术,检测二氧化硅粉尘处理AMs培养上清液刺激HELF细胞分别在0、2、8、12、16、24h等多个时段HSP70各亚型表达的情况。同时用二氧化钛作为阴性对照,以不用粉尘处理的AM培养上清液作为正常对照。结果HSP70-1、HSP70-2、HSP70-hom基因表达与培养时间呈现明显的时间-效应关系。HSP70可能参与了矽肺发生的氧化应激机制,且具有不同的诱导动力学特征。 张海英 金泰廙 李慧祺 韦艳 邓敬桓关键词:矽尘 肺泡巨噬细胞 人胚肺成纤维细胞 热休克蛋白70 应用表面加强激光解析电离-飞行时间质谱技术建立非活动性HBsAg携带者血清蛋白质谱筛选模型 2011年 目的比较非活动性HBsAg携带者和健康人的血清蛋白标记物并建立相关筛选模型。方法用表面加强激光解析电离-飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)及CM10蛋白芯片对35例非活动性HBsAg携带者、35例健康人血清样本进行分析,将获得的血清蛋白质指纹图谱用计算机软件进行比较分析,建立非活动性HBsAg携带者的比较筛选模型。结果非活动性HBsAg携带者组与健康人对照组共有28个差异有统计学意义的蛋白峰;建立诊断模型的灵敏度94%(33/35),特异度80%(28/35),准确率为87%(61/70)。结论建立的血清蛋白质指纹图谱模型能够区分非活动性HBsAg携带者与健康人,SELDI技术在诊断及特异性血液生物标志分子的筛选等方面具有较好的临床应用价值。 邓敬桓 李山 张志勇 韦小敏 陈智平 秦雪 刘银坤脂代谢在肝癌发生发展过程中作用机制的探讨 被引量:5 2017年 代谢重组与肿瘤发生、发展互为因果关系。随着肿瘤代谢组学研究的不断深入,人们发现肿瘤的发生、发展过程与代谢密切相关。一方面,致癌因素破坏机体的代谢平衡,诱发代谢重组,细胞发生癌变;另一方面,重组后的代谢系统介导多种生物学行为,参与癌细胞的增殖、侵袭和转移。脂代谢是机体代谢中的重要一环,肝脏是脂代谢的主要场所,肝癌的发生、发展机制与脂代谢的关系,目前尚未厘清。本文引用病因学,结合代谢重组理论,探讨肝癌发生、发展整个过程中各个重要节点与脂代谢的相关性,以期为肝癌的预防和治疗提供新的思路和依据。 邓敬桓 卢国栋关键词:脂代谢 肝细胞癌 SELDI-TOF-MS技术建立早期肝硬化患者血清蛋白质谱筛选模型 2013年 目的:比较早期肝硬化患者和健康人的血清蛋白质谱并建立相关血清诊断模型。方法:用表面增强激光解吸电离—飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术及CM10蛋白芯片对50例早期肝硬化患者、50例健康人血清样本进行分析,将获得的血清蛋白质指纹图谱,用计算机软件进行比较分析。结果:早期肝硬化患者与健康人对照组共有25个差异有统计学意义的蛋白质峰;建立诊断模型的灵敏度为96%(48/50),特异度为90%(45/50),准确率为93%(93/100)。结论:两组人的蛋白质谱有明显的差异,建立的诊断模型能够区分早期肝硬化患者与健康人,SELDI-TOF-MS技术在诊断及特异性蛋白质生物标志分子的筛选等方面具有较好的临床应用价值。 邓敬桓 陈智平 李山 秦雪 黄东萍 刘银坤关键词:早期肝硬化 应用SELDI-TOF-MS技术筛选肝癌遗传性血清蛋白标志物 被引量:3 2014年 目的:采用表面增强激光解析/电离飞行时间质谱技术(surface enhanced laser desorption inhibition time of flight ionization mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)检测肝癌易发家系患者和无癌家系患者血清蛋白生物标志物,比较两者间的蛋白差异,建立筛选血清蛋白质图谱模型并初步验证.方法:选择30例肝癌易发家系患者,30例无癌家系患者,应用SELDI-TOF-MS技术及相应的计算机软件进行比较分析,检测肝癌易发家系患者血清蛋白质的特异性生物标志,建立肝癌易发家系患者的筛选模型,并对其进行了双盲法验证.结果:肝癌易发家系组与对照组共有20个蛋白质差异有显著性,以其中4个蛋白标志物(9645.48、3960.65、7895.66和5916.07 kDa),建立的筛选模型检测灵敏度为93%(28/30),特异性为90%(27/30),准确率为92%(55/60).盲法验证,灵敏度为92%(23/25),特异性为90%(18/20).结论:SELDI-TOF-MS技术具有高灵敏度和特异性,在肝癌易发家系的血清蛋白特异性生物标志物的筛选等方面具有较好的应用前景. 邓敬桓 陈智平 李山 秦雪 黄东萍关键词:肝癌 家系 血清蛋白标志物 SELDI在筛选从慢性活动性肝炎到早期肝硬化两阶段血清标记物中的应用 被引量:1 2010年 目的比较慢性活动性肝炎患者和早期肝硬化患者血清蛋白标记物并建立相关筛选模型。方法用表面加强激光解析/电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)及CM10蛋白芯片对28例慢性活动性肝炎患者、26例早期肝硬化患者血清样本进行分析,将获得的血清蛋白质指纹图谱,用计算机软件进行比较分析,建立慢性活动性肝炎与早期肝硬化患者的比较筛选模型。结果慢性活动性肝炎组与早期肝硬化组共有26个差异有统计学意义的蛋白峰;建立诊断模型的灵敏度92%(24/26),特异度86%(24/28),准确率为89%(48/54)。结论建立的血清蛋白质指纹图谱模型能够区分慢性活动性肝炎患者与早期肝硬化患者,SELDI技术在诊断及特异性蛋白生物标志分子的筛选等方面具有较好的临床应用前景。 邓敬桓 李山 张志勇 韦小敏 陈智平 秦雪 刘银坤关键词:肝硬化 慢性活动性肝炎