杨慧
- 作品数：16 被引量：50H指数：4
- 供职机构：北京市农林科学院蔬菜研究中心更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金北京市科委课题更多>>
- 相关领域：农业科学生物学理学医药卫生更多>>
- 重金属镉螯合物人工抗原的合成与鉴定被引量：4
- 2009年
- [目的]合成并鉴定重金属镉螯合物抗原。[方法]以乙二胺四乙酸(EDTA)或二乙烯三胺五乙酸(DTPA)为双功能螯合剂,合成了半抗原,并将半抗原与载体蛋白钥孔戚血蓝素(KLH)或卵清蛋白(OVA)偶联制备完全抗原,对其进行浓度测定、紫外分光光度计扫描、SDS-PAGE电泳定性鉴定和石墨炉原子吸收光谱法检测。[结果]利用二喹啉甲酸(BCA)法检测分离纯化后的的Cd-DTPA-OVA、Cd-EDTA-KLH、DTPA-OVA和EDTA-KLH中蛋白的实际浓度依次为1.862±0.038、5.121±0.024、25.155±0.014和8.459±0.018mg/m l,紫外扫描和电泳鉴定证明,抗原合成成功;用吸收光谱法检测的上述抗原中的镉离子含量依次为34.6±0.3、96.5±0.5、0和0μg/m l,表明半抗原确实偶联到蛋白质上,进一步证明抗原合成成功。[结论]该研究为重金属螯合物单克隆抗体的制备和建立快速检测方法奠定基础。
- 张云显刘发央杨慧赵丽李鹏李霞
- 关键词：镉抗原
- 转lrp基因生菜氨基酸营养分析被引量：1
- 2009年
- 以转lrp(lysine-rich protein gene)基因的转基因T0和T1代生菜为材料,非转基因生菜植株为对照,研究包括赖氨酸在内的所有氨基酸的变化情况。结果表明:lrp可以在生菜体内正常表达,在2个世代都可提高生菜中赖氨酸的含量,同时,其他必需氨基酸的含量并没有变化。
- 李兴涛于翠梅衣莹刘玲杨慧
- 关键词：LRP基因赖氨酸
- 分泌抗重金属铜抗体的杂交瘤细胞克隆方法的建立
- 2011年
- 为了建立有效地克隆分泌抗铜抗体杂交瘤细胞的方法,试验用不同浓度的甲基纤维素半固体培养基法培养杂交瘤细胞。结果表明:培养杂交瘤细胞的甲基纤维素最佳浓度为1.6%;获得多株阳性细胞,其中阳性细胞株3B1-C5的染色体数在100个以上,腹水抗体效价达到1∶102 400,其分泌的抗体属IgM亚类,轻链为Kappa型;经间接ELISA方法检测,连续培养单细胞系93 d,3B1-C5细胞株能较稳定分泌抗体。说明含1.6%甲基纤维素的半固体培养法适合克隆分泌抗铜抗体的杂交瘤细胞。
- 赵丽王凤龙杨慧李鹏刘满杏李霞
- 关键词：铜杂交瘤细胞甲基纤维素克隆抗体
- 锌螯合物抗体可变区的克隆鉴定、真核表达及重组抗体的三维模建被引量：3
- 2012年
- 筛选得到能分泌抗锌(Ⅱ)-二乙烯三胺五乙酸(Zn(Ⅱ)-DTPA)的单克隆抗体杂交瘤细胞株2E8E3。经测定,此株细胞分泌IgM,轻链κ型抗体。为了得到该抗体可变区序列,分别在小鼠抗体的信号肽区域和抗体的第一恒定区半胱氨酸残基(Cys)附近选择合适引物,通过RT-PCR方法,得到重(VH)、轻(VL)链可变区序列。将序列进行BLAST分析、SignalP分析、IMGT-V/QUEST分析,结果显示,克隆到的VH-2E8E3(465 bp)和VL-2E8E3(417 bp),序列与小鼠μ重链,κ轻链抗体可变区序列具有同源性(相似度>97%),前端序列符合信号肽特征,抗体骨架区(Framework region,FR)及第一恒定区均含有保守半胱氨酸(Cys)残基。在此基础上,构建了重组抗体的真核表达载体,转染293T细胞并用间接ELISA法初步验证其具有表达活性。对重组抗体进行了三维模拟,并推测了主要氨基酸残基。试验结果表明,克隆到了正确的2E8E3抗体可变区序列并初步鉴定为有活性。
- 李鹏刘凤权杨慧赵丽李霞
- 关键词：单克隆抗体免疫学检测三维模拟
- 轮状病毒VP7-U基因在胡萝卜中表达的免疫原性分析被引量：3
- 2012年
- 轮状病毒是一种危害人类健康的腹泻病毒,缺乏可控性药物。将优化部分密码子的轮状病毒VP7基因(VP7-U基因)整合到胡萝卜(Daucus carota)植株中,并利用PCR、Western blot、ELISA等方法检测转VP7-U基因胡萝卜的蛋白表达情况。然后利用不同浓度的阳性VP7-U胡萝卜蛋白灌服小鼠,以灌服正常胡萝卜植株蛋白的小鼠为阴性对照,以灌服阳性细菌蛋白的小鼠为阳性对照,灌服4次后利用ELISA方法检测小鼠体内的IgG含量。结果表明,转VP7-U基因的胡萝卜植株在蛋白水平上有目的抗原的表达并且其表达含量有一定的增加。灌服阳性胡萝卜蛋白的小鼠IgG含量高于灌服阴性胡萝卜蛋白的小鼠,但低于灌服阳性细菌蛋白的小鼠。然而统计分析表明,阳性小鼠同阴性小鼠体内的IgG含量差异不显著。转基因胡萝卜口服疫苗的发展还有很多困难,需进一步深入研究。
- 刘满杏李霞刘荣堂杨慧赵丽李鹏
- 关键词：转基因胡萝卜口服疫苗
- 高赖氨酸蛋白基因在转基因生菜中的表达和遗传转化被引量：11
- 2006年
- 以生菜(LactucasativaL.)为受体材料,将含有高赖氨酸蛋白基因的植物表达载体pLBI用农杆菌介导法进行遗传转化,获得47株转基因生菜植株.PCR和Southern-blotting检测证实目的片段在T0代的整合,RT-PCR检测表明目的基因的转录.T0代植株赖氨酸(Lys)含量的测定分析表明,赖氨酸有不同程度的提高,比对照提高最高的可达9.46%.T1代植株PCR检测证明,目的基因能够遗传.
- 李兴涛李霞张金文牛俊义郭蓉杨慧刘玲
- 关键词：高赖氨酸蛋白基因赖氨酸含量
- 抗重金属汞离子抗体的制备及鉴定被引量：9
- 2010年
- 汞、镉、铅等重金属引起的环境污染已在世界范围内造成危害。快速、廉价地监测生境中重金属是减小其对人类及动物危害的先决条件。传统检测方法无法满足高通量的现场检测,建立更快速、更经济的免疫分析法检测汞离子是生产及经济发展的需要。本研究中,报道了汞特异性单克隆抗体的制备与筛选方法和结果。因Hg2+太小以至于不能引起免疫反应,所以用螯合剂(二乙烯三胺五乙酸,DTPA)将金属离子与载体蛋白(匙孔血蓝蛋白,KLH)连接起来。成功合成、鉴定汞复合物抗原后,免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合获得了稳定分泌抗体的杂交瘤细胞。用极限稀释法亚克隆,通过ELISA筛选,获得了2株稳定分泌抗汞离子抗体的细胞株(H2H5,H1H8)。小鼠腹腔注射1×107H2H5、H1H8细胞株制备腹水,腹水抗体效价都在1∶51200以上。经鉴定两株杂交瘤均为IgG1亚类,轻链为kappa型且分泌抗体稳定性较好。实验结果为汞离子残留免疫学检测方法的建立提供了技术基础,对提高风险评估工作的效率和质量,保障食品安全有重要现实意义。
- 赵丽王凤龙杨慧李鹏刘满杏李霞
- 关键词：汞单克隆抗体酶联免疫吸附法
- 重金属锌单克隆抗体的制备及鉴定被引量：3
- 2011年
- 通过双功能螯合剂S-2-(4-异硫氰苄基)-二乙烯三胺五乙酸(ρ-SCN-Bn-DTPA)将锌离子(Zn2+)分别与载体蛋白匙孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)和牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)偶联。通过二喹啉甲酸(bicin-choninic acid,BCA)法测抗原蛋白浓度,对抗原、KLH和BSA分别进行紫外分光光度计扫描,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)进行定性鉴定,利用石墨炉原子吸收分光光度法检测抗原中Zn2+含量等,成功获得了免疫抗原Zn-DTPA-KLH和检测抗原Zn-DTPA-BSA、DTPA-BSA。用Zn-DTPA-KLH免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合,极限稀释法亚克隆,间接酶联免疫吸附法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)筛选,获得了1株稳定分泌抗重金属锌抗体的杂交瘤细胞株(Z1A5)。Z1A5染色体数目在100以上,所分泌的抗体为IgM亚类,轻链为kappa型,腹水型抗体效价高达1∶51 200。本研究为锌离子残留免疫学检测方法的建立提供了物质及技术基础,对提高风险评估工作的效率和质量,保障食品安全有重要现实意义。
- 赵丽王凤龙杨慧李鹏李霞
- 关键词：重金属锌单克隆抗体
- A组轮状病毒多个结构蛋白抗原表位的串联表达及其免疫原性的检测被引量：6
- 2011年
- 从北京腹泻婴儿粪便提取的轮状病毒(rotavirus,RV)(T114株)的RNA中,克隆到轮状病毒结构蛋白基因vp4,vp6和vp7的全长cDNA,对它们编码的蛋白质序列和可能的抗原表位肽进行了预测,选择了RV主要抗原蛋白VP7、VP6和VP4的4个抗原表位肽,通过人工合成DNA的方式将这些抗原表位肽基因串联融合成一个阅读框RME(rotavirus multipleepitopes,RME)并构建原核表达载体.大肠杆菌表达的RME在ELISA反应中可被RV多克隆抗体识别,纯化的RME蛋白注射免疫小鼠可诱导特异性免疫应答,产生高滴度的同源氨基酸序列特异抗体和人RV抗体,其中针对RME的IgG抗体滴度达到l∶40 000,针对单个抗原表位EV7、EV6和EV4的IgG抗体滴度达l∶10 000～l∶20 000,针对RV Wa株的IgG抗体滴度较低为l∶2 500,但能特异地中和该病毒对MAC145细胞的侵染.上述结果为新型RV基因工程疫苗的研发提供了论据和基础.
- 杨艳梅李霞杨慧钱渊张又霍岩方荣祥陈晓英
- 关键词：轮状病毒基因工程疫苗
- 有性杂交获得同时表达两种外源基因的转基因胡萝卜的研究被引量：2
- 2006年
- 以胡萝卜下胚轴为外植体,通过分别携带2种不同外源目的基因片段的LBA4404根癌农杆菌介导转化,经PCR,Southern-blot和RT-PCR分析鉴定,选取各自转化成功并正常转录的T1代植株进行有性杂交,获得T1代杂交种子.同年秋季播种长出T2代植株,经PCR、Western blot检测及Elisa分析表明,得到同时含有2种目的基因且2种目的蛋白表达量都较高的转基因胡萝卜.
- 李司陈年来李霞杨慧刘玲
- 关键词：转基因胡萝卜目的基因有性杂交
