杜加亮 作品数:59 被引量:140 H指数:4 供职机构: 中国食品药品检定研究院 更多>> 发文基金: 国家科技重大专项 国家高技术研究发展计划 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 更多>>
重组抗IL-36受体单克隆抗体药物的质量控制研究 被引量:2 2022年 目的研究并建立针对白细胞介素-36受体单克隆抗体(抗IL-36R单抗)的关键质量属性质控方法。方法采用基于胰蛋白酶酶切和反相高效液相色谱技术(reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)的肽图法对抗IL-36R单抗进行特异性鉴别;采用还原/非还原十二烷基硫酸钠毛细管电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS)法、分子排阻(size exclusion,SE)-HPLC法测定抗IL-36R单抗的纯度;采用阳离子交换(cation exchange,CEX)-HPLC法测定抗IL-36R单抗的电荷异质性;采用亲水相互作用(hydrophilic interaction,HILIC)-HPLC法进行抗IL-36R单抗的寡糖图谱分析;采用IL-36R结合抑制法测定抗IL-36R单抗的生物学活性。结果利用基于胰蛋白酶酶切和RP-HPLC的肽图法可以获得具有特征性的抗IL-36R单抗色谱图,发挥了特异性的鉴别作用。非还原CE-SDS主峰面积百分比为(98.05±0.17)%,还原CE-SDS重链(HC)和轻链(LC)的峰面积百分比之和为(98.33±0.05)%。SE-HPLC单体和高分子量物质峰面积百分比分别为(99.53±0.01)%和(0.43±0.01)%。CEX-HPLC主峰、酸性峰和碱性峰的峰面积百分比分别为(61.47±0.79)%,(35.33±0.72)%和(3.19±0.12)%。HILIC-HPLC分析中含量最高的特征性寡糖的峰面积百分比为(63.68±0.08)%。抗IL-36R单抗相对于参比品的相对生物学活性为(95.87±6.10)%。结论针对抗IL-36R单抗的关键质量属性,研究并建立了相应的质量控制方法,以确保其安全、有效和质量可控,为该类单抗产品的质量控制方法和策略提供参考依据。 杜加亮 于传飞 王文波 武刚 崔永霏 郭璐韵 杨雅岚 俞小娟 李萌 徐刚领 刘春雨 付志浩 郭莎 王兰关键词:银屑病 单克隆抗体 生物学活性 非洲绿猴肾细胞中猪圆环病毒1型的检测 被引量:1 2017年 目的建立轮状病毒疫苗污染事件中的外源因子猪圆环病毒1型(porcine circovirus type1,PCV1)感染非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)的检测方法。方法培养感染PCV1的Vero细胞6d后,通过定性PCR、定量PCR、电子显微镜(电镜)检查和原位杂交检测PCV1的复制与增殖。结果从感染PCV1的Vero细胞培养物提取的DNA,其PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳可见特异性条带;定量PCR检测显示,感染6d后病毒总拷贝数是感染前的794.3倍;定性和定量PCR的最低检出浓度均为10^2.0拷贝/ml;电镜观察到PCV1特征性形态病毒颗粒;原位杂交检测到出现深色阳性信号的PCV1阳性细胞。结论PCV1感染Vero细胞后的复制增殖可以通过上述方法进行检测。 刘艳 于晴川 杜加亮 刘悦越 李东 高加梅 范行良 张韵祺 赵荣荣 国秦关键词:VERO细胞 显微镜检查 原位杂交 猪圆环病毒1型病毒核酸参考品及其制备方法与应用 本发明涉及一种猪圆环病毒1型病毒核酸参考品及其制备方法与应用,所述猪圆环病毒1型病毒核酸参考品从含有猪圆环病毒1型病毒的Rotarix疫苗中,利用Vero细胞传代分离培养,大量扩增,纯化后灭活、分装得到。本发明的有益效果... 于晴川 国泰 刘艳 杜加亮 刘悦越 赵荣荣 韩娟 韩菲 张永文献传递 以CD79b为靶点抗体偶联药物的质量研究 被引量:1 2023年 目的:建立抗体偶联药物(ADC)抗CD79b单抗-vc-MMAE(维泊妥珠单抗)的质控方法。方法:采用细胞杀伤法测定抗CD79b单抗-vc-MMAE的生物学活性;采用表面等离子共振法(SPR)测定其亲和力参数(K_(D));采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定其与CD79b的相对效价;对抗CD79b单抗及抗CD79b单抗-vc-MMAE进行肽图鉴别;采用分子排阻色谱法(SEC-HPLC)和十二烷基硫酸钠毛细管电泳法(CE-SDS)分析其纯度;采用毛细管等点聚焦电泳法(iCIEF)分析其电荷异质性;采用液质联用法(UPLC-MS)测定其相对分子质量和药物抗体偶联比(DAR);采用疏水色谱法(HIC-HPLC)进一步确认其DAR;采用反相色谱法(RP-HPLC)测定游离小分子药物。结果:抗CD79b单抗-vc-MMAE的生物学活性相对效价为(99.32±3.99)%,K_(D)为(4.27±0.27)×10^(-9)mol·L^(-1),结合活性相对效价为(106.01±2.88)%,抗CD79b单抗和抗CD79b单抗-vc-MMAE的参比品与其样品的肽图图谱一致,SEC-HPLC主峰纯度为(99.32±0.05)%,非还原CE-SDS的重链-重链-轻链-轻链(HHLLC)纯度为(6.89±0.19)%,重链-重链-轻链(HHLC)纯度为(27.21±0.15)%,重链-重链(HHC)纯度为(18.33±0.06)%等,还原CE-SDS轻链和重链纯度为(95.47±0.16)%,iCIEF主峰峰面积百分比为(73.57±0.55)%,主峰等电点7.53±0.00,液质联用法测定抗CD79b单抗-vc-MMAE分别偶联0、2、4、6个小分子药物的相对分子质量为147891、150527、153161和155796,DAR为3.60,HIC法测得的DAR为3.53±0.01,RP-HPLC测定游离小分子药物浓度为(0.039±0.003)μg·mL^(-1)。结论:建立了抗CD79b单抗-vc-MMAE的质控方法,对该产品的安全性、有效性进行控制,为该类ADC药物的质量检测提供参考。 李萌 赵雪羽 武刚 杜加亮 王文波 郭璐韵 龙彩凤 杨雅岚 付志浩 俞小娟 刘春雨 段茂芹 徐刚领 于传飞 王兰关键词:生物学活性 连接子 基于狂犬病病毒载体的基因工程疫苗研究进展 2010年 对HIV-1和HCV等重大传染性疾病传统疫苗研制的失败,让科学家们把目光转向开发新型疫苗研制策略。其中之一就是用减毒的重组病毒载体表达外源抗原来免疫,可以保护个体免受相应病原体的暴露威胁。一种新的手段就是从cDNA克隆拯救单股负链RNA病毒,这一技术为弹状病毒科成员用于疫苗载体和生物医学工具打开了一扇窗。 杜加亮 唐青关键词:基因工程疫苗 病毒载体 狂犬病 重大传染性疾病 CDNA克隆 HIV-1 轮状病毒颗粒样候选疫苗研究现状和展望 被引量:1 2021年 人轮状病毒(rotavirus,RV)是引发全球性人类非细菌性急性胃肠炎疾病的主要病原体之一,减毒活疫苗是预防RV感染的有效手段。为了提高RV疫苗的安全性,开发活病毒疫苗以外的其他形式疫苗,如灭活疫苗、亚单位疫苗、病毒样颗粒(virus like particle,VLP)等,以避免减毒疫苗株通过回复突变恢复毒力、导致严重不良反应(如肠套叠)或造成环境污染,本文就RV VLP疫苗的研究进行综述和展望。 杜加亮 刘艳关键词:轮状病毒 病毒样颗粒 疫苗 河南汉族人群HLA超型的分析研究 2016年 目的分析河南汉族人群HLA基因多态性和超型分布。方法采用测序法对111名志愿者的血样进行HLA-A、-B、-C、-DRB1和-DQB1五个座位的基因分型,分别根据5个研究组的HLA超型分型标准进行HLAⅠ类和Ⅱ类超型的分析统计。结果总共检测出130个HLA等位基因,其中HLA-A座位为21个等位基因,-B座位为41个,-C座位为24个,-DRB1座位为27个,-DQB1座位为17个。依据不同的分型方法,共得到86个超型,其中HLAⅠ类51种,Ⅱ类35种。按照5个研究组的分型标准,HLAⅠ类的优势超型型别基本相似,其中HLA-A2和-B7的分布差异无统计学意义(P>0.05)。但对于HLAⅡ类分子,超型名称分类标准在不同的研究组均不同。结论获得河南汉族人群的超型分布特征,HLAⅠ类分子的优势超型为HLA-A3、-A2、-B7、-B44和-B62,但HLAⅡ类分子的超型分类标准尚不统一,有待进一步研究。 刘悦越 杜加亮 刘艳 宣博 范行良 于晴川 高加梅 国泰关键词:人类白细胞抗原 超型 基因多态性 表位疫苗 狂犬/丙型肝炎嵌合病毒的构建和拯救 2011年 目的 以狂犬病病毒为载体,构建表达丙型肝炎病毒包膜糖蛋白E1E2的狂犬/丙型肝炎嵌合病毒,为发展新型丙肝载体疫苗奠定基础.方法 在狂犬病病毒反向遗传系统CTN-GFP的基础上,通过传统分子克隆方法,将HCV E1E2基因分别克隆人复制型和复制缺陷型狂犬病病毒载体,构建狂犬/丙肝嵌合病毒CTN-HCV E1E2和CTNΔG-HCV E1E2.结果 免疫荧光(DFA)和反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)结果 显示嵌合病毒拯救成功,嵌合病毒能够再次感染正常细胞并且能够在mRNA水平检测到HCV E1E2基因的表达.结论 本研究成功构建了表达丙型肝炎病毒包膜糖蛋白E1E2的狂犬/丙肝嵌合病毒,提示以狂犬病病毒为载体发展新型丙肝载体疫苗在理论和技术上都是可行的. 杜加亮 黄莹 唐青 王力华 梁国栋关键词:狂犬病病毒 肝炎病毒属 我国人类手足口病流行病学概述 手足口病是引起我国5岁以下儿童发病和死亡病例数最多的国家法定丙类报告传染病,每年都会导致严重的经济和社会负担,其主要病原体为EV71和CA16。我国自2008年将手足口病列入法定报告丙类传染病以来,发病/死亡人数和流行趋... 杜加亮 高加梅 国泰关键词:手足口病 疫苗 流行病学 文献传递 筛选诱导肠道病毒71型特异性免疫应答的最短氨基酸基序 2021年 目的筛选肠道病毒71型(EV71)中和表位,确定诱导机体免疫应答的特定最短氨基酸基序,为合成肽疫苗研发提供理论依据。方法利用噬菌体随机十二肽库淘选EV71中和抗体特异性结合克隆并测序,推导出中和表位的关键序列。合成含有关键序列且N端乙酰化(AC)和C端连接血蓝蛋白(KLH)的系列肽段,免疫小鼠后收集血清,经Western blot、ELISA和中和试验验证肽段的免疫原性以及免疫后血清的中和活性。结果经过3轮淘选和克隆测序后,分析确定关键基序为KQEKDL。Western blot结果表明修饰后的含关键基序的系列肽段免疫小鼠获得的血清与EV71和VP1蛋白均有不同程度结合。ELISA结果表明仅含有最短关键基序的合成肽段(AC-KQEKDL-KLH)免疫后血清对其余3条肽段及EV71的反应最强。中和试验结果表明该肽段免疫后血清的中和效价也最高。结论利用噬菌体随机肽库技术成功筛选出EV71中和表位,确定KQEKDL关键基序可能是诱导机体免疫应答的特定最短氨基酸序列,为了解免疫应答机制、免疫原性评价及多肽疫苗的研发提供理论依据。 刘艳 高文超 杜加亮 杜加亮 刘悦越 于晴川 赵岩 赵荣荣 范行良 范行良 国泰关键词:肠道病毒71型 中和表位 基序 疫苗