张义炜
- 作品数：6 被引量：19H指数：3
- 供职机构：上海交通大学医学院附属仁济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学环境科学与工程更多>>
- 重组人粒细胞集落刺激因子增加急性髓性白血病细胞对三氧化二砷的敏感性及其机制探讨被引量：8
- 2019年
- 目的 :研究重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte-colony-stimulating factor,rhG-CSF)联合三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)(分子式As_2O_3)对急性髓性白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:AML细胞HL-60和THP-1用100 ng/mL rhG-CSF预处理后,再用不同浓度的As_2O_3处理;CCK-8法检测细胞增殖并计算相对增殖抑制率,FCM法检测细胞的凋亡率及细胞周期。实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法分别检测HL-60和THP-1细胞及急性早幼粒细胞白血病NB4细胞中水通道蛋白9(aquaporin 9,AQP9)mRNA及蛋白的表达水平,以及rhG-CSF作用后HL-60和THP-1细胞中AQP9 mRNA及蛋白表达水平的变化。结果 :单药rhG-CSF可以促进HL-60和THP-1细胞的增殖(P值均<0.01);与不同浓度的As_2O_3单药组相比,rhG-CSF预处理后,与2μmol/LAs_2O_3联用有抑制HL-60和THP-1细胞增殖的作用(P值均<0.05)。rhG-CSF联合不同浓度As_2O_3组细胞的凋亡率明显提高(P值均<0.05)。As_2O_3会导致白血病细胞发生G_0/G_1期阻滞(P值均<0.05);rhG-CSF可以使HL-60和THP-1细胞发生S期阻滞(P值均<0.01),与As_2O_3联合作用时该效应更明显(P值均<0.05)。HL-60和THP-1细胞中AQP9 mRNA及蛋白的表达水平明显低于其在NB4细胞中的表达水平(P值均<0.01);与对照组相比,rhG-CSF(100 ng/mL)能上调HL-60和THP-1细胞中AQP9 mRNA和蛋白的表达水平(P <0.05)。结论 :rhG-CSF可以增加非M3型AML细胞对As_2O_3的敏感性,其机制可能与上调细胞中AQP9表达水平有关。
- 王安迪王君颖李昕张义炜徐岚钟华
- 关键词：粒细胞集落刺激因子三氧化二砷水通道蛋白9
- G-CSF促进体外共培养体系中阿糖胞苷对HL-60细胞杀伤作用的分子机制研究
- 李昕蔡佳翌张义炜盛贤福徐岚钟济华陈芳源钟华
- CCK法检测紫草素及衍生物对血液肿瘤细胞株的增殖抑制作用被引量：4
- 2012年
- 目的以常用血液肿瘤细胞株为研究对象,体外加入紫草素(代号SK01)、β-羟基-异戊酰紫草素(代号SK17)及其16种人工半合成的紫草素衍生物,研究对血液肿瘤细胞株的增殖抑制作用,从中筛选出低毒高效的紫草素类化合物。方法 CCK-8法检测紫草素及其衍生物对血液肿瘤细胞株的增殖抑制作用即药物半数抑制浓度。结果紫草素-二甲醚衍生物(代号SK36)对多种血液肿瘤细胞株均有很强的细胞毒作用,但对正常细胞株的毒性作用则明显低于SK01和SK17,表现出较好选择性。实验中我们还发现大部分母核Ⅰ紫草素衍生物药物活性强于相对应的母核Ⅱ衍生物。结论 SK36能有效抑制多种血液肿瘤细胞株增殖,而对正常细胞株毒性较小,有较强的选择性,值得进一步开展基础及临床研究。
- 钟济华成玲剑周文张义炜钟华黄洪晖陈芳源
- 关键词：CCK-8紫草素细胞增殖细胞株
- shRNA干扰己糖激酶Ⅱ基因表达对人淋巴瘤细胞恶性生物学行为的影响被引量：5
- 2017年
- 目的 :观察shR NA干扰己糖激酶(hexokinase,HK)Ⅱ基因表达对人淋巴瘤Raji和SU-DHL-4细胞代谢、增殖、凋亡及耐药的影响,初步评价HKⅡ基因靶向治疗在淋巴瘤中的潜在应用前景。方法 :构建慢病毒介导的shRNA靶向干扰HKⅡ基因表达的淋巴瘤细胞株Raji和SU-DHL-4(HKⅡshRNA转染组),同时设置阴性shRNA转染对照组。采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法分别检测细胞中HKⅡmRNA和蛋白的表达水平。锥虫蓝拒染法检测细胞存活数并绘制生长曲线;CCK-8法检测多柔比星(doxorubicin,DOX)对淋巴瘤细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)。FCM法分析细胞周期分布及细胞凋亡。蛋白质印迹法检测细胞中凋亡相关蛋白caspase-3及其剪切体、Bcl-2和Bcl-6的表达;分别应用乳酸和葡萄糖检测试剂盒检测细胞培养上清液中乳酸和葡萄糖的浓度。结果 :与空质粒转染对照组细胞相比,HKⅡshRNA转染组细胞中HKⅡmRNA及蛋白的表达水平均明显降低(P值均<0.05)。shRNA干扰HKⅡ基因表达能抑制2种淋巴瘤细胞的增殖活性(P值均<0.01),并使细胞周期阻滞在G0/G1期(P值均<0.05),同时促进细胞凋亡(P值均<0.01)。与对照组细胞相比,HKⅡ基因沉默可降低DOX对2种淋巴瘤细胞的IC50值(P值均<0.05),抑制细胞中葡萄糖消耗(P值均<0.05),减少乳酸生成(P值均<0.01)。与对照组细胞相比,HKⅡshRNA转染后2种淋巴瘤细胞中Bcl-2蛋白的表达水平明显降低(P值均<0.05),而caspase-3剪切体表达水平明显升高(P值均<0.05);加入DOX作用后,2种淋巴瘤细胞的Bcl-2表达水平无明显差异(P值均>0.05),但HKⅡshRNA转染组细胞中caspase-3前体蛋白表达水平明显降低(P值均<0.01),而caspase-3剪切体表达水平升高更加明显(P值均<0.05)。结论 :shRNA干扰HKⅡ基因表达可抑制淋巴瘤细胞增殖,促进细胞凋亡,纠正细胞糖酵解代谢表型,提高细胞对化疗药物DOX的敏感性。提示HKⅡ基因可
- 许壁榆邵霞张义炜蔡佳翌陈芳源王婷
- 关键词：糖酵解
- Notch1高表达急性T淋巴细胞白血病发病中细胞增殖的相关机制被引量：2
- 2018年
- 目的探讨Notch1高表达急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）发病中，细胞增殖的相关机制及靶向药物干预效价。
方法选择Notch1高表达的T-ALL细胞株（A3、MOLT-4、Jurkat细胞株）和来源于20例健康志愿者的外周血单个核细胞（PBMC）为研究对象。采用不同浓度（0、50、100 nmol/L）的细胞周期抑制剂palbociclib处理T-ALL细胞株与PBMC，采用CCK-8法检测其细胞增殖状态，计算不同浓度palbociclib处理时的半数抑制浓度（IC50）值，细胞涂片观察细胞形态，并且采用流式细胞术分析T-ALL细胞株与PBMC的细胞周期变化，实时荧光定量（RT）-PCR检测相关基因mRNA的相对表达水平。采用t检验比较不同浓度palbociclib处理后T-ALL细胞株与PBMC相关基因mRNA的相对表达水平等呈正态分布计量指标。结果①A3、MOLT-4细胞株Notch1基因表达的灰度值百分比，分别为（62.3±3.40）%、（77.6±4.71）%，显著高于PBMC的（20.8±1.53）%，并且差异均有统计学意义（t=6.236、10.034，P=0.025、0.008）；Jurkat细胞Notch1基因表达的灰度值百分比为（28.5±1.36）%，与PBMC比较，差异无统计学意义（t=1.257，P=0.430）。②相较于PBMC，MOLT-4细胞株增殖活性被palbocicib显著抑制，其次为A3细胞株，并且3种细胞增殖活性抑制呈明显时间和浓度依赖。经palbocicib处理48 h后，A3及MOLT-4细胞株的IC50值分别为（0.43±0.12）μmol/L和（0.10±0.06）μmol/L，显著低于PBMC的（0.83±0.15）μmol/L，前二者分别与后者相比，差异均有统计学意义（t=12.354、7.486，P=0.006、0.015）。③细胞形态结果显示，相较于PBMC，经palbocicib 100 nmol/L处理后，A3和MOLT-4细胞株的细胞增殖受到明显抑制，细胞分散，簇状增殖现象消失。④细胞周期检测结果显示，经palbocicib 50 nmol/L处理时S＋G2期A3、MOLT-4细胞株的细胞比例较palbocicib 0 nmol/L处理时显著降低，并且差异均有统计学意义（t=5.358�
- 李香沈莉菁陈芳源高晓钟华蔡佳翌张义炜朱迪
- 关键词：急性病细胞增殖
- β－羟基异戊酰紫草素二甲醚衍生物对白血病细胞株THP－1的作用
- 2011年
- 目的选用人类单核细胞白血病细胞株THP－1，体外加入紫草素二甲醚衍生物5，8－二甲基－2－β－羟基异戊酰紫草素（SK36），研究其在THP－1细胞株增殖和凋亡中的作用，并对其作用机制进行初步探讨。方法CCK法检测SK36对THP．1细胞的增殖抑制作用；流式细胞术检测细胞早期凋亡标记AnnexinV／PI及细胞凋亡通路Caspase活性；激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡和坏死。结果流式细胞术检测结果显示，1．02μg／mlSK36作用24、48h后的细胞凋亡率分别为（40．61±2．13）％和（67．40±9．15）％，明显高于对照组的（16．97±0．61）％，差异有统计学意义（t=18．444，t=9．528，P〈0．01）；SK36诱导THP－1细胞凋亡且经历了Caspase－3的激活（F=323．61，P〈0．01）。结论紫草素二甲醚衍生物SK36能有效地诱导THP－1细胞凋亡，其作用机制主要是激活Caspase－3。
- 张义炜钟济华周文王海嵘钟华沈莉菁黄洪晖陈芳源
- 关键词：肿瘤THP-1细胞细胞凋亡
