孙海虹
- 作品数：3 被引量：26H指数：2
- 供职机构：河北师范大学生物系更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 人钙调素在大肠杆菌中的表达、纯化及其活性研究被引量：10
- 1999年
- 利用基因重组技术,将经PCR扩增获得的人钙调素基因(hCaMcDNA)插入质粒pBV220,构建重组表达载体hCaM/pBV220,用酶切、DNA测序、PCR扩增鉴定阳性克隆.阳性重组子在大肠杆菌DH5α中经温度诱导可高效表达CaM蛋白,经15%SDS-PAGE分析,可观察到一与CaM分子量相符(约17kD)的诱导表达条带,其表达量占菌体蛋白总量20%,并主要以可溶性形式表达.Westernblot结果证实,17kD的表达条带可与标准鼠抗人CaM单克隆抗体起特异反应.用Pheny1-SepharoseCL-4B疏水亲和层析法纯化重组菌超声上清表达产物,每1L菌液可获CaM纯品3～4mg.重组人CaM(rhCaM)与牛脑CaM的氨基酸组成基本一致.生物活性测定结果提示,rhCaM具有激活NAD激酶的活性,其激活程度与标准人脑CaM几乎一致.
- 李晓军武建国郭大文徐建平孙海虹
- 关键词：钙调素基因表达纯化生物学活性大肠杆菌
- 小麦醇溶蛋白酸性电泳条件的探索被引量：16
- 1999年
- 麦醇溶蛋白在品种间存在明显的差异,其电泳谱带完全受基因控制,几乎不受环境影响,因此被称为品种的指纹,但应用于小麦醇溶蛋白分析的酸性聚丙烯酰胺凝胶采用的是FeSO_4-Vc-H_2O_2催化系统,由该系统催化的凝胶和碱性凝胶相比质量差,胶软,易和玻璃板粘着,卸板很困难。且该系统要求丙烯酰胺和亚甲基丙烯酰胺的纯度较高,限制了其应用范围。国内外对酸性系统改进的不少,但多集中于对缓冲系统的改进和催化系统中各物质量的增减,其结果对凝胶质量改进不大。在本研究中,我们采用新的催化系统FeSO_4-Vc-AP(过硫酸铵),较大提高胶的质量。但因这一催化系统的建立时间尚短,其应用于小麦醇溶蛋白分析的最佳条件还不清楚,本文在这一方面做了一些探索。
- 孙新立张来群孙海虹夏玉凤冯晓燕王友爱
- 关键词：小麦醇溶蛋白
