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叶钿均

作品数：7 被引量：14H指数：4
供职机构：广州医科大学更多>>
发文基金：国家自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生农业科学更多>>

合作作者

文献类型

  • 5篇期刊文章
  • 1篇学位论文
  • 1篇会议论文

领域

  • 7篇医药卫生
  • 1篇农业科学

主题

  • 7篇肠癌
  • 6篇胸苷
  • 6篇胸苷磷酸化酶
  • 6篇转染
  • 6篇细胞
  • 6篇磷酸
  • 6篇磷酸化
  • 6篇磷酸化酶
  • 6篇结肠
  • 6篇结肠癌
  • 5篇基因
  • 4篇慢病毒
  • 3篇尿苷
  • 3篇脱氧
  • 3篇脱氧氟尿苷
  • 3篇慢病
  • 3篇慢病毒转染
  • 3篇结肠癌细胞
  • 3篇氟尿苷
  • 3篇癌细胞

机构

  • 5篇广州医科大学
  • 2篇广州医学院第...

作者

  • 7篇叶钿均
  • 5篇张继民
  • 5篇王绮雯
  • 3篇刘剑
  • 2篇高庆
  • 2篇刘影
  • 1篇刘奇
  • 1篇刘奇

传媒

  • 1篇中华胃肠外科...
  • 1篇中华肿瘤杂志
  • 1篇中华外科杂志
  • 1篇广东医学
  • 1篇中国肿瘤临床

年份

  • 2篇2015
  • 1篇2014
  • 4篇2013
共 7 条 记 录，以下是 1-7
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排序方式：
慢病毒转染TP基因到结肠癌细胞稳定性研究
目的 慢病毒转染TP基因到结肠癌细胞HT29和LS174T,得到能稳定传代的带有TP基因HT29-TP和LS174T-TP细胞.方法 通过包含TP基因的慢病毒转染结肠癌细胞HT29和LS174T,免疫组织化学染色法检测转...
叶钿均刘奇王绮雯
基于基因转染法的胸苷磷酸化酶高表达结肠癌细胞株的建立被引量：3
2015年
目的构建表达高度胸苷磷酸化酶(TP)活性并可以稳定传代的结肠癌细胞株。方法合成包含TP c DNA全长的真核细胞表达载体,用慢病毒包装后转染人结肠癌细胞株SW480、LOVO、HT29和LS174T,流式细胞仪检测转染效率,实时荧光定量RT-PCR方法检测TP的m RNA表达,蛋白印迹法(Western blot)检测TP蛋白表达。结果转染TP c DNA后,SW480、LOVO、HT29与LS174T在传代5代后转染效率仍稳定在95%左右。与未转染TP基因的亲代细胞相比,SW480-TP、LOVO-TP、HT29-TP与LS174T-TP的TP m RNA的表达分别提高了(694.56±171.53)、(282.46±86.85)、(8.45±0.15)和(2 615.02±253.97)倍,差异有统计学意义(P<0.05);并且TP蛋白的表达水平也显著提高。结论慢病毒载体能够高效地将TP c DNA转染至人结肠癌细胞SW480、LOVO、HT29和LS174T中,所得克隆能够稳定传代,并能显著提高4株结肠癌细胞TP的m RNA和蛋白表达水平。
王绮雯刘剑叶钿均张继民
关键词：胸苷磷酸化酶基因转染慢病毒结肠癌细胞株
转染胸苷磷酸化酶基因对5＇-脱氧氟脲苷抗结肠癌细胞株活性的影响被引量：4
2013年
目的 探讨人结肠癌细胞系SW480和LOVO细胞株转染胸苷磷酸化酶（TP）基因后转化5′-脱氧氟脲苷（5′-DFUR）为氟尿嘧啶（5-FU）能力的变化及5′-DFUR抗癌细胞株活性的变化.方法 构建包含TP cDNA的真核表达载体,用慢病毒包装后转染结肠癌细胞株SW480和LOVO.转染5代后以免疫荧光法和流式细胞技术检测转染效率;RT-PCR和Western blot法分别检测2株细胞的TP mRNA和TP蛋白表达.然后以高效液相色谱法（HPLC）检测2株细胞转染前后转化5′-DFUR为5-FU的量;MTT法检测5′-DFUR对2株细胞转染前后半数抑制浓度（IC50）.结果 转染TP基因后SW480-TP与LOVO-TP 5代细胞转染效率稳定在95％左右.2株转染细胞的TP mRNA表达分别比野生型细胞增加（695±172）倍（t=-7.00,P=0.002）和（282±87）倍（t=-5.61,P=0.030）,Western blot显示TP蛋白表达也明显增强.转染后的SW480-TP与LOVO-TP在培养基中分别使5′-DFUR转化为5-FU的量增加（t=19.406 ～66.921,P＜0.01）.5′-DFUR对SW480的IC50由（1641±53） μmol/L降至（587±17） μmol/L（t=-32.59,P＜0.01）;对LOVO的IC50由（1607±57） μmol/L降至（1088±89） μmol/L（t=-8.52,P＜0.01）.结论 慢病毒载体能够高效地将TP cDNA转染至人结肠癌细胞SW480和LOVO并稳定传代,转染后2株细胞的TP mRNA和TP蛋白表达明显增高,使5′-DFUR转化为5-FU的量增加,对结肠癌细胞株SW480和LOVO的抑制作用增强.
刘剑张继民高庆王绮雯叶钿均刘影
关键词：结肠肿瘤胸苷磷酸化酶氟尿嘧啶
慢病毒转染胸苷磷酸化酶基因增强5'-脱氧氟尿苷抗人结肠癌细胞活性
研究背景胸苷磷酸化酶（thymidine phosphorylase，TP）是嘧啶核苷合成和分解过程中的一个关键酶。目前认为TP与血小板源性内皮细胞生长因子（platelet-derivedendothelial cel...
叶钿均
关键词：胸苷磷酸化酶
文献传递
慢病毒转染胸苷磷酸化酶基因增强5’-脱氧氟尿苷抗结肠癌细胞活性被引量：6
2015年
目的探讨5’-脱氧氟尿苷（5’-DFUR）和氟尿嘧啶（5-Fu）对人结肠癌细胞株HT29和LS174T转染胸苷磷酸化酶（TP）基因前后抗癌效应的变化。方法构建包含TP基因的慢病毒载体，转染结肠癌细胞株HT29和HLS174T。传代5代后，以流式细胞术检测转染效率。免疫组织化学染色和Westernblot检测转染TP基因前后HT29和LS174T细胞中TP蛋白的表达，逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测细胞中TPmRNA的表达水平，四唑氮化合物法检测5’-DFUR和5-Fu对转染TP基因前后细胞株的半数抑制浓度（IC50），高效液相色谱（HPLC）法检测HT29和LS174T在细胞转染rrP基因前后转化5’-DFUR为5-Fu的水平。结果转染TP基因的HT29和LS174T细胞传代5代后，转染效率稳定在约95．0％。转染TP基因的HT29和LS174T细胞中TP表达阳性，而野生型细胞和仅转染病毒载体细胞中TP表达阴性；Westernblot结果显示，HT29和HLS174T细胞中’rP蛋白的表达明显增强。RT-PCR结果显示，转染TP基因的HT29和LS174T细胞中TPmRNA的相对表达水平分别为8．45±0．15和2615．02±253．97，与野生型细胞比较，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。5’-DFUR对转染TP基因的HT29-TP细胞和野生型细胞的IC50分别为（14．33±0．74）μmol／L和（707．66±5．66）μmol／L（P〈0．05）；对转染TP基因的LS174T—TP细胞和野生型细胞的IC50分别为（0．59±0．11）μmol／L和（239．20±21．83）μmol／L（P〈0．05）。5-Fu对转染TP基因的HT29-TP细胞和野生型细胞的Ic50分别为（5．42±0．75）μmol／L和（14．19±0．97）μmol／L（P〈0．05）；对转染TP基因的LS174T—TP细胞和野生型细胞的Ic。分别为（4．41±0．96）μmol／L和（16．42±2．12）μmol／L（P〈0．05）。转染TP基因后的HT29和HLS174T细胞培养基中，则检出大量转化的5-Fu，较转染前分别增加了12．2～23．6倍，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。�
叶钿均王绮雯张继民刘奇
关键词：胸苷磷酸化酶转染
胸苷磷酸化酶表达与结直肠癌关系研究进展被引量：4
2013年
胸苷磷酸化酶(thymidine phosphorylase,TP)是嘧啶核苷合成与分解过程中的一个关键酶。目前认为TP与血小板源性内皮细胞生长因子(platelet-derived endothelial cell growth factor,PD-ECGF)具有同源性,其诱导血管形成和抗凋亡的作用与结直肠癌的生长、转移密切相关。同时TP也是使5'-脱氧氟尿苷(5'-deoxy-5-fluorouridine,5'-DFUR)等(5-fluorouracil,5-FU)前体药物转化为5-FU的关键酶,其活性与结直肠癌细胞对氟尿嘧啶类药物的敏感性及靶向治疗密切相关。因TP在肿瘤的生长、转移、治疗和预后方面均有重要作用,阐明其表达机制具有重要意义。本文将对近年TP在结直肠癌中的表达与肿瘤血管新生及与激活5'-DFUR发挥细胞毒作用、治疗结直肠癌的研究进展进行综述。
叶钿均张继民
关键词：胸苷磷酸化酶结直肠癌血管新生
转染胸苷磷酸化酶基因对5’-脱氧氟尿苷抑制结肠癌细胞的影响被引量：4
2013年
目的探讨转染胸苷磷酸化酶（TP）cDNA对5’-脱氧氟尿苷（5＇-DFUR）抑制人结肠癌细胞LOVO作用的影响。方法将TPcDNA序列克隆以慢病毒表达载体包装后转染人结肠癌细胞LOVO（LOVO．TP组），另设空白对照组和LOVO．载体组。以流式细胞仪检测3组细胞转染效率，RT—PCR法检测3组细胞TPmRNA表达；Westernblot法检测转染前后TP蛋白水平；MTF法检测转染前后LOVO对5’-DFUR药物敏感性的变化；高效液相色谱法（HPLC）检测3组细胞转化不同浓度5’-DFUR生成5-FU量的情况。结果转染11P基因并传代5代后，LOVO细胞的转染效率在95％左右。转染TP基因后，LOVO．TP组的TPmRNA表达水平为空白对照组的（282．5＋86．8）倍（P〈O．01），而LOVO．载体组与对照组相比差异无统计学意义（P〉O．05）；Westernblot检测显示，LOVO．TP组的TP蛋白表达明显高于对照组和LOVO．载体组。5＇-DFUR对LOVO细胞半数有效剂量（IC50）对照组为（1607．3~56．8）~mol／L，明显高于LOVO．TP组的（1087．7~89．1）μmol／L（P〈0．01）；而LOVO-染载体组为（1699．5~38．7）μmol／L，与对照组相比差异无统计学意义（P〉O．05）。培养基中分别加入0、500、1000和2000μmol／L的5＇-DFUR后，对照组培养基中分别检出0、2．10、3．13和7．19μmol／L的氟尿嘧啶（5．FU）；而在LOVO．TP组的细胞培养基中则分别检出0、22．16、30．94和40．02μmol／L的5．FU；而LOVO-载体组的培养基中则几乎无5．Fu检出。结论转染TPcDNA能够明显提高LOVO细胞的TPmRNA及TP蛋白表达水平。使细胞外5’-DFUR转化为5-Fu增多．明显提高5’-DFUR对LOVO的细胞毒性作用。
高庆张继民刘剑王绮雯叶钿均刘影
关键词：结直肠肿瘤胸苷磷酸化酶基因转染氟尿嘧啶
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