刘双喜
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 供职机构：扬州大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省基础研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 淋病奈瑟菌rmp基因缺失突变株的构建及其抗体杀菌作用研究被引量：1
- 2013年
- 目的研究淋病奈瑟菌的外膜蛋白Rmp在免疫阻抑中的作用及其消除策略。方法PCR扩增淋病奈瑟菌rmp基因，将rmp中间200个核苷酸残基用卡那霉素抗性基因Kan取代，含rmp两侧侧翼区和Kan的DNA片段△rmp：Kan转化淋病奈瑟菌WHO—A菌株，PCR和Westernblot鉴定野生rmp被突变基因（△rmp：：Kan）取代并不能表达Rmp的突变株。突变株免疫小鼠，并用抗体介导的补体杀菌作用研究免疫血清的抗菌活性。结果构建了珊p基因缺失的淋病奈瑟菌突变株，突变株诱生的抗体具有更强的杀伤淋病奈瑟菌活性。结论淋病奈瑟菌丌印基因缺失突变株可能消除了野生株中Rmp的免疫阻抑作用，在新型全细胞减毒活疫苗研制中具有潜在应用价值。
- 李国才解如山冒艳丽刘双喜焦红梅陈红菊严华季明春
- 关键词：淋病奈瑟菌同源重组减毒活疫苗
- 人CD46基因启动子的克隆和启动特性研究被引量：4
- 2012年
- 为研究人CD46(hCD46)基因启动子的启动特性,研制具有hCD46组织特异性表达特征的转基因小鼠,设计扩增hCD46基因启动子的PCR引物,用HeLa细胞基因组DNA为模板扩增hCD46基因启动子DNA片段,测序结果表明:其序列与GenBank中hCD46完整基因5′端某片段的同源性高达99.9%。用此DNA片段替换表达载体pcD-NA3EGFP中的CMV启动子,且在该片段与EGFP基因之间插入兔β-球蛋白基因的第2内含子RGI。重构的表达载体在2种鼠源细胞CHO和SP2/0中均可启动EGFP表达,表达量与人体内同源组织中hCD46的相似,说明该研究克隆了结构和功能正确的hCD46基因启动子。
- 李国才刘双喜于峰杜庆辉王劲松潘兴元季明春焦红梅
- 关键词：EGFP启动特性淋球菌
- 人癌胚抗原相关细胞黏附分子1介导的小鼠淋病奈瑟菌易感性
- 2011年
- 目的研究制备淋病奈瑟菌感染人癌胚抗原相关细胞黏附分子1（hCEACAMl）转基因小鼠模型的可行性。方法用hCEACAMl真核表达载体pCDPGICEAl，通过显微注射法制备转基因小鼠，PCR及序列分析法检测目的基因在小鼠基因组中的整合，Westernblot及FACS技术检测目的基因的表达，镜检及培养法检查淋病奈瑟菌对转基因小鼠的感染。结果产生的22只F0代小鼠中4只为转基因整合阳性，其中1只可表达hCEACAMl蛋白，且目的蛋白表达在细胞膜上。淋病奈瑟菌可在转基因小鼠中形成感染。结论hCEACAMl转基因小鼠可作为淋病奈瑟菌感染研究的转基因动物模型。
- 李国才杜庆辉王晓红王劲松于峰刘双喜解如山焦红梅严华季明春
- 关键词：转基因小鼠淋病奈瑟菌易感性
- E.coli M15碱性磷酸酶的表达、纯化及活性分析被引量：2
- 2012年
- 目的:克隆、表达并纯化大肠杆菌M15碱性磷酸酶(EAP)成熟肽(phoA),分析其活性。方法:采用PCR技术从M15基因组DNA中扩增出phoA编码基因;构建其原核表达载体pCold-TF-EAP;转入E.coli BL21(DE3)进行表达;IMAC Ni-NTA柱层析法纯化重组蛋白;重组蛋白与底物对硝基苯磷酸二钠显色反应分析其活性。结果:克隆得到了序列约1 400 bp phoA编码基因,原核表达了分子量约为100 kDa的融合重组EAP(rEAP),纯化获得的rEAP具有催化磷酸单酯的活性,有效反应温度范围大,在27℃～67℃都具有较高的催化活性,在pH 7.5～8.0间催化活性最高。结论:克隆了可正确表达EAP的phoA编码基因,为EAP的工业化生产及应用提供了生物材料。
- 杜庆辉贺丽刘双喜张莉君冒艳丽朱小平焦红梅李国才
- 关键词：碱性磷酸酶活性鉴定
