侯开波
- 作品数：6 被引量：7H指数：1
- 供职机构：第四军医大学唐都医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HLA-G基因siRNA真核表达质粒的构建及其对转染JEG-3细胞株HLA-G表达的抑制作用被引量：1
- 2007年
- 目的:构建针对人类白细胞抗原-G基因(human leukocyte antigen-G,HLA-G)基因siRNA表达质粒,观察其对转染JEG-3细胞的HLA-G基因表达的抑制作用。方法:选择RNA干涉靶序列,体外合成两段互补的寡核苷酸,通过与线性化pSuppressor-U6-neo连接、转化大肠杆菌,扩增、纯化得到所需质粒,通过琼脂糖凝胶电泳及基因测序鉴定其分子量及插入片段的序列。将重组真核表达质粒pSuppressor-U6-neo-HLA-G用脂质体法转染JEG-3绒癌细胞株。应用RT-PCR、Western-blot方法检测转染的JEG-3细胞中HLA-G基因的表达水平。结果:双酶切鉴定及测序图显示,插入的寡核苷酸序列与设计的序列完全相符。RT-PCR和Western-blot结果均表明瞬时转染重组pSuppressor-U6-neo-HLA-G质粒明显抑制了JEG-3细胞中HLA-G基因的表达。结论:本试验成功构建了针对HLA-G基因的siRNAs表达质粒pSuppressor-U6-neo-HLA-G,瞬时转染JEG-3细胞后可以明显抑制HLA-G基因的表达。
- 陈建辉姚元庆侯开波王晓蓉雷迎峰尹文
- 关键词：HLA抗原转染JEG-3细胞
- RNA干扰技术抑制JEG-3细胞中HLA-G的表达被引量：4
- 2006年
- 目的:以人类白细胞抗原G基因(HLA-G)为靶基因,采用RNA干扰(RNAi)技术特异性地抑制JEG-3细胞中HLA-G的表达。方法:针对HLA-G基因设计一段小干扰RNA(siRNA),由Ambion公司化学合成,用脂质体lipofectamine2000将该siRNA转染JEG-3细胞,采用RT-PCR、流式细胞术和Westernblot分别从mRNA和蛋白质水平检测该siRNA对HLA-G表达的影响。结果:针对HLA-G的siRNA能够明显下调JEG-3细胞中HLA-G的表达水平,并具有良好的特异性。结论:在JEG-3细胞系中采用RNAi技术特异性下调了HLA-G基因的表达,为进一步研究HLA-G在人类的母胎免疫耐受、正常妊娠的维持及助孕技术应用等方面的作用奠定了实验基础。
- 侯开波姚元庆雷迎峰王晓红赵宏喜尹文朱晓明
- 关键词：HLA-GRNA干扰JEG-3细胞
- 人类白细胞抗原-GsiRNA真核表达载体的构建及稳定转染JEG-3细胞株的建立
- 人类白细胞抗原—G/(human leukocyte antigen-G，HLA-G/)属于非经典人类白细胞抗原Ⅰ类分子，主要有3个特点：选择性组织分布；有限的分子多态性；mRNA选择性剪接形成不同的异构体分子，分别编码...
- 侯开波
- 关键词：HLA-GRNA干扰JEG-3细胞
- 文献传递
- 人类白细胞相关抗原-G及其各亚型mRNA在正常妊娠及重度子前期患者胎盘组织中的表达被引量：1
- 2006年
- 目的研究人类白细胞相关抗原-G(HLA-G)及其各个亚型mRNA在正常妊娠及重度子前期患者胎盘组织中的表达。方法选取2005-01-2005-06第四军医大学唐都医院10例重度子前期患者(研究组)及10例正常妊娠胎盘组织(对照组),应用荧光定量RT-PCR比较两组间HLA-G及其各个亚型mRNA(HLA-G1、G2、G3、G4、G5、G6)的表达。结果与对照组相比,重度子前期患者胎盘组织中总HLA-GmRNA显著降低,以HLA-G1、HLA-G3降低为主,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HLA-G1与HLA-G3在胎盘组织中的低表达可能与妊娠期高血压疾病的发病和病理生理过程有关。
- 朱晓明杨瑛张惠中刘丽赵辉侯开波姚元庆
- 关键词：子痫前期HLA-G胎盘
- HLA-G短干扰RNA真核表达载体的构建及其在JEG-3细胞株中抑制HLA-G表达的研究
- 2006年
- 目的:构建HLA-G短干扰RNA表达质粒及探讨HLA-G的功能。方法:根据siRNA设计的原则,结合pSilencer2.1-U6-neo质粒的特点,针对HLA-G基因设计并合成两对寡聚DNA片段,退火后将其克隆入pSilencer2.1-U6-neo,将重组真核表达质粒pSi-lencer2.1-U6-neo-HLA-G采用脂质体法转染JEG-3绒癌细胞株。应用RT-PCR、W estern-blot等方法检测转染的JEG-3细胞中HLA-G基因的表达水平;MTT法检测转染后JEG-3细胞增殖的变化。结果:RT-PCR和W estern-blot结果均表明瞬时转染重组pSilencer2.1-U6-neo-HLA-G质粒明显抑制了JEG-3细胞中HLA-G基因的表达。实验组JEG-3细胞生长较对照组明显受到抑制。结论:pSilencer2.1-U6-neo-HLA-G质粒构建成功,可下调JEG-3细胞中HLG的表达,抑制绒癌细胞生长。
- 侯开波姚元庆雷迎峰朱晓明陈建辉
- 关键词：RNA
- 针对HLA-G的siRNA的载体构建与表达及效应检测被引量：1
- 2007年
- 目的构建针对HLA-G的siRNA的表达载体,研究其对NK细胞杀伤效应的影响。方法构建针对HLA-G的siRNA真核表达质粒pSuppressor-U6-neo-HLA-G,转染JEG-3滋养细胞系。采用RT-PCR、Western blot检测转染的JEG-3细胞中HLA-G的表达水平。将NK-92MI细胞(效应细胞)与滋养细胞(靶细胞)共同培养,以LDH释放法观察不同效靶比例时NK-92MI细胞对靶细胞的杀伤效应。结果NK-92MI细胞对转染针对HLA-G的siRNA的JEG-3细胞的杀伤作用较未转染细胞明显升高(P<0.001)。结论针对HLA-G的SiRNA增加NK细胞对滋养细胞的杀伤,HLA-G具有保护滋养细胞免受NK细胞杀伤的作用。
- 陈建辉姚元庆侯开波雷迎峰尹文
- 关键词：HLA-GSIRNA
