顾香芳
- 作品数：20 被引量：32H指数：3
- 供职机构：南京大学医学院附属鼓楼医院更多>>
- 发文基金：南京市医学科技发展项目南京市科技局人才培养基金江苏省科技厅社会发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Lipofectamine ^(TM)2000介导pIRES2-EGFP-NT3转染新生小鼠离体耳蜗基底膜的实验研究被引量：7
- 2007年
- 目的构建真核表达质粒载体pIRES2-EGFP-NT3,检测其在阳离子脂质体介导下对新生小鼠离体耳蜗基底膜的转染情况。方法构建含有目的基因NT3的真核表达质粒载体pIRES2-EGFP-NT3后,在阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导下将其转染新生小鼠离体耳蜗基底膜培养组织,转染后24 h,通过Confocal显微镜观察小鼠离体耳蜗基底膜的转染情况和转染效率。结果成功构建了真核表达质粒载体pIRES2-EGFP-NT3,通过阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导,该质粒在新生小鼠离体耳蜗基底膜转染的范围内转染进17个细胞,说明该质粒在阳离子脂质体介导下能转染新生小鼠离体耳蜗基底膜培养组织。结论含有目的基因NT3的真核表达质粒载体pIRES2-EGFP-NT3的成功构建,及其在阳离子脂质体介导下对新生小鼠离体耳蜗基底膜培养组织的有效转染,为研究NT3基因转染对正常及致聋小鼠耳蜗效应的实验奠定了基础。
- 陈杰高下朱敏生张文程麻晓峰顾香芳
- 关键词：耳蜗
- 特发性脊柱侧凸患者椎旁肌中神经营养素3的表达及意义被引量：3
- 2007年
- 目的:研究特发性脊柱侧凸(IS)患者椎旁肌组织中神经营养素3(Neurotrophin-3,NT-3)在核酸水平(mRNA)的表达情况。方法:随机选择19例IS患者,年龄12～19岁,平均14.3岁,Cobb角42°～80°(平均54°)。手术中取顶椎(T7～T10)凸侧、凹侧椎旁肌肉组织,采用半定量RT-PCR法检测NT-3 mRNA表达水平。取4例相同年龄段的椎间盘突出患者手术切口头端非病变部位椎旁肌肉组织作为对照。结果:对照组椎旁肌中NT-3的mRNA表达阳性率50%,相对表达量为0.0237±0.0158,IS组患者椎旁肌中表达阳性率63.16%,相对表达量为0.1213±0.0939,较对照组表达量增加(P=0.051)。9例Cobb角>50°的IS患者表达阳性率为44.44%,相对表达量0.0431±0.0359,和对照组无明显差异;10例Cobb角≤50°的IS患者中表达阳性率为80%,相对表达量为0.1604±0.0895,与对照组和Cobb角>50°的IS患者比较有明显增加(P<0.01)。结论:正常椎旁肌组织中NT-3在核酸水平微量表达,特发性脊柱侧凸患者椎旁肌组织中NT-3 mRNA表达增加,尤其在小角度IS患者中增加明显,提示IS患者中存在神经营养因子表达异常。
- 王嵘邱勇芮碧宇顾香芳夏才伟朱泽章
- 关键词：特发性脊柱侧凸椎旁肌神经营养素3逆转录-聚合酶链反应
- RNA干扰和伊马替尼杀伤K562细胞效果的比较
- 2008年
- 目的比较RNA干扰（RNAi）和伊马替尼（imatinib）杀伤K562细胞的效果。方法设计有效的bcr—abl干扰shRNA序列，利用基因工程技术插入到干扰载体构建RNAi质粒。测序鉴定正确的RNAi质粒转染K562细胞，48h后荧光显微镜观察转染效率。RT—PCR技术检测K562细胞中bcr—abl表达水平。同时，伊马替尼作用K562细胞。利用凋亡分析、MTT增生实验和磷酸化的酪氨酸蛋白含量检测来评估RNAi和伊马替尼作用效果。结果与伊马替尼一样，RNAi使K562细胞凋亡增强，增生减少，磷酸化的酪氨酸蛋白含量减少。结论RNAi达到伊马替尼杀伤K562细胞的效果，有望在临床用于治疗慢性髓细胞白血病（CML）患者，尤其是那些对伊马替尼等化疗药物不敏感的CML患者。
- 顾香芳孙雪梅陈军浩刘勇潘金顺
- 关键词：K562细胞RNA干扰
- HCCR1和HCCR2可溶性蛋白在细菌中表达、纯化及在早期肝癌诊断中的应用(英文)被引量：2
- 2006年
- 目的评估HCCR1和HCRR2克隆、细菌表达及可溶性蛋白的纯化及应用于早期肝癌诊断的可行性。方法cDNA克隆、表达、蛋白质的纯化、Westernblot分析用于评估HCCR1和HCCR2蛋白的生产,Elisa方法用检测血清抗原。结果HCCR1和HCCR2能够高水平地在细菌中表达,纯化的可溶性蛋白能用于生产抗体并应用于肝癌的早期诊断。结论HCCR1和HCCR2蛋白质可以在细菌中生产,并能成功地用于肝癌的早期诊断。
- 耿东进陈军浩顾香芳陈蕾蕾张乐刘勇韩鹂
- 关键词：肝细胞性肝癌重组蛋白
- 肝癌患者血清和癌组织中锌指蛋白216表达增加被引量：3
- 2008年
- 目的寻找肝癌相关抗原。方法应用SEREX技术对肝癌组织cDNA文库进行血清学筛选,获得人类锌指蛋白ZNF216。利用原核表达和亲和层析技术获得ZNF216的6*His融合蛋白,建立间接ELISA方法,检测血清中产生的ZNF216抗体水平;利用RT-PCR技术检测肝癌患者肝癌组织及癌旁组织内ZNF216 mRNA的水平。结果肝癌患者血清中产生的抗ZNF216抗体水平高于正常个体,ZNF216 mRNA在肝癌组织内的表达明显高于癌旁组织。结论ZNF216在肝癌病人血清及癌组织内的过表达可能参与肝癌的发生,但还需要进一步研究证明。
- 顾香芳余德才
- 关键词：肝癌SEREX肿瘤抗原
- 地高辛标记的ZNF216 cRNA探针的制备及鉴定
- 2006年
- 制备地高辛标记的ZNF216cRNA探针。将目的基因ZNF216重组到pBluescriptⅡSK(-)载体转录模板,EcoRⅠ和HindⅢ双酶切及测序。随后单酶切使模板线性化,利用T7和T3酶体外转录合成一对ZNF216cRNA探针,琼脂糖凝胶电泳及原位杂交技术检测ZNF216cRNA探针。结果表明,ZNF216cRNA探针制备成功,其敏感性和可信性高,为深入研究锌指蛋白ZNF216的功能提供了有用的工具。
- 顾香芳耿东进陈军浩
- 关键词：体外转录地高辛标记原位杂交
- 真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1的构建及其在HEK293T细胞中的表达被引量：2
- 2007年
- 目的构建真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1,并验证其在HEK293T细胞中的表达。方法从人的全血标本中提取DNA模板,经PCR获得Hath1-cDNA,将Hath1-cDNA和pIRES2-DsRed2质粒用限制性内切酶XhoⅠ、EcoRⅠ双酶切,酶切产物琼脂糖凝胶电泳,割胶纯化,前者回收1065bp片断,后者回收大片断,再将回收的2个片断用T4DNA连接酶连接,转化感受态DH5α细胞,挑选单克隆,提取质粒,将所提取的质粒双酶切鉴定并测序。再将构建成功的pIRES2-DsRed2-Hath1质粒通过脂质体LipofectamineTM2000转染HEK293T细胞,观测其转染情况和目的基因的表达情况。结果成功地构建了真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1,该质粒能有效地转染HEK293T细胞,目的基因能有效表达。结论pIRES2-DsRed2-Hath1的构建为Hath1基因转染致聋小鼠的耳蜗的实验奠定了基础。
- 陈杰高下朱敏生张文程麻晓峰顾香芳
- 关键词：基因克隆真核表达载体脂质体
- 单细胞反转录酶聚合链式反应技术对胰岛干细胞标记物胰岛素促进因子的鉴别
- 2006年
- 目的:利用干细胞分化获得胰岛细胞后目前还没有较理想的鉴别方法,实验通过单细胞反转录酶聚合链式反应技术鉴别胰岛干细胞标记物胰岛素促进因子,以建立一种检测胰岛干细胞的有效方法。方法:实验于2001-10/2005-08在加拿大多伦多大学和南京大学附属鼓楼医院完成。①将收集培养2～4周的单个胰岛干细胞用于实验。②胰岛活性测定实验中,选择1×106分化的胰腺干细胞,用低浓度和高浓度葡萄糖分别刺激1～4h,检测12,14,24d培养液中胰岛素的浓度。③单细胞反转录酶聚合链式反应检测胰岛素促进因子基因实验中,选择12个单个胰腺干细胞进行检测,另取12个单个未分化的干细胞作为对照。聚合链式反应体系为20μL。聚合链式反应扩增反应条件为94℃预变性4min,94℃变性30s,60℃退火30s,72℃延伸2min条件下循环35次。聚合链式反应产物以质量浓度为20g/L的琼脂糖凝胶电泳。结果:①分化的胰腺干细胞培养液中胰岛素浓度的检测:培养12,14,24d时培养液中胰岛素的浓度分别为42.6,68.2,73.5IU/L,随着时间的延长,呈逐渐升高的趋势。②单个胰岛干细胞胰岛素促进因子反转录酶聚合链式反应检测结果:12个单个胰岛干细胞中有7个胰岛素促进因子表达呈阳性,而作为对照的12个未分化干细胞均未检出,两者差异显著(P<0.001)。结论:采用单细胞反转录酶聚合链式反应检测方法为胰腺干细胞的鉴定和纯化提供了技术保障,证明单细胞反转录酶聚合链式反应是一种检测胰腺干细胞标记物的有效方法。
- 耿东进陈军浩陈蕾蕾张乐刘勇周锦勇顾香芳韩鹂
- 关键词：细胞分离胰岛素
- T细胞特异性转录因子T—bet、GATA3调控子痫前期辅助性T淋巴细胞1型免疫漂移的研究被引量：3
- 2010年
- 子痈前期是产科常见且严重的妊娠并发症，是导致围产儿及孕产妇死亡的重要原因^[1]。研究发现辅助性T淋巴细胞1和2（Thelper1／Thelper2，Th1／Th2）免疫状态向Th1漂移是子痢前期发病的重要免疫机制^[1-4]，因此研究子痫前期产生Th1型漂移的免疫调控机制有助于进一步了解其病理生理机制，目前国内外尚未见相关研究报道。
- 周建军胡娅莉王志群郑明明赵霞凌静娴顾香芳
- 关键词：辅助性T淋巴细胞1免疫调控机制子痫前期特异性转录因子GATA3病理生理机制
- 人Hath1-cDNA基因的克隆及其真核表达载体的构建被引量：4
- 2007年
- 目的克隆人Hath1-cDNA基因,构建其真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1。方法从人的全血标本中提取DNA模板,经PCR获得Hath1-cDNA,将Hath1-cDNA和pIRES2-DsRed2质粒用限制性内切酶XhoⅠ、EcoRⅠ双酶切,酶切产物琼脂糖凝胶电泳,割胶纯化,前者回收1065 bp大小片断,后者回收大片断,再将回收的2个片断用T4 DNA连接酶连接,转化DH5α,挑选单克隆,提取质粒,所提质粒进行双酶切鉴定并测序。结果成功地从人全血中克隆出Hath1-cDNA,并构建了其真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1。结论pIRES2-DsRed2-Hath1的构建为Hath1基因转染致聋小鼠耳蜗的实验奠定了基础。
- 陈杰高下麻晓峰顾香芳
- 关键词：基因克隆真核表达载体耳蜗
