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韩晓: 作品数：86 被引量：137H指数：6; 供职机构：南京医科大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金南京医科大学科技发展基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学经济管理更多>>

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MiRNA-24、miRNA-34a和miRNA-375抑制小鼠胰岛β细胞系MIN6细胞中Neurod1／BETA2的蛋白表达被引量：3: 2015年; 目的在小鼠胰岛β细胞系MIN6细胞中分析miRNA-24、miRNA-34a和miRNA-375对Neurod1／BETA2的表达调控以及作用方式。方法设计并合成针对小鼠Neurod1基因3’非翻译区（3’untranslated region,3’UTR）序列的引物，克隆于pMIR-REPORT^TM荧光素酶报告基因载体中；用miranda软件预测可能调控Neurod1表达的miRNAs，挑选在B细胞中有相关功能研究的miRNAs并委托公司合成pre—miRNAs；脂质体法转染至MIN6细胞中。荧光素酶报告基因技术分析这些miRNA对Neurod1的作用；定量RT．PCR分析Neurod1的mRNA水平；Western印迹检测Neurod1的蛋白表达水平；GSIS检测干扰Neurod1后MIN6细胞的功能。结果成功制备小鼠Neurod1基因的3’UTR荧光素酶报告基因载体；选取了预测在Neurod1的3’UTR有互补结合位点的3个miRNAs（miRNA-24、miR-34a和miR．375），并挑选一个没有互补结合位点的miRNA（miR-29a）作为阴性对照；在MIN6细胞中过表达pre-miRNA-24、pre-miR-34a和pre-miR-375能够抑制Neurod1基因3’UTR荧光素酶报告基因的活性，而过表达阴性对照miRNA-29a则不能抑制其活性；pre—miRNA-24、pre-miR-34a和pre-miR-375还可以不同程度抑制Neumd1的蛋白表达；在MIN6细胞中干扰Neurod1蛋白表达能够降低细胞的GSIS功能。结论miRNA-24、miR-34a和miR-375能够抑制小鼠胰岛B细胞系MIN6细胞中Neurod1的蛋白表达。; 张许朱云霞韩晓; 关键词：胰岛Β细胞

小鼠Derlin-1重组腺病毒的构建及在胰岛中的表达鉴定: 2014年; 目的构建小鼠Derlin-1重组腺病毒载体，包装、纯化并检测病毒滴度，观察重组腺病毒在小鼠胰岛中的表达。方法设计合成针对小鼠Derlin-1基因cds区的引物序列，采用PCR的方法以小鼠胰岛cD．NA为模板，扩增目的基因Derlin-1。经XbaⅠ和HindⅢ双酶切后，克隆至AdTrack-CMV穿梭质粒上，与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组，通过脂质体将正确的重组体包裹并转染293A细胞，在其中包装扩增病毒。利用穿梭质粒中所带绿色荧光蛋白GFP，对病毒滴度和感染效率进行检测。最终得到pAd-Derlin-1重组腺病毒载体，体外转染小鼠胰岛，使用Western印迹法检测Derlin-1蛋白表达水平。结果酶切鉴定证明Derlin-1基因重组腺病毒构建成功，病毒有较强感染能力。并验证其在小鼠胰岛中成功过表达。结论应用同源重组方法成功构建了含小鼠Derlin-1基因的重组腺病毒。为进一步研究Derlin-1在胰岛β细胞中的作用奠定了基础。; 刘佳汪彦阳吴倜珺单伟韩晓; 关键词：重组腺病毒糖尿病胰岛Β细胞

硅橡胶缓释管的筛选及体内埋植效果验证被引量：2: 2015年; 目的筛选出一种制作简便、在体内有效工作的皮下埋植用硅橡胶缓释管，为研究药物的长期效应及毒副作用提供可靠的实验方法。方法以双氢睾酮作为试验用药物、雌性sD大鼠为动物模型，筛选出两种自制硅橡胶缓释管中性能（生物兼容性、体内稳定性）较优者，并进一步验证其在体内的释药效果。结果用医用粘合剂制作的硅橡胶缓释管封闭牢靠（体内稳定性好）、无明显的异物排斥反应（生物兼容性好）。并可在体内有效工作，明显优于用木质敷药棒制作的缓释管。结论用医用粘合剂制作的硅橡胶缓释管是一种适用于体内长期埋植的缓释管，可用于双氢睾酮等药物长期缓释给药和构建动物模型。; 王霞萍韩晓; 关键词：双氢睾酮

P27特异性siRNA重组腺病毒载体的构建及功能鉴定: 2010年; 目的构建针对P27的siRNA腺病毒载体及相应的对照病毒载体，并鉴定重组腺病毒在小鼠胰岛中对内源性皿7基因表达的影响。方法合成针对p27的siRNA的靶DNA序列及相应的阴性对照序列，连接至pShuttle-H1质粒中，然后用NotI和HindHI限制性内切酶将H1-siRNA片段从pShuttle—H1-siRNA质粒上双酶切下来，克隆至空载pAdTrack穿梭质粒上，与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组，转染QBI-293A细胞，包装得到pAd—P27-siRNA和pAd—NC重组腺病毒。用病毒体外感染小鼠胰岛，Western印迹法检测P27蛋白表达水平。结果重组腺病毒载体经测序鉴定正确，制备的病毒感染效率高，能有效抑制小鼠胰岛中P27的表达。结论成功构建了针对P27的siRNA重组腺病毒载体，为进一步研究P27在胰岛β细胞生长中的作用提供了基础。; 林艳汤心怡韩晓; 关键词：P27 小干扰RNA 腺病毒载体

ERα propelled aberrant global DNA hypermethylation by activating the DNMT1 gene to enhance anticancer drug resistance in human breast cancer: Drug-induced aberrant DNA methylation is the first identified epigenetic marker involved in chemotherapy resis...; 司鑫鑫刘玥吕京澴丁海建张欣邵立培杨楠程禾孙鸾朱栋梁杨音李安迪韩晓孙玉洁; 关键词：ERΑ; 文献传递

3T3-L1前脂肪细胞分化过程中自噬的发生与线粒体数目的改变被引量：1: 2015年; 目的 :探索3T3-L1前脂肪细胞分化过程中自噬的发生与线粒体数目改变的关系。方法 :培养3T3-L1前脂肪细胞,利用电子显微镜技术观察细胞分化过程中自噬小泡的形成与变化、线粒体数目的改变,同时运用Western blot检测NRF1、mt TFA的表达。结果:电镜结果显示:在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中,自噬小泡出现在细胞分化的第2天,随后迅速增加,第4天自噬小泡的面积达到最大,第6天开始消失;线粒体数目在分化第2天显著下降,第4天开始逐渐增加,到第6天超过分化前的水平并在第8天恢复;在分化过程中的自噬小泡内,有被吞噬的线粒体。Western blot结果则显示调控线粒体合成的转录因子NRF1、mt TFA的表达在分化第2天显著下降,第4天迅速升高,至分化末期再次下降。结论 :3T3-L1前脂肪细胞分化过程的早中期形成了大量的自噬小泡,包括一些线粒体自噬,这些线粒体自噬的发生可能是分化早期线粒体数目减少的原因之一。; 张许林海燕尹业韩晓程光; 关键词：自噬脂肪细胞分化线粒体

孕中期血浆脂联素水平与妊娠糖尿病相关性研究被引量：1: 2007年; 目的探讨孕中期血浆脂联素水平与妊娠糖尿病(GDM)的相关性。方法选取305名孕妇于孕24～28周做75g口服葡萄糖耐量试验,其中218名葡萄糖耐量正常,35名确诊为GDM。空腹血样的检测指标包括血浆脂联素、血糖、胰岛素、游离脂肪酸(FFA)及血脂水平。OGTT1h、2h血样检测指标包括血糖、胰岛素水平。结果GDM孕妇孕中期血浆脂联素浓度明显低于糖耐量正常组(P=0.014);多元Logistic回归分析显示:在排除了血浆脂联素和FFA影响因素外,母亲孕前BMI和GDM仍保留着明显的相关性(P=0.017);肥胖妇女孕中期的脂联素水平明显低于非肥胖组;在正常糖耐量组,血浆脂联素水平与空腹胰岛素浓度、甘油三酯浓度、OGTT1h血糖水平、BMI(孕中期和分娩时)呈显著负相关,而与高密度脂蛋白和胆固醇浓度呈显著正相关;在GDM组,血浆脂联素水平与低密度脂蛋白浓度和新生儿出生体重显著负相关。结论孕中期低脂联素水平与GDM高风险相关。; 徐宜清韩晓; 关键词：脂联素妊娠糖尿病体重指数游离脂肪酸

TNF-α通过JNK和AP-1途径调节乳腺癌MCF-7细胞VEGF的表达被引量：18: 2009年; 目的:探讨肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导血管内皮生长因子(vascular endothelial growth fac-tor,VEGF)表达的机制。方法:以20 ng/ml TNF-α处理MCF-7细胞,用Western blotting检测MAPK(JNK,p38,ERK)信号通路中蛋白磷酸化水平的变化以及AP-1家族(c-Jun,Jun-B,c-Fos,Fra-1,Fra-2,JunD)的蛋白表达及磷酸化水平的变化;以免疫共沉淀法检测激活后的AP-1存在形式;以RT-PCR以及Western blotting检测VEGF mRNA和蛋白表达水平;以MAPK抑制剂预处理后,检测VEGF蛋白表达水平;运用ChIP的方法验证p-c-Jun结合在VEGF启动子区。结果:TNF-α通过激活JNK信号转导通路活化AP-1;被TNF-α激活后AP-1以p-c-Jun-c-Jun和p-c-Jun-JunB同源二聚体形式存在;TNF-α通过激活转录因子AP-1促进VEGF的转录,并增强VEGF的蛋白表达水平;p-c-jun通过与VEGF启动子AP-1结合参与对VEGF转录的调控。结论:在TNF-α作用下,AP-1通过p-c-jun同源二聚体结合在VEGF启动子的AP-1结合位点上,直接对VEGF转录进行调控。; 殷咏梅束永前陈晓锋李薇刘凌翔韩晓; 关键词：肿瘤坏死因子-Α 血管内皮细胞生长因子激活蛋白-1

TIMP-3 N端结构域重组腺病毒载体的构建与鉴定被引量：2: 2008年; 目的构建N-TIMP3重组腺病毒载体,为深入研究组织金属蛋白酶抑制因子-3(tissue inhibitor of metalloproteinases-3,TIMP-3)N端结构域对胰腺癌的作用奠定基础。方法PCR扩增编码人TIMP3信号肽及其N端结构域的DNA序列,定向克隆至空载穿梭质粒pShuttle-CMV,构建重组穿梭质粒pShuttle-N-TIMP3,并测序鉴定。将重组pShuttle-N-TIMP3转化BJ5183感受态细菌,与其内的腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组,构建重组腺病毒载体pAd-N-TIMP3,并经酶切与PCR鉴定。将线性化的重组载体转染QBI-293A细胞包装病毒,TCID50法检测病毒滴度,用Western印迹检测目的蛋白的表达。结果重组腺病毒载体pAd-N-TIMP3经鉴定正确,病毒滴度为5×108PFU/ml,并检测到目的蛋白的表达。结论成功构建了重组腺病毒载体pAd-N-TIMP3。; 朱自强郑马庆余莹周小华朱云霞韩晓; 关键词：N端结构域腺病毒载体

TNF-α对人乳腺癌MCF-7细胞株CD44表达以及细胞侵袭性的影响被引量：3: 2008年; 目的:检测TNF-α作用前后人乳腺癌细胞株MCF-7中CD44s、CD44v3和CD44v6的表达水平的变化,及对细胞侵袭能力的影响。方法:采用RT-PCR和Westernblot方法检测TNF-α作用前后人乳腺癌细胞株MCF-7中CD44s、CD44v3和CD44v6的表达情况,了解TNF-α对CD44各亚型表达水平的影响;Transwell检测TNF-α作用前后人乳腺癌细胞株MCF-7侵袭力的变化情况。结果:TNF-α作用后,MCF-7细胞株CD44smRNA表达下降,CD44v3mRNA和CD44v6mRNA的表达上升。相应蛋白表达与mRNA水平呈现一致性改变,其中CD44s蛋白表达下降,CD44v3蛋白和CD44v6蛋白表达上升;TNF-α作用后细胞侵袭力提高(P<0.001)。结论:在人乳腺癌细胞株MCF-7中,TNF-α可能通过影响CD44各亚型mRNA和蛋白表达水平,进而促进肿瘤细胞的侵袭能力。; 李晓敏王水夏金晶季旻珺殷咏梅韩晓; 关键词：乳腺癌 CD44 TNF-Α

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