邹立林
- 作品数：28 被引量：42H指数：5
- 供职机构：温州医科大学更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省医药卫生科学研究基金浙江省科技厅重点资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- SHV-4型ESBL在pET26b/BL(DE3)中的表达纯化及其特性研究被引量：3
- 2007年
- 目的:表达SHV-4型超广谱β-内酰胺酶,对纯化的SHV-4酶进行特性研究。方法:将SHV-4基因克隆到pET26b表达质粒,重组质粒转入E.coli BL21(DE3)构建工程菌,重组工程菌经摇瓶发酵后获得种子菌,种子菌转入发酵罐发酵,当菌体密度OD600为0.8时,加入诱导剂IPTG至终浓度为1.0mmol/L,于37℃培养6h。培养液离心收获菌体沉淀,其超声裂解上清液进行Ni2+亲和层析,获取的SHV-4酶进行分子量、纯度、等电点、最适条件、米氏常数、催化常数等特性进行分析。结果:SDS-PAGE电泳,等电聚焦电泳及系列的酶动力学实验表明SHV-4酶分子量约为30kD,纯度大于95%,等电点为7.9,最适pH值为6.0～8.0,最适温度为37℃,以头孢硝噻吩为底物测定的Km值为2.61×10-6mol/L,Kcat为258s,Kcat/Km为9.88×107mol-1·s-1·vL。结论:重组的SHV-4酶初步满足制成商品酶的条件。
- 王震叶明君邹立林季敬璋陈秀枢吕建新
- 关键词：超广谱Β-内酰胺酶纯化
- RT-qPCR检测人IL-6 mRNA的方法建立与运用
- IL-6是由淋巴类及非淋巴类细胞产生的一种多功能细胞因子,对免疫应答、急性期反应、炎症反应、造血系统和神经系统等有多方面的作用。IL-6的异常表达是某些疾病的典型特征,如多发性骨髓瘤、过敏性哮喘、Ⅰ型糖尿病等病人体内均发...
- 邹立林吕建新陆永绥
- 关键词：单个核细胞RT-QPCR
- 用于结核杆菌培养滤液蛋白10(CFP-10)定量检测的标准品研制
- 本发明提供了一种融合蛋白，该蛋白由接头肽连接一链亲和素和一结核杆菌培养滤液蛋白10构成，其接头肽氨基酸序列为Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly ...
- 高基民吕建新邹立林郭芳芳许晓玲
- 氨基糖苷-(3)-乙酰转移酶II的表达纯化及初步活性
- 2007年
- 用PCR扩增的氨基糖苷-(3)-乙酰转移酶II[aac(3)-II]基因构建了能表达较高活性AAC(3)-II的重组工程菌,并获取重组AAC(3)-II。含pET28a质粒的工程菌转入aac(3)-II基因前后对氨基糖苷类抗生素的最低抑菌浓度进行比较,重组菌超声裂解上清液及其纯化的AAC(3)-II进行SDS-PAGE和Western印迹电泳鉴定。最低抑菌浓度表明转入aac(3)-II基因的工程菌比未转入的工程菌对庆大霉素(gentamicin,GEN)的提高了256倍,对妥布霉素(tobramycin,TOB)及其奈替米星(netilmicin,NTL)提高了16倍,电泳鉴定表明纯化获取的是重组AAC(3)-II,其相对分子质量约为32kDa,纯度大于95%,纯化后的10μgAAC(3)-II,分别在10s内使80μgGEN、30s内使80μgTOB和NTL乙酰化而失去抑菌作用。研究为氨基糖苷类抗生素伴侣的开发研究初步打下基础。
- 王震陈云波查长森邹立林彭颖季敬璋陈秀枢吕建新
- 关键词：最低抑菌浓度氨基糖苷类抗生素
- 细脚拟青霉多糖抑制肿瘤细胞的增殖和诱导外周血单个核细胞细胞因子的表达
- 目的探讨细脚拟青霉多糖的免疫调节和抗肿瘤活性。方法应用水提、乙醇沉淀和层析技术从细脚拟青霉菌丝体中纯化出细脚拟青霉多糖组分I (Paecilomyces tenuipes polysaccharide I,PTPS-I)...
- 左江成邹立林金丽琴吕建新
- 关键词：细脚拟青霉多糖抗肿瘤
- 细脚拟青霉多糖体外抗肿瘤作用及其机制的实验研究被引量：14
- 2008年
- 目的:通过观察细脚拟青霉多糖的体外抗肿瘤活性,初步探讨其作用机制。方法:采用水提,乙醇沉淀,DEAE-纤维素和Sephadex G-100柱层析分离纯化多糖PTPS-I;以PTPS-I和经PTPS-I刺激培养的人外周血单个核细胞(MNC)的条件培养基(PTPS-I-MNC-CM)作用于体外培养的红白血病细胞K562、喉癌细胞Hep2和肝癌细胞SMMC-7721,观察PTPS-I和PTPS-I-MNC-CM对其增殖活性的影响;用cell counting kit-8(CCK-8)检测MNC的增殖活性;以荧光定量PCR检测MNC中TNF-α和IL-6 mRNA的表达。结果:PTPS-I-MNC-CM能抑制K562,Hep2和SMMC-7721细胞的增殖(均为P<0.01);PTPS-I不能抑制肿瘤细胞的增殖(P>0.05),没有显现直接的细胞毒作用。PTPS-I能促进MNC的增殖(P<0.01)和增强TNF-α和IL-6 mRNA的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:PTPS-I具有免疫调节活性,通过免疫调节发挥抗肿瘤作用。
- 左江成吕建新金丽琴邹立林李东明镇寰
- 关键词：拟青霉多糖类抗肿瘤活性免疫力
- RT-qPCR检测人IL-6mRNA的方法建立与运用
- 目的:建立实时定量检测人IL-6mRNA的方法并加以应用。方法:抽取人外周静脉血,EDTA抗凝,用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,用Trizol裂解液提取总RNA,将总RNA逆转录为cDNA,然后用IL-6引物进行实...
- 邹立林吕建新陆永绥
- 关键词：白细胞介素-6逆转录-聚合酶链反应
- 人TNF-αmRNA实时荧光定量PCR检测标准的构建被引量：5
- 2004年
- 目的 :克隆人TNF αcDNA ,作为人TNF αmRNA定量检测的标准品。方法 :用RT PCR法从人外周血单个核细胞的总mRNA中逆转录扩增TNF α的cDNA ,将纯化的TNF αcDNA与pUCm T载体进行连接 ,转化宿主菌DH 5α ,然后提取重组质粒DNA ,用限制性核酸内切酶HindⅢ、EcoRⅠ进行双酶切鉴定并测序分析 ,最后对质粒标准进行实时荧光定量PCR检测。用聚乙二醇沉淀法纯化质粒并检测λ2 6 0nm吸光度 ,确定原液的重组质粒拷贝浓度并以此制备荧光定量PCR梯度浓度标准品。结果 :酶切鉴定、PCR扩增及测序分析均证实TNF αcDNA重组到pUCm T载体上。结论 :成功克隆了TNF
- 郑晓群邹立林吕建新
- 关键词：肿瘤坏死因子-Α核糖核酸信使逆转录-聚合酶链反应
- 时间分辨荧光免疫分析法检测心肌肌钙蛋白Ⅰ方法学的建立及临床应用被引量：5
- 2014年
- 目的:建立时间分辨荧光免疫分析检测心肌肌钙蛋白Ⅰ的方法并应用于临床。方法:采用时间分辨荧光免疫分析及双抗体夹心法,对检测体系的标准曲线、最低检测量、稳定性、精密度和交叉反应等相关性能指标进行评价,通过检测健康体检人员及临床急性心肌梗死患者血清标本并与目前应用于临床的微粒子发光法进行比对,评价TRFIA方法的临床应用可行性。结果:该方法检测肌钙蛋白I的标准曲线Y=7 485.878+1 400.924X,相关系数为0.999,最低检测限为0.052 ng/ml。批内、批间精密度均<10%。该方法的正常参考范围为<0.14μg/L,ROC曲线的AUC为0.971,敏感度96.45%,特异性91.43%,准确度95.69%,阳性预示值98.45%,阴性预示值82.05%。该方法与微粒子发光法具有很强的相关性(r=0.993),与ECG、cTnT、CK-MB没有明显的统计学差异(P>0.05)。急性心肌梗死患者治疗前后的检测结果具有明显的统计学差异(P<0.001)。结论:时间分辨荧光免疫分析法检测肌钙蛋白Ⅰ符合临床诊断的相关要求,可应用于临床急性心肌梗死患者的诊断及疾病检测。
- 张洁卢玲玲潘晓夫邹立林高基民
- 关键词：时间分辨荧光免疫分析心肌梗死
- 肺炎克雷伯菌耐氨基糖苷类抗生素基因aac(3)-I的改构与功能
- 2007年
- 研究氨基糖苷乙酰转移酶基因aac(3)-I碱基变异与功能的关系。构建表达载体pET28a-aac(3)-I,转化感受态细胞E.coli BL21(DE3),筛选到阳性克隆送测序。然后在体外对aac(3)-I基因进行易错PCR改造,筛选到一株阳性克隆测序后发现7处碱基变异,其中C272T、T373C引发了氨基酸的变异,分别对应:Ser91Phe、Tyr125His。以琼脂稀释法检测不同克隆的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。实验结果表明变异株MIC较突变前下降64倍(庆大霉素)、4倍(阿米卡星)、8倍(依替米星)。为进一步了解和阐明耐药酶AAC(3)-I与底物的作用机制打下基础。
- 查长森王震吕建新陈云波邹立林季敬璋彭颖明镇寰
- 关键词：易错PCR最低抑菌浓度
