薛斐
- 作品数：10 被引量：8H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生水利工程更多>>
- 基孔肯雅病毒和辛德毕斯病毒可视化基因芯片与荧光基因芯片的建立被引量：1
- 2014年
- 根据GenBank中收录的基孔肯雅病毒和辛德毕斯病毒E蛋白基因序列,设计及筛选针对2种病毒的寡核苷酸探针及引物,制备基孔肯雅病毒与辛德毕斯病毒可视化基因芯片与荧光基因芯片,对芯片的灵敏性、特异性进行了验证,并将可视化基因芯片、荧光基因芯片进行灵敏性比较.结果显示,制备的两种基因芯片都能检测到基孔肯雅病毒和辛德毕斯病毒特异性杂交信号.可视化基因芯片、荧光基因芯片检测两种病毒质粒的灵敏度达到9.1×103copies/mL,6.8×101copies/mL和9.1×104copies/mL,6.8×103copies/mL,与普通PCR比较差异显著.荧光基因芯片灵敏度是PCR方法的10倍,可视化基因芯片是荧光基因芯片灵敏度的100倍.模拟病毒检测过程特异性检验证明,可视化基因芯片都具有良好的特异性.本试验建立了基孔肯雅病毒与辛德毕斯病毒两种特异的可视化和荧光基因芯片检测方法,两种方法灵敏度高、特异性强,适用于基孔肯雅病毒与辛德毕斯病毒的流行病学调查和种特异性鉴定.
- 薛斐田明尧辛舒任静强孙文超阎富龙温树波鲁会军田宇飞金宁一
- 关键词：基孔肯雅病毒辛德毕斯病毒基因芯片可视化
- 人干扰素诱导跨膜蛋白基因实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：4
- 2013年
- 目的建立人干扰素诱导跨膜蛋白(Interferon induced transmembrane protein,IFITM)1、2、3基因实时荧光定量PCR检测方法。方法根据GenBank中登录的人IFITM1、2、3及β-actin基因序列,分别设计4对特异性引物,以质粒pVAX1-IFITM1、2、3和pMD18-T-β-actin为模板,分别进行PCR及实时荧光定量PCR扩增,优化实时荧光定量PCR反应体系及反应条件,绘制标准曲线及扩增曲线,建立实时荧光定量PCR检测方法,并验证该方法的重复性、灵敏度及特异性。结果各质粒的PCR及实时荧光定量PCR产物经琼脂糖凝胶电泳分析,均可见大小与理论值相符的特异性条带。IFITM1、2、3和β-actin的最佳荧光定量PCR引物浓度分别为0.2、0.5、0.4和0.5μl,最佳退火温度为55℃。各质粒标准曲线的循环数与起始模板拷贝数的相关性均较好(R2分别为0.998、0.990、0.990和0.995),扩增效率分别为106.284%、101.030%、104.929%和101.962%。IFITM1、2、3基因不同拷贝数的试验内CV为0.14%-0.72%,试验间CV为0.77%-1.58%;灵敏度分别为2.52×100、1.3×100和3.7×101copies;该方法未扩增出鸡肝脏及禽流感病毒H3N2 cDNA,可特异性扩增B型流感病毒cDNA,各标准质粒的溶解曲线约在同一温度出现1个单峰。结论已成功建立了IFITM1、2、3基因实时荧光定量PCR检测方法,该方法具有较高的重复性、灵敏度及特异性,为进一步研究IFITM1、2、3的功能及其基因表达与肿瘤发生发展的相关性奠定了基础。
- 袁森田明尧崔鹤馨靖杰刘昊刘存霞任静强姜庆利薛斐金宁一
- 关键词：实时荧光定量PCR
- 乙型脑炎病毒可视化分型基因芯片的制备被引量：2
- 2014年
- 目的:制备乙型脑炎病毒(JEV)可视化分型基因芯片。方法:根据JEV的基因组序列,应用生物学软件设计JEV分型引物及探针,制备其可视化分型基因芯片;用生物素标记的引物PCR扩增目的片段,并与固定于玻片上的探针杂交,加入链霉亲和素标记的纳米金,银增强实现可视化;进行特异性、灵敏性及重复性试验。结果:探针特异地与相应的标记目的基因片段杂交,并在芯片上呈现较强的阳性杂交信号;2号探针能特异性检出JEV,3、4号探针可分别对Ⅰ型和Ⅲ型JEV进行分型;芯片对JEV质粒检测的灵敏度达105拷贝/mL;以蓝耳病病毒等5种病毒为对照,芯片只对JEV响应,具有特异性;制备的基因芯片具有批间、批内重复性。结论:制备的基因芯片具有高特异性、灵敏性及重复性,可以快速、准确、高通量地对JEV进行可视化分型检测。
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- 关键词：乙型脑炎病毒基因型基因芯片可视化
- 基孔肯亚病毒和辛德毕斯病毒可视化检测基因芯片研究
- 研究背景:基孔肯雅病毒(Chikungunya Virus,CHIKV)和辛德毕斯病毒(Sindbis Virus,SINV)是甲病毒属单链RNA病毒,经蚊虫传播,在世界范围内广泛分布,有致病快,传播迅速等特点,其流行严...
- 薛斐田明尧辛舒曹佳嫒孙文超金宁一
- 关键词：基孔肯亚病毒辛德毕斯病毒可视化
- 表达基因Ⅶ型新城疫病毒F蛋白的重组鸡痘病毒的构建和筛选被引量：1
- 2015年
- 为了构建并筛选表达新城疫病毒(NDV)F蛋白的重组鸡痘病毒(rFPV-F),通过PCR扩增F基因,克隆至pMD18-T Simple载体,进行DNA序列分析和遗传进化关系分析。将测序正确的F基因克隆至笔者所在实验室自行构建的新型鸡痘病毒穿梭载体pTS2GFPV150中,获得重组质粒pTS2GFPV150-F。然后将其与鸡痘病毒FPV282E4株共转染鸡胚成纤维细胞进行同源重组,挑取表达增强型绿色荧光蛋白的噬斑,经多轮筛选获得重组病毒rFPV-F,应用PCR、RT-PCR、Western-blot等方法对重组鸡痘病毒进行鉴定。结果显示,成功获得NDV F基因及重组F基因的鸡痘病毒rFPV-F,并证实F基因已被整合到鸡痘病毒基因组中,且在感染细胞内被成功表达。本研究成功获得了1株表达NDV F基因的重组鸡痘病毒,为下一步开展动物体内免疫研究奠定了基础。
- 辛舒田明尧曹佳媛薛斐杜寿文谭鹏肖朋朋陈兴郭海宁金宁一
- 关键词：新城疫病毒F蛋白同源重组
- 人干扰素诱导跨膜蛋白基因实时荧光定量PCR检测方法的建立
- 研究背景:人干扰素诱导跨膜蛋白(Interferon induced transmembrane protein,IFITM)基因家族包括IFITM1,IFITM2,IFITM3和IFITMS,其中IFITM1,2,3在...
- 袁森辛舒曹佳嫒薛斐田明尧金宁一
- 关键词：实时荧光定量PCR
- 用于检测H7N9亚型流感病毒的引物组合及检测试剂盒
- 本发明提供一种用于检测H7N9亚型流感病毒的引物组合及含有所述引物组合的检测试剂盒。所述引物组合包括特异性扩增H7N9亚型流感病毒HA基因的引物对（Seq ID No.1和2）以及特异性扩增H7N9亚型流感病毒NA基因的...
- 金宁一田明尧鲁会军李昌李霄周博胡宁宁薛斐辛舒
- 文献传递
- 人干扰素诱导跨膜蛋白基因实时荧光定量PCR检测方法的建立
- 研究背景:人干扰素诱导跨膜蛋白(Interferon induced transmembrane protein,IFITM)基因家族包括IFITM1,IFITM2,IFITM3和IFITMS,其中IFITM1,2,3在...
- 袁森辛舒曹佳嫒薛斐田明尧金宁一
- 关键词：实时荧光定量PCR
- 文献传递
- 用于检测H7N9亚型流感病毒的引物组合及检测试剂盒
- 本发明提供一种用于检测H7N9亚型流感病毒的引物组合及含有所述引物组合的检测试剂盒。所述引物组合包括特异性扩增H7N9亚型流感病毒HA基因的引物对（Seq ID No.1和2）以及特异性扩增H7N9亚型流感病毒NA基因的...
- 金宁一田明尧鲁会军李昌李霄周博胡宁宁薛斐辛舒
- 文献传递
- 基孔肯亚病毒和辛德毕斯病毒可视化检测基因芯片研究
- 研究背景:基孔肯雅病毒(Chikungunya Virus,CHIKV)和辛德毕斯病毒(Sindbis Virus,SINV)是甲病毒属单链RNA病毒,经蚊虫传播,在世界范围内广泛分布,有致病快,传播迅速等特点,其流行严...
- 薛斐田明尧辛舒曹佳嫒孙文超金宁一
- 关键词：基孔肯亚病毒辛德毕斯病毒可视化
- 文献传递
