王立伟
- 作品数：96 被引量：266H指数：9
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- ClC-3 siRNA抑制鼻咽癌细胞调节性容积回缩被引量：4
- 2011年
- 目的用siRNA沉默ClC-3氯通道,探讨ClC-3氯通道在鼻咽癌CNE-2Z细胞调节性容积回缩(regulatory volumedecrease,RVD)中的作用。方法使用终浓度100 nmol/L的ClC-3 siRNA转染鼻咽癌CNE-2Z细胞,流式细胞术检测siRNA的转染率,Western blotting检测ClC-3蛋白表达,活细胞图像系统分析对照组和ClC-3 siRNA组细胞在低渗(160mOsm/L)刺激时的容积调节能力。结果 ClC-3 siRNA转染率为(63.8±3.8)%(n=3,P<0.01),与对照组相比,ClC-3氯通道蛋白的表达减少(60.9±4.0)%(n=3,P<0.01)。对照组细胞的RVD为(42.6±2.8)%(n=20),ClC-3 siRNA组细胞在低渗液中的最大容积与对照组没有显著性差异,但RVD仅为(10.5±4.8)%,RVD抑制率达75.4%(P<0.01)。结论 ClC-3 siRNA成功转染鼻咽癌CNE-2Z细胞,特异性抑制ClC-3蛋白表达,显著降低细胞RVD能力,提示ClC-3氯通道在鼻咽癌细胞调节性容积回缩中起重要作用。
- 叶东张海峰朱林燕王立伟陈丽新
- 关键词：SIRNA鼻咽癌细胞细胞容积
- 酶标法测定脑脊液和血清中的苯巴比妥钠被引量：2
- 2014年
- 目的:建立一种适用于实验室高通量测定动物脑脊液和血清中苯巴比妥纳药物浓度的方法.方法:通过测定各反应物的吸收光谱,确定荷移反应络合物的波长,并使用该波长分别测定苯巴比妥钠在去离子水、动物脑脊液和动物血清中的吸光度,并制定标准曲线.同时通过重复测定特定浓度的苯巴比妥钠吸光度进行仪器稳定性分析,从而建立荷移酶标法测定动物脑脊液和血清中苯巴比妥钠的方法.结果:在水溶液中,苯巴比妥钠与茜素红产生的荷移络合物的最大吸收波长为522 nm,苯巴比妥钠浓度在4~128μmol/L范围内符合比尔定律,蒸馏水组相关系数R^2=0.998,脑脊液组R^2=0.995,血清组R^2=0.991,各实验组线性关系良好.当苯巴比妥钠浓度为64μmol/L时,酶标法9次测定结果的相对标准偏差为0.03%.分光光度法的标准偏差为0.75%.结论:使用酶标法测定脑脊液和血清中的苯巴比妥钠具有操作简便、快速,可行性强,重复性和精密度高的优点,并可实现高通量分析.
- 郑银丽任晖管雪琴杨丽丽陈丽新王立伟
- 关键词：苯巴比妥钠酶标法茜素红脑脊液血清
- Polarized calcium signaling in directional migration of human hepatocellular carcinoma cells
- 杨林杰张海峰叶东罗海朱林燕陈丽新王立伟
- 氯通道在三氧化二砷诱导鼻咽癌细胞凋亡中的作用被引量：1
- 2017年
- 目的:探讨氯通道在三氧化二砷(arsenic trioxide,As_2O_3)诱导人鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡中的作用。方法:采用流式细胞术检测CNE-2Z细胞经As_2O_3作用24及48 h的凋亡率;应用膜片钳技术记录As_2O_3激活的细胞膜电流,并分析其电流特性;采用流式细胞术检测氯通道阻断剂DIDS对As_2O_3诱导的CNE-2Z细胞凋亡的抑制作用。结果:(1)5μmol/L As_2O_3能够时间依赖性地诱导的CNE-2Z细胞凋亡;(2)CNE-2Z细胞外灌流含5μmol/L As_2O_3的等渗溶液能够激活一个具有外向整流特征的电流,激活的电流无明显的时间及电压依赖性失活,翻转电位接近氯平衡电位;(3)As_2O_3激活的电流能够被氯通道阻断剂DIDS和NPPB完全抑制,细胞外灌流47%的高渗溶液能够完全抑制As_2O_3激活的电流;(4)氯通道阻断剂DIDS能够抑制As_2O_3诱导的CNE-2Z细胞凋亡。结论:As_2O_3可以激活CNE-2Z细胞的容积敏感性氯通道。氯通道在As_2O_3诱导的CNE-2Z凋亡中发挥重要作用。
- 吕瑞玲高宏邓志钦王海波梁协稠谭秋蝉朱林燕王立伟陈丽新
- 关键词：氯通道三氧化二砷鼻咽癌细胞凋亡
- 神经传导的新概念:无动作电位的兴奋传导
- 2011年
- 近年来研究揭示在神经传导中存在着无动作电位的兴奋传导机制,它主要涉及细胞膜中胞膜窖专门化脂筏内的分子转导作用,这对兴奋只能通过电现象沿神经进行传导的传统理念是一个重大的挑战。这一机制可能是神经科学基础领域研究的重要进展。
- 王立伟朱林燕王跃春王子栋
- 关键词：神经传导自主神经
- 乙醇激活的鼻咽癌细胞氯电流的分子机制被引量：2
- 2014年
- 目的：研究乙醇对低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞氯通道的影响并探讨其分子机制。方法：MTT检测乙醇对细胞生长的影响；全细胞膜片钳技术记录乙醇对氯电流的影响；应用氯通道阻断剂分析该电流的特性；siR-NA干扰技术分析乙醇敏感氯通道的分子本质。结果：在等渗灌流液中记录到微弱的背景氯电流，随灌流液中乙醇浓度（0．17～170 mmol/L）的升高，所激活的氯电流呈倒U型曲线状，17 mmol/L的乙醇激活电流达到峰值，电流呈较明显的外向优势，能被高渗液及氯通道阻断剂5-nitro-2-（3-phenylpropylamino）benzoic acid（NPPB）所阻断；干扰ClC-3氯通道基因表达后乙醇激活的氯电流明显减小。结论：乙醇可能通过激活CNE-2Z细胞的ClC-3氯通道，诱导氯电流的产生。
- 林娜左婉红赖周毅伍嘉宝陈美苑汪源陈丽新王立伟
- 关键词：鼻咽肿瘤氯通道膜片钳术
- 敲低IK1钾通道抑制ClC-3氯通道的表达和功能被引量：2
- 2015年
- 目的:探讨Cl C-3氯通道是否为IK1钾通道的调节靶点,重点研究鼻咽癌细胞IK1钾通道对Cl C-3氯通道功能及蛋白表达的影响。方法:采用siRNA转染技术抑制低分化鼻咽癌上皮细胞(CNE-2Z)IK1基因的表达;real-time PCR技术检测Cl C-3 mRNA的表达;Western blot检测Cl C-3的蛋白表达;细胞免疫荧光结合激光共聚焦显微镜技术检测Cl C-3和IK1蛋白在细胞内分布;全细胞膜片钳记录细胞氯电流。结果:IK1 siRNA可以成功转染CNE-2Z细胞,有效抑制鼻咽癌细胞IK1钾离子通道的表达;用IK1 siRNA抑制鼻咽癌细胞IK1钾离子通道的表达后,Cl C-3的mRNA表达上调而Cl C-3蛋白却表达减少:在低分化鼻咽癌上皮细胞,低渗刺激可激活氯通道,产生一个较大的氯电流,在成功转染IK1 siRNA的细胞,此氯电流明显减弱。结论:敲低IK1钾离子通道可抑制Cl C-3氯离子通道的表达和功能。
- 邹丽莉叶东吕瑞玲汪源孙晓雪朱林燕陈丽新王立伟
- 关键词：CL鼻咽癌膜片钳技术
- CIC-3 is a Main Component of Background Chloride Channels Activated under Isotonic Conditions by Autocrine ATP in Nasopharyngeal Carcinoma Cells
- ＜正＞In this study,the activation mechanisms of the background chloride current and the role of the current in m...
- 王立伟陈丽新
- 关键词：CLC-3
- 文献传递
- 他莫昔芬对不同生长周期鼻咽癌细胞容积激活性电流的作用被引量：3
- 2007年
- 目的:研究Cl-通道抑制剂他莫昔芬(tamoxifen)对G1期和S期鼻咽癌细胞容积激活性电流的抑制效应。方法:运用血清饥饿法或化学药物双阻断法分别将鼻咽癌低分化上皮细胞(CNE-2Z)同步化至G1或S期,用膜片钳技术研究不同细胞周期细胞容积激活性氯通道对阴离子的通透性及他莫昔芬对CNE-2Z细胞容积激活性电流的作用。结果:47%低渗刺激下,G1期和S期细胞产生容积激活性电流,G1期的电流密度大于S期。10-30μmol/L他莫昔芬能完全抑制G1期和S期容积激活性电流,但随浓度升高,达到完全抑制效应所需要的时间缩短。G1期或S期细胞电流被完全抑制的时间有明显差异,在相同浓度他莫昔芬作用下,G1期细胞达到最大抑制效应时间明显短于S期细胞。G1期与S期细胞容积激活性氯通道对阴离子的通透性均为I->Cl->葡萄糖酸根离子,但G1期细胞对I-的通透性高于S期,S期细胞对葡萄糖酸的通透性高于G1期。结论:CNE-2Z细胞G1期与S期的容积激活性电流密度及对阴离子的通透性有差异,G1期和S期细胞对他莫昔芬敏感性不同,提示CNE-2Z细胞对他莫昔芬敏感的容积激活性氯通道在不同生长周期中表达有差异。
- 罗海兵王立伟毛建文焦成钢范爱辉聂思槐李攀陈丽新
- 关键词：鼻咽肿瘤氯化物通道他莫昔芬细胞周期
- 小檗碱激活人结肠癌细胞容积敏感的氯通道被引量：7
- 2011年
- 本文旨在研究小檗碱对人结肠癌细胞(SW480)氯通道的作用。采用膜片钳技术记录小檗碱激活的SW480全细胞氯电流,并用高渗和低渗灌流液、以及氯通道阻断剂研究该电流的生理学和药理学特性。结果显示,当细胞处在等渗液中,可在SW480细胞膜上记录到微弱且稳定的背景电流;小檗碱(10nmol/L)可诱发SW480细胞迅速产生氯电流,该电流的潜伏期为(115.6±21.7)s,具有微弱的外向优势,在+80mV电压钳制下其平均电流密度为(85.8±4.6)pA/pF,在80mV电压钳制下其平均电流密度为(71.9±3.5)pA/pF。小檗碱激活的氯电流没有明显的时间依赖性失活和电压依赖性失活,其翻转电位为(5.5±1.2)mV,接近氯离子的平衡电位(0.9mV)。细胞外灌流高渗液可几乎完全抑制小檗碱激活的氯电流,而低渗液细胞外灌流可激活一个氯电流,其特性与小檗碱激活的氯电流相似。氯通道的阻断剂NPPB、tamoxifen能显著地抑制小檗碱激活的氯电流。以上实验结果提示,小檗碱可以激活人结肠癌细胞氯通道,且该通道对氯通道阻断剂NPPB、tamoxifen和细胞容积变化敏感。
- 刘善文李媛李华荣马文波潘廷才朱林燕叶文才王立伟陈丽新
- 关键词：小檗碱人结肠癌细胞氯通道膜片钳技术
