张金伟
- 作品数：15 被引量：68H指数：5
- 供职机构：国家海洋局第三海洋研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学天文地球轻工技术与工程化学工程更多>>
- 嗜冷假单胞菌NJ197 S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)水解酶基因的克隆及序列分析
- 本研究报道了从南极普利兹湾深海沉积物中筛选菌株NJ197的全基因组中克隆到SAHH的核酸全长ORF序列为1424bp，使用DNAMAN软件对全长ORF为1424bp的SAHH基因进行分析。
- 张金伟曾润颖
- 关键词：S-腺苷同型半胱氨酸水解酶基因克隆
- 文献传递
- 嗜冷杆菌NJ195丙酮酸脱氢酶系E1(PDHE1)基因的克隆及序列分析
- 本研究报道了从南极普利兹湾深海沉积物中筛选嗜冷杆菌NJ195的全基因组中克隆到E1的核酸全长ORF序列为2817bp，使用DNAMAN软件对全长ORF为2817bp的丙酮酸脱氢酶基因进行分析。
- 张金伟曾润颖
- 关键词：丙酮酸脱氢酶克隆
- 文献传递
- 产复合酶菌株Pseudomonas sp．NJ197产酶发酵条件的研究被引量：5
- 2005年
- 从南极普利兹湾深海900m的沉积物中筛选到一株同时产多种低温复合酶的菌 株NJ197,作者对其进行碳源、氮源、无机盐、起始pH值、培养时间、接种量等发酵条 件的优化实验．实验结果证明,在以0．5％可溶性淀粉为碳源,以0．5％豆饼粉为氮 源,无机盐:0．424％NH4H2PO4、0．075％K2HPO4、0．02％MgSO4、0．5％CaCO3,起始 pH值8．5,接种36h种龄的种子10％,20℃、250r／min的条件下在旋转摇床中培养 72h,产复合酶菌株产脂肪酶和淀粉酶活性最高．最佳的生理条件下复合酶中的碱性 脂肪酶和淀粉酶的产量分别提高到22．4U／cm3和30．9U／cm3,该产复合酶菌株可以 作为诱变育种、基因工程菌改造的出发菌株,在洗涤和制革工业中有良好的应用前 景．
- 张金伟曾润颖
- 关键词：生物工程假单胞菌碱性脂肪酶碱性淀粉酶
- 南极产低温脂肪酶菌株Psychrobacter sp.7195的选育、发酵条件及酶学性质研究被引量：26
- 2006年
- 从南极普里兹湾深海沉积物中筛选到一株产低温脂肪酶的菌株7195,细菌学形态鉴定及16SrDNA序列分析表明该菌株属于嗜冷杆菌属(Psychrobacter)。生长特性研究表明该菌株属于耐冷菌,其最适生长温度范围为5～15°C,7195菌株能利用多种碳、氮源产酶。粗酶液经硫酸铵盐析、DEAEcellulose-52柱层析进行初步分离纯化后进行酶学性质的研究。该菌株所分泌的脂肪酶最适作用温度为30°C,最适pH值为9.0,对热敏感,60°C热处理10min剩余酶活为30%,是典型的低温酶。Ca2+、Mn2+、Cu2+对该酶有较为明显的激活作用,而Co2+、Zn2+、Hg2+、Rb2+、Cd2+、Fe3+、EDTA则能抑制酶活,此外该脂肪酶能在高浓度的SDS、CHAPS、TritonX-100、Tween80、Tween20等变性剂中表现出较好的稳定性。
- 张金伟曾润颖
- 关键词：低温酶碱性脂肪酶耐冷菌
- 南极耐冷Pseudomonas sp.7323低温脂肪酶的性质及基因克隆被引量：12
- 2007年
- 南极微生物是筛选低温酶的良好来源,但尚未得到充分的研究与开发.低温脂肪酶具有广阔的应用前景,其基因结构特征也具有重要的研究意义.本文对南极微生物开展了低温脂肪酶产生菌的筛选、基因克隆及特征分析.采用功能筛选的方法,从南极普里兹湾深海沉积物中获得一株产低温脂肪酶的菌株7323,其最适温度和最高生长温度分别为20℃和30℃,属于耐冷菌.16S rDNA序列分析表明,该菌属于假单胞菌属(Pseudomonas).通过设计引物扩增出的脂肪酶基因全长为1 854 bp,该基因编码一个由617氨基酸、分子量预计为64 466的蛋白质.氨基酸序列分析表明,该酶与Pseudomonassp.UB48的脂肪酶有89%的相似性,在催化区和C末端信号肽中存在高度保守的序列.纯化后的酶学性质研究表明,该脂肪酶的最适温度为35℃,最适pH值为9.0,为碱性低温酶.
- 王水琦曾润颖张金伟
- 关键词：耐冷菌假单胞菌低温脂肪酶
- 南极嗜冷假单胞菌7197的分离和无机焦磷酸酯酶（PPase）基因ppa的克隆被引量：1
- 2007年
- 从南极普利兹湾深海沉积物中筛选到一株耐冷菌株7197。16S rDNA序列分析表明,该菌株属于假单胞菌属（Pseudomonas）。从该菌的全基因组DNA中克隆到编码无机焦磷酸酯酶（PPase）的ppa基因完整的开放阅读框（ORF）,其全长为531bp。该基因编码一个由176AA残基组成的分子量预计为19631 Da的PPase蛋白质,其氨基酸序列与Psy-chrobacter sp.273-4的PPase有97%的相似性,与Neisseria meningitidisZ2491的PPase有79%的相似性,与Mannheimia succiniciproducens MBEL55E的PPase有75%的相似性。
- 张金伟曾润颖
- 关键词：耐冷菌假单胞菌属
- 一株南极嗜冷杆菌产丙酮酸脱氢酶的性质研究及基因克隆被引量：1
- 2006年
- 从南极普利兹湾深海沉积物中筛选到一株嗜冷杆菌7195,其16SrDNA序列分析表明该菌株属于嗜冷杆菌属(Psychrobacter),从该菌的全基因组DNA中克隆到编码丙酮酸脱氢酶系E1(PDHcE1)的完整ORF,全长为2817bp,使用DNAMAN 5．1对其全长ORF的PDHcE1基因进行分析,PDHcE1基因编码一个由939AA残基组成、分子量预计为100663Da的PDHcE1蛋白质,与Psychrobacter sp．273-4的PDHcE1有78．53％的相似性。
- 张锋黄硕芩张金伟
- 关键词：克隆
- 南极深海沉积物宏基因组DNA中低温脂肪酶基因的克隆、表达及性质分析被引量：23
- 2006年
- 从南极普利兹湾深海900米深的沉积物中提取获得宏基因组DNA,并通过设计引物,从中克隆到全长为948bp的低温脂肪酶(lip3)开放阅读框完整序列,该基因编码一个由315个氨基酸残基组成、预计分子质量为34.557ku酶蛋白(Lip3);氨基酸序列上的GFGNS(GXGXS)和G-N-S-M-G(GXSXG)在许多脂肪酶中有很高的保守性,它们是水解机制所必需的序列,也是丝氨酸水解酶中最保守的序列.构建了lip3基因重组表达载体,并在大肠杆菌中获得表达,采用镍离子亲和层析柱对表达的酶蛋白Lip3进行纯化,得到约35ku蛋白条带,酶学性质的分析表明,该酶的最适作用温度为25℃,在0℃时表现为最高活力的22%,最适pH值为8.0,对热敏感,35℃热处理60min剩余酶活为10%,以硝基苯棕榈酸酯为底物,Lip3的酶促反应常数Km值随着反应温度的升高而升高,是典型的低温酶.
- 张金伟曾润颖
- 关键词：宏基因组低温脂肪酶
- 南极嗜冷假单胞菌7197S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(SAHH)基因的克隆与序列分析被引量：4
- 2006年
- 从南极普利兹湾深海沉积物中筛选到一株耐冷菌株7197,其16S rDNA序列分析表明该菌株属于假单胞菌属(Pseu-domonas)。作者通过设计引物,从该菌的全基因组DNA中克隆到编码S-腺苷-L-高半胱氨酸(SAHH)的完整ORF,全长为1424bp。使用DNAMAN(5.1)软件对全长ORF为1424bp的SAHH基因进行分析,SAHH基因编码一个由474AA残基组成、分子量预计为52523 Da的SAHH蛋白质,与Psychrobacter sp.273-4的SAHH有96.84%的相似性;与Acinetobacter sp.ADP1的SAHH有79%的相似性;与Pseudomonas fluorescens Pf-5的SAHH有75%的相似性。
- 张金伟曾润颖
- 关键词：克隆
- 南极普里兹湾深海沉积物微生物低温酶的筛选、基因克隆表达及性质分析
- 南极、深海等极端环境中蕴藏着丰富的资源，其中微生物资源是国内外研究的热点。它们经过长期的进化、选择，在各种极端的环境条件下形成了独特的组织结构、酶系统及代谢机制以进行生存和繁衍。对低温酶、冷适应酶独特的生理结构及机能进行...
- 张金伟
- 关键词：低温淀粉酶低温脂肪酶克隆表达微生物资源
- 文献传递
