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张秀春: 作品数：58 被引量：83H指数：4; 供职机构：中国热带农业科学院热带生物技术研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项广东省科技攻关计划更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>

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感染BBTV香蕉叶片cDNA文库的构建及评价: 2013年; 为了研究香蕉束顶病毒与香蕉寄主致病的互作分子机制，本文报道利用Make Your Own＂Mate＆Plate＂ Library System试剂盒成功构建感染BBTV香蕉叶片的cDNA文库。通过改良CTAB法提取感染BBTV香蕉叶片的总RNA，采用SMART法反转录合成双链cDNA，经靳，酶切并去除短片段之后，与经同样酶切的pGADT7-SfiI载体连接，利用电转法将重组载体转化到大肠杆菌宿主细胞中，获得初级cDNA文库，最后以初级文库100万克隆为基数扩增，得到扩增文库并提取质粒。结果得到库容量大于2．0X10。的初级文库，检测表明文库cDNA插入片段长度主要分布在700—2000bp，文库重组率为87．5％。结果表明，该文库质量较好，可用于后续酵母双杂交互作蛋白筛选试验，本研究为开展病毒与寄主互作的研究奠定基础。; 谭老喜张雨良周朋章绍延王健华张秀春刘志昕; 关键词：香蕉束顶病毒香蕉叶片

一种BBTV两个DNA2组分的鉴定方法和应用: 本发明提供了一种BBTV两个DNA2组分的鉴定方法，包括：1)取感染BBTV的香蕉待测样品，提取总DNA，PCR扩增；2)将PCR产物连接至质粒载体，提取质粒并对质粒进行NdeI酶切；电泳检测，判定待测样品是否有2种DN...; 余乃通刘志昕熊忠国周朋王健华张雨良张秀春; 文献传递

拟南芥AtNUDT8启动子的分离及其功能分析被引量：2: 2012年; 根据已发表的拟南芥基因组序列设计合成一对引物,以拟南芥基因组DNA为模板克隆AtNUDT8上游非编码区,并与pBAR-GUS3相连构建了植物表达载体pNUDT8P-GUS,采用农杆菌GV3101介导的渗透法转化野生型拟南芥,通过除草剂筛选获得了一批抗性纯合子转基因植株,再对转基因植株2周幼苗进行GUS活性的组织化学染色分析,并对3.5~4周的转基因植株叶片进行病原菌诱导表达分析。结果表明：已获得AtNUDT8启动子,该启动子为组成型表达启动子,并且病原菌Pst.DC3000对该启动子无诱导作用。; 张秀春吴坤鑫李文彬夏亦荠彭明; 关键词：启动子 GUS染色

木薯SDH蛋白的序列分析及其与MeH1.2关系的研究被引量：1: 2024年; 【目的】山梨糖醇脱氢酶(SDH)在调控蔷薇科植物果糖和山梨醇转化中起重要作用,也参与植物对逆境的应答过程,木薯SDH功能的研究可以为培育优质木薯种质提供理论基础。【方法】以‘SC124’的cDNA为模板克隆木薯SDH基因,并利用实时荧光定量PCR分析木薯SDH基因的组织特异性及其对干旱、低温、PEG和ABA的响应模式。通过筛选木薯干旱和低温混合的酵母cDNA文库,并利用Y2H点对点及其双分子荧光互补(BiFC)实验确认与目标蛋白的关系。【结果】木薯SDH基因CDS全长1092 bp,编码364个氨基酸,与数据库中的序列无差异。MeSDH蛋白含有催化锌结合位点,NADP结合位点,结构锌结合位点,属于MDR超家族。烟草叶片表皮细胞瞬时表达显示MeSDH蛋白定位于细胞核。MeSDH基因的表达量在功能叶、幼嫩叶、须根和茎中依次降低。MeSDH基因受干旱、低温和PEG胁迫诱导在木薯叶片上调表达,在ABA处理后的木薯叶片和根系中都显著上调表达。文库筛选、Y2H点对点和BiFC实验证实MeH1.2与MeSDH互作。【结论】MeSDH基因可以响应多种胁迫上调表达,并可能在蛋白水平和MeH1.2共同作用。; 赵平娟林晨俞王梦月张秀春张秀春阮孟斌; 关键词：木薯抗逆性

AtNUDT8过量表达的拟南芥转基因植株被引量：9: 2010年; 从拟南芥基因组中克隆AtNUDT8,并与pCHF3相连构建了植物表达载体pCHFN8,采用农杆菌GV3101介导的渗透法转化野生型拟南芥,通过卡那霉素筛选获得了一批经Northern blot检测证实的过量表达AtNUDT8的转基因拟南芥植株。; 张秀春李文彬夏亦荠彭明; 关键词：拟南芥

橡胶草基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化被引量：4: 2011年; 为探索适合橡胶草基因组DNA的提取方法和RAPD反应体系。采用改良CTAB法提取橡胶草叶片总DNA,得到的DNA能满足RAPD分析需要。通过单因子实验法分析DNA浓度、引物浓度、dNTPs浓度、Taq聚合酶以及Mg2+浓度对RAPD扩增结果的影响,建立了适合于橡胶草RAPD分子标记的最佳反应体系,即20μL体系中包括:模板DNA30ng、TaqDNA聚合酶1.75U、dNTPs浓度0.25mmol/L、Mg2+浓度2.0mmol/L、引物浓度0.5μmol/L、10×PCRBuffer2.0μL。RAPD扩增反应程序为:94℃预变性5min,94℃30s,37℃30s,72℃70s,45个循环,最后72℃延伸7min。该反应体系具有较好的稳定性及可重复性。; 李若霖崔百明王颖张秀春陈雄庭吴坤鑫; 关键词：橡胶草 DNA提取 RAPD

木薯花叶病毒AC4蛋白与AtPARN互作研究被引量：3: 2024年; 木薯(Manihot esculenta Crantz)作为重要的热带作物,是全球六大粮食作物之一,并为全球近七亿人口提供主粮,然而病毒侵染引起的病害在全球范围内严重威胁木薯产业的发展。木薯花叶病毒病(cassava mosaic disease,CMD)是最有威胁的病害之一,造成严重的经济损失。斯里兰卡木薯花叶病毒(SriLankancassavamosaicvirus,SLCMV)是引发木薯花叶病的病原物之一,SLCMV是典型的双组分双生病毒,其基因组由DNA-A和DNA-B两个环状组分组成。无义介导的mRNA降解(nonsense-mediatedmRNAdecay,NMD)是真核细胞mRNA降解的主要途径之一,也是真核生物普遍存在的抗病毒防御机制。越来越多的研究显示,NMD不仅是真核生物重要的mRNA数量、质量调控机制,还与转录后基因沉默(post transcriptional gene silencing,PTGS)同样能降解病毒RNA,是真核生物普遍存在的抗病毒防御机制。NMD的mRNA衰减过程包括PTC的识别、脱腺苷酸、脱帽和最后的核酸外切酶降解4个过程,UPF1、PARN、DCP2和XRN4分别是上述4个过程中的关键蛋白。病毒是专性寄生生物,必须逃避或耐受寄主细胞的降解,才能成功感染。聚腺苷酸特异性核糖核酸酶[poly(A)-specific ribonuclease,PARN]是NMD信号通路的一个关键因子。目前,关于SLCMV抵御寄主NMD的分子机制尚不明确。本研究采用酵母双杂交(yeast two-hybrid system)和荧光双分子互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)试验证明斯里兰卡木薯花叶病毒(SLCMV)编码的沉默抑制子AC4与拟南芥PARN相互作用。据此推测SLCMV AC4蛋白可能通过与AtPARN相互作用而抑制寄主NMD的病毒防御功能帮助病毒逃避或耐受寄主细胞的降解。研究结果为阐明木薯花叶病毒调控寄主NMD抗病毒防御功能的分子机理奠定基础。; 刘琳玉赵平娟符艳刘志昕任艳利张秀春

热带牧草种子抗真菌蛋白筛选初报: 2008年; 利用琼脂纸片扩散法对262种热带牧草种子水提取物进行抑立枯丝核菌活性试验,结果表明:其中有24种热带牧草种子的水提取物对立枯丝核菌菌丝生长具有显著的抑制作用,它们分属金合欢属、朱缨花属、蝶豆属、银合欢属、决明属和灰毛豆属;水提取物进一步用链霉蛋白酶E消化处理,发现只有蝶豆种子提取物中存在抗真菌蛋白。; 吴坤鑫张秀春陈雄庭; 关键词：热带牧草立枯丝核菌种子蛋白抗真菌蛋白

针对转基因大豆dsABS品系的特异性PCR检测方法: 本发明属于转基因食品检测技术领域，具体涉及一种针对转基因大豆dsABS品系的检测方法专利申请事宜。该方法须先设计引物Primer‑F和Primer‑R，然后包括提取待检测大豆样品的DNA、PCR扩增、电泳检测、判定等步骤...; 张秀春吴坤鑫武亚丹张春微刘志昕; 文献传递

基于CRISPR/Cas9系统的拟南芥双链结合蛋白AtHyl1基因编辑被引量：3: 2019年; RNA沉默是植物重要的抗病毒防御机制,双链RNA结合蛋白(dsRNA-binding proteins, DRB)是RNA沉默信号途径中的关键蛋白。DRB1/HYL1是拟南芥基因组编码的7个DRBs之一,本研究将人工合成含2个AtHyl1靶位点序列的串联t RNA-gRNA片段导入CRISPR/Cas9表达载体中,构建双靶点的CRISPR/Cas9表达载体,通过转化拟南芥dcl2drb4双突变体获得36株转基因阳性植株。对经测序分析可能已发生基因编辑的3株进行单克隆测序分析,测序结果表明均已发生编辑,获得了AtHyl1基因被编辑的拟南芥dcl2drb4突变体T1代转基因植物。该结果为研究AtHyl1是否参与DCL4介导的抗病毒RNA沉默通路提供了帮助。; 武亚丹吴坤鑫张春微刘志昕余乃通王健华张秀春

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