宋敬东
- 作品数：70 被引量：131H指数：6
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金中国疾病预防控制中心青年科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 尼帕病毒N基因核酸检测方法对假病毒阳性标准品的制备及鉴定被引量：1
- 2022年
- 目的 针对致死率极高的尼帕病毒,制备安全、稳定的含有尼帕病毒N基因片段的重组假病毒颗粒阳性标准品。方法 人工合成含有尼帕病毒N基因片段的核苷酸序列并导入CD513B慢病毒载体,与包装质粒同时转染HEK293T细胞,超速离心浓缩纯化,电镜观察假病毒颗粒形态,感染实验验证假病毒功能,并进行线性、稳定性和均一性检测。结果 包装并纯化后的假病毒颗粒浓度较高,直径在100~200 nm,可见明显的G蛋白刺突,感染实验绿色荧光蛋白信号强且不同温度下储存稳定性良好,均一性检测变异系数小于1%。结论 成功构建含有尼帕病毒N基因片段的假病毒颗粒,可作为阳性对照品在尼帕病毒核酸提取和检测过程中实现全程质量控制。
- 黄益曼宋敬东韩辉麻粉莲郑丽舒
- 关键词：假病毒
- 密码子优化增强轮状病毒VP6基因重组腺病毒的体液免疫和攻毒保护效果的研究被引量：1
- 2012年
- 目的以表达野生型RVVP6基因的重组病毒rvAdVP6为对照，在小鼠模型上观察基因优化重组腺病毒rvAdVP6（o）的体液免疫效果和攻毒保护效果。方法6到8周雌性BALB／c小鼠随机分组，通过等量病毒（每次108TCID50／只）3次滴鼻免疫，检测3次免疫后的血清抗体；并用鼠轮状病毒进行攻毒实验，检测不同组的免疫保护效果。结果三次免疫rvAdVP6（o）产生的抗VP6血清IgG抗体水平均明显高于rvAdVP6；鼠轮状病毒攻击后检测小鼠的排毒量，发现rvAdVP6（o）免疫组的RV排毒量明显少于rvAdVP6。结论在等量重组腺病毒免疫的情况下，优化后的VP6重组腺病毒在体液免疫和攻毒保护方面，均优于优化前。
- 王敏吴风宋敬东屈建国王健伟洪涛
- 关键词：密码子腺病毒科轮状病毒
- G1/G3/G5型乙型脑炎病毒国家标准株实验室鉴定与评价被引量：3
- 2023年
- 目的确定G1、G3和G5三个基因型别的乙型脑炎病毒(乙脑病毒)国家标准株实验室鉴定评价指标,评价乙脑病毒国家标准株。方法依据病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准,基于乙脑病毒研究工作中的应用,以形态学特征、生物学特征、分子生物学特征等数据为基础,鉴定G1型(NX1889株)、G3型(P3株)和G5型(XZ0934株)三个基因型别乙脑病毒株的特征。结果乙脑病毒电镜下为球形颗粒,直径约为60 nm;感染BHK-21、Vero细胞后,细胞病变效应以细胞圆缩脱落为主,感染C6/36细胞后,表现为细胞融合和脱落;病毒滴度为10^(5)~10^(7)PFU/ml,噬斑大小存在型别差异;G1、G3和G5型乙脑病毒三周龄小鼠腹腔攻毒的半数致死量为50.51 PFU、6.98 PFU、8.13 PFU,五周龄小鼠颅内攻毒的半数致死量为3 PFU、0.3 PFU、1.35 PFU;G1、G3和G5型乙脑病毒基因组全长分别为:10967 bp、10976 bp和10983 bp。结论通过乙脑病毒电镜、细胞、动物和基因组等实验室指标的确定,鉴定与评价了三个基因型别乙脑病毒国家标准株,为其他病毒国家标准株的鉴定与评价提供了参考。
- 刘升辉姜孟楠张维嘉付士红宋敬东许崇晓聂凯殷启凯何英李樊许松涛梁国栋魏强王环宇
- 关键词：乙型脑炎病毒
- 人腺病毒41型纤维丝状包涵体免疫电镜研究被引量：1
- 2013年
- 为明确人腺病毒41型(Adenovirus type 41,Ad41)形态发生过程中形成的纤维丝状包涵体(Fibrillous inclusion body,FIB)是否含有Ad41的长纤维(Long fiber,LF)蛋白与短纤维(Short fiber,SF)蛋白。我们分别原核表达和纯化Ad41LF、SF的球部(Knob)蛋白,分别命名为LFK与SFK。以LFK和SFK分别免疫BALB/c小鼠,分别获得LFK抗血清和SFK抗血清。Western blot、间接免疫荧光和免疫负染结果表明,LFK抗血清和SFK抗血清分别与LF和SF结合,LFK抗血清和SFK抗血清之间无交叉反应,可以应用于免疫电镜标记。通过Ad41抗血清、腺病毒纤维单克隆抗体4D2、LFK抗血清与SFK抗血清分别对FIB进行免疫电镜胶体金标记,表明Ad41抗血清、腺病毒纤维单克隆抗体4D2、LFK抗血清与SFK抗血清均能标记FIB,说明FIB中含有Ad41长纤维蛋白和短纤维蛋白。
- 宋敬东邹小辉王敏屈建国鲁茁壮洪涛
- 关键词：免疫电镜技术
- 关于新型冠状病毒命名的思考与建议被引量：10
- 2020年
- 2019年12月,一种由新型冠状病毒(2019-nCoV)引起的病毒性肺炎开始在武汉暴发流行。2020年2月11日,世界卫生组织(WHO)将新型冠状病毒肺炎命名为COVID-19(冠状病毒病2019),国际病毒分类学委员会(ICTV)的冠状病毒研究小组(CSG)建议把新型冠状病毒命名为SARS-CoV-2(严重急性呼吸综合征冠状病毒2),既没有与疾病名称一致,也没有完全真实地显示该病毒本身的特征,因而立即引发关注和争议。基于COVID-19的病原学、流行病学和临床特征的基本信息,建议将新型冠状病毒命名为“人类冠状病毒2019”(human coronavirus 2019,简称HCoV-19)。文章回顾并评价了CSG的命名方法,指出他们使用基于基因序列信息进行病毒命名的方法并不合适,建议采用传统的联系疾病的病毒命名方法对具有明显疾病特点的病毒如2019-nCoV进行命名。
- 张冬梅姜世勃石正丽谭文杰卢洪洲曹彬张文宏刘叔文钟劲肖庚富谢幼华邓凯赵金存杨子峰宋敬东陆路黄竞荷应天雷王乔施莽徐建青安静鲁凤民高福舒跃龙郭德银
- 关键词：冠状病毒肺炎
- 原核表达人41型腺病毒(Ad41)蛋白V及其抗血清的制备
- 2009年
- 【目的】人肠腺病毒Ad41被称为难养腺病毒,其难以培养的特性可能与次要核心蛋白V(Ad41proteinV,pV)表达不充分有关。本研究拟表达纯化Ad41pV抗原,免疫动物制备抗血清,为研究Ad41难养性机理打下基础。【方法】以野生型Ad41基因组DNA为模板,PCR扩增pV,克隆到原核表达载体pET30a(+),测序后,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表达,固化金属亲和层析(IMAC)方法纯化,免疫BALB/c小鼠制备抗血清,将获得的抗血清用于Western blot检测Ad41感染各细胞系后pV的表达。【结果】克隆得到包括完全编码区的pV基因,表达质粒转化BL21(DE3)菌株,使用1mmol/LIPTG37℃诱导4h,pV以包涵体形式表达,或使用0.5mmol/LIPTG25℃诱导8h获得可溶性表达。利用皮下多点注射包涵体的方法免疫小鼠,得到抗pV抗血清;使用纯化的可溶性pV作为抗原对抗血清进行了鉴定,表明该抗血清可用于Western blot检测。等量野生型Ad41感染293或293E12细胞(一株稳定表达Ad41E1B55K基因的293细胞)后,pV在293E12细胞的表达明显高于293细胞。【结论】成功克隆了Ad41pV基因,表达纯化了重组蛋白,获得了可用于Western blot检测的抗血清,为进一步研究Ad41难养性机理打下了基础。
- 董流昕邹小辉宋敬东屈建国鲁茁壮洪涛
- 关键词：PROTEINV抗血清
- 密码子优化提高重组腺病毒中人轮状病毒VP6基因表达量的研究被引量：2
- 2011年
- 目的 通过密码子优化提高重组腺病毒中人轮状病毒VP6基因的表达量.方法 人工合成按照人的优势密码子优化的人轮状病毒VP6基因,包装重组腺病毒后,与未优化的相同基因的重组腺病毒用免疫荧光和Western Blot方法比较其表达量.结果 密码子优化的人轮状病毒VP6基因,与未优化的相同基因的重组腺病毒比较,其蛋白表达量大大提高.结论 密码子优化确实提高了重组腺病毒中人轮状病毒VP6基因的表达量,可望满足腺病毒载体疫苗的研发需要.
- 佟大伟宋敬东王健伟王敏
- 关键词：密码子腺病毒科轮状病毒属
- 一种基于显微镜的细胞点标装置及显微镜
- 本发明涉及一种基于显微镜的细胞点标装置及显微镜，该细胞点标装置包括：固定部，用于固定在显微镜上；连接部，与所述固定部连接；以及点标部，与所述连接部连接，所述点标部的末端垂直地指向所述显微镜的光路中心，用于对载物台上的目标...
- 宋敬东屈建国洪涛
- 文献传递
- 猴痘病毒感染血清抗体ELISA检测方法的建立被引量：8
- 2018年
- 目的建立猴痘病毒感染血清IgG抗体检测方法。方法采用合成的猴痘病毒B21R蛋白上的2条混合多肽作为包被抗原,建立猴痘病毒感染人血清IgG抗体间接ELISA检测方法。选取正常成人血清、无关病毒感染血清和猴痘病毒感染者血清标本对多肽抗原特异性进行评价,并优化反应参数。结果猴痘病毒B21R蛋白上的二肽混合抗原与正常血清和无关病毒感染血清均无明显交叉反应,具有较好的抗原特异性。经优化后,混合二肽抗原的最佳包被浓度均为50ng/孔,二抗稀释度为1∶20000。在此条件下塞拉利昂猴痘患者血清在12d和55d的猴痘病毒IgG抗体滴度均为1∶6400。结论初步建立了猴痘病毒感染血清IgG抗体间接ELISA检测方法,为我国应对可能出现的猴痘输入病例提供技术储备。
- 任皎叶飞赵莉管茜茜赵颖宋敬东田厚文谭文杰
- 关键词：猴痘病毒IGG抗体
- 肠道病毒71型感染细胞的超微病理研究
- 2014年
- 目的 研究肠道病毒71型（Enterovirus 71,EV71）对宿主细胞的超微病理损伤及病毒在细胞内的定位.方法 以EV71接种RD-A细胞,收获细胞制作超薄切片,对超薄切片进行透射电子显微镜观察.结果EV71导致的宿主细胞病理变化包括,细胞质内产生大量双层膜或多层膜的囊泡结构、形成包涵体结构、细胞核变性、线粒体变性、内质网扩张及细胞降解.病毒颗粒存在于细胞质内、囊泡结构中、膜性结构表面、包涵体内部、内质网池样结构内及髓样结构中.结论 EV71能够导致宿主细胞产生显著的超微结构变化,病毒颗粒位于多种细胞结构内.
- 宋颖宋敬东许文波王敏屈建国洪涛
- 关键词：肠道病毒属病理学
