周丹丹
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 供职机构：遵义医学院珠海校区更多>>
- 发文基金：贵州省优秀科技教育人才省长资金项目贵州省科学技术基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 靶向UL27shRNA抑制Ⅱ型单纯疱疹病毒在HEK293细胞中的复制被引量：7
- 2013年
- 按照shRNA(small hairpin RNA)设计原则,针对Ⅱ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type2,HSV-2)的UL27基因序列保守区域筛选设计、合成4条干扰靶序列并构建表达UL27序列特异性siRNA(short interfering RNA)的质粒载体pGPU6/GFP/Neo.通过脂质体介导重组表达载体转染HEK293细胞(human embryonic kidney 293 cell)再接种HSV-2.采用实时荧光定量PCR(real-timefluorescent quantitative PCR)技术检测UL27各组的mRNA转录水平,终点滴定法检测细胞上清液中的病毒滴度,四甲基偶氮唑盐(four methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定细胞存活率,Western印迹法检测蛋白表达效果.结果显示,UL27shRNA75组对UL27基因mRNA表达抑制效果最佳,同时能显著抑制感染细胞的CPE(cytopathic effect,CPE),降低上清液中的病毒感染滴度,提高细胞的生存率,抑制UL27基因的蛋白表达.提示本研究构建的pGPU6/GFP/Neo-UL27表达载体能在细胞水平上不同程度地干扰HSV-2 UL27基因表达,抑制HSV-2在HEK293细胞中复制.
- 吕延成潘晓瑜周丹丹袁俊杰黄畅
- 关键词：RNA干扰
- 靶向UL5小干扰RNA对Ⅱ型单纯疱疹病毒的抑制被引量：2
- 2012年
- 背景:解旋酶-引发酶复合体是Ⅱ型单纯疱疹病毒进行复制的必需基因,UL5基因为Ⅱ型单纯疱疹病毒解旋酶-引发酶复合体的组成单位之一。目的:应用RNA干扰技术分析特异性小干扰RNA对Ⅱ型单纯疱疹病毒UL5基因的干扰作用。方法:以Ⅱ型单纯疱疹病毒UL5基因为靶目标,设计、合成5对特异性小干扰RNA。通过LipofeCtamine 2000脂质体将特异性小干扰RNA转染HEK293细胞。48h后行荧光定量RT-PCR检测UL5基因转录水平,终点滴定法测定干扰后病毒滴度,观察其干扰效果。结果与结论:小干扰RNA成功转染入细胞内。荧光定量RT-PCR结果显示,siRNA722、siRNA2394、siRNA2513和siRNA2627均可不同程度降低靶mRNA表达,病毒滴度检测结果显示siRNA722、siRNA2394、siRNA2513和siRNA2627均可不同程度降低上清液中病毒感染滴度,阴性对照组和siRNA374对病毒感染滴度无影响。针对UL5基因的有效小干扰RNA可以特异性降低Ⅱ型单纯疱疹病毒的复制水平。
- 潘晓瑜吕延成王志勇樊俊周丹丹袁俊杰
- 关键词：小干扰RNARNA干扰RT-PCR
- 乙酰胆碱酯酶固定化条件的研究被引量：2
- 2010年
- 以戊二醛为交联剂固定乙酰胆碱酯酶,考察缓冲液浓度、pH值对乙酰胆碱酯酶固定化的影响,用正交实验考察牛血清白蛋白和戊二醛的浓度、交互作用及3种固定化膜材料对固定化效率的影响。确定固定化载体壳聚糖膜、0.01%戊二醛、2%牛血清白蛋白、pH值6.0、0.05mol/L磷酸缓冲液为固定化优化条件,当抑制率标准采用50%时,该方法得到的固定化乙酰胆碱酯酶膜对敌敌畏的检测浓度达0.53μg/L。
- 吕延成万圣樊俊周丹丹
- 关键词：乙酰胆碱酯酶固定化戊二醛
- UL27、UL29基因shRNA表达载体的构建及对HSV-2的干扰效应研究
- 目的：以Ⅱ型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus type2，HSV-2)UL27、UL29为靶基因，构建短发夹RNA(small hairpin RNA，shRNA)重组表达载体，在体外细胞水平上观察...
- 周丹丹
- 关键词：RNA干扰短发夹RNA重组表达载体
