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吴清华: 作品数：69 被引量：229H指数：8; 供职机构：南方医科大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金广州市重大科技攻关项目广东省科技计划工业攻关项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>

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青蒿素作用前后K562细胞基因表达谱的改变被引量：2: 2009年; 目的:利用基因表达谱芯片研究青蒿素对体外培养的人红白血病K562细胞基因表达谱的影响。方法:青蒿素处理K562细胞24h后,分别提取处理组和对照组细胞的总RNA,将两组RNA纯化为mRNA,逆转录成cDNA,用Cy3和Cy5两种不同的荧光染料进行线性扩增标记,与人全基因组基因表达谱芯片杂交,采用生物信息学方法分析青蒿素处理前后K562细胞基因表达谱的改变。结果:总共发现差异基因238个,其中上调基因136个,下调基因102个,并对其进行生物学功能分类。结论:应用全基因组表达谱芯片并结合Panther生物学软件分析差异表达基因,青蒿素作用K562细胞主要是通过细胞毒作用诱导细胞凋亡,而抑制细胞生长作用并不明显。; 丁大鹏马文丽吴清华周珏宇危敏郑文岭; 关键词：青蒿素基因芯片基因表达谱 K562

SARS冠状病毒N基因的扩增与克隆被引量：2: 2004年; 目的RT-PCR扩增、克隆SARS冠状病毒N蛋白基因。方法根据GenBank数据库中TOR2株的全基因组序列,利用Primer Premier 5.0软件设计引物RT-PCR巢式扩增SARS冠状病毒的N基因,PCR产物克隆后进行测序鉴定。结果序列分析表明,pMD18-T载体中已成功重组了N基因。结论N蛋白基因的扩增、克隆成功,为N蛋白的表达、N蛋白结构与功能的研究奠定了基础。; 肖维威马文丽张宝王艳毛向明彭翼飞宋艳斌吴清华郑文岭; 关键词：严重急性呼吸综合症传染性非典型肺炎冠状病毒基因扩增 N蛋白

含人P21启动子双荧光素酶基因载体的构建被引量：4: 2011年; 目的构建带有EGFP标记含人P21启动子的双荧光素酶报告基因载体。方法从人血白细胞DNA中克隆P21启动子,用于控制firefly荧光素酶的表达;renilla荧光素酶基因和EGFP基因用IRES连接,在CMV启动子控制下表达;上述元件和基因克隆至载体pLL3.7中,应用酶切和测序的方法进行鉴定正确后转染至293FT细胞观察EGFP表达。结果经酶切、测序证实成功构建了带有EGFP标记的含人P21启动子的双荧光素酶报告基因的载体,并成功表达EGFP。结论含人P21启动子的双荧光素酶报告基因的载体成功构建,为下一步的药物筛选打下基础。; 陈荣誉郑文岭吴清华张宝马文丽; 关键词：EGFP

交联型丙烯酸酯聚合物分子层用于固定寡核苷酸分子初探: 2008年; 目的探讨在显微玻片上衍生聚合物分子层用于固定寡核苷酸分子的方法,为基因芯片制备和应用提供技术支持。方法利用交联聚合反应,在显微玻片表面衍生丙烯酸酯共聚物分子层,结合基因芯片技术制备寡核苷酸芯片。利用荧光标记的样品和CMT芯片杂交系统对所制备的芯片进行杂交实验,检测寡核苷酸在芯片表面的固定性能,并进行对照实验。结果杂交后的荧光检测表明寡核苷酸在丙烯酸酯共聚物表面上杂交点阵的荧光信号多,信号强度强,杂交点圆润、同一性好。结论利用化学交联法制备的芯片表面能用于寡核苷酸的固定且处理过程简单,为进一步运用到生物芯片制作打下了良好的基础。; 吴清华马文丽朱利娜张宝; 关键词：基因芯片技术丙烯酸类聚合物

芯片杂交中荧光标记样品定量与非定量的比较研究: 2002年; 比较在芯片杂交中 ,荧光标记样品定量与非定量对杂交结果的影响。其方法是 ,提取经As2 O3 作用K5 6 2细胞前后的总RNA ,逆转录成cDNA第一链 ,并分别用Cy3/Cy5标记。标记后的样品再次定量或不定量 ,但均取相同体积上样与K5 6 2芯片杂交 ,用扫描仪扫描并分析。其结果 ,标记后样品定量与不定量杂交的结果都与理论推测一致 ,但以样品定量进行杂交的效果更好 ,标记样品杂交前再次定量的 ,分析发现 2个基因表达下调 ;杂交前不定量仅取相同体积进行杂交的 ,发现 6个基因片段表达下调 ,其中只有 2个基因与细胞凋亡通路密切相关。认为在芯片的杂交检测中 ,对荧光标记样品杂交前再次定量可大大提高杂交结果的可靠性。; 冯春琼马文丽李凌宋艳斌石嵘吴清华郭秋野郑文岭; 关键词：荧光标记 AS2O3 K562细胞杂交总RNA 基因片段

应用RD-PCR技术制备基因芯片靶基因片段: 2002年; 应用RD -PCR技术分离SH -SY5Y细胞的基因片段。从正常培养的SH -SY5Y细胞中提取总RNA ,经oligo(dT)纤维素柱纯化分离出mRNA ,然后以oligo(dT1 8)为锚定引物反转录生成单链cDNA ,再以此为模板合成DNA的第二条链 ;将双链DNA经Sau3AI酶切之后 ,接上接头 ,经通用引物和选择性引物进行扩增 ;然后与载体pMD1 8-T相连 ,克隆鉴定、筛选、测序。所分离的cDNA片段经过扩增后用于制备基因芯片的靶基因 ,杂交检测的结果表明 ,此种方法所分离的基因片段可以用于基因芯片的靶基因片段。; 张宝马文丽李凌石嵘吴清华宋艳斌郑文岭; 关键词：基因芯片

应用RD-PCR技术制备HIV基因芯片探针被引量：22: 2002年; 利用限制性显示 (RD PCR)技术快速分离HIV 1基因片段制备DNA芯片探针 .以Sau3AⅠ酶切HIV基因 ,得到许多大小适合芯片的限制性酶切片段 .然后在片段两端接上接头 ,根据酶切位点、接头的序列设计通用引物 .在该通用引物的 3′端分别延伸一个碱基后 ,通过引物间的两两组合 ,将PCR反应分成 10个亚组 .纯化各组PCR产物 ,克隆到T载体上 .阳性克隆经鉴定、扩大培养后提取质粒 .以质粒为模板扩增靶片段并进行序列分析 .每个亚型得到了十几个 10 0～ 10 0 0bp的HIV基因片段 .研究表明 ,RD; 李凌马文丽祝骥朱利娜宋艳斌吴清华郭秋野郑文岭; 关键词：HIV DNA芯片

应用基因芯片研究As_2O_3诱导K562细胞前后差异表达基因: 2006年; 目的研究三氧化二砷(As2O3)处理K562细胞前后,基因表达的变化。方法提取As2O3作用K562细胞前后的总RNA,逆转录成cDNA并用Cy3标记对照组,Cy5标记处理组,与自制的包含162个cDNA片段的K562芯片杂交。结果K562细胞经As2O3作用后,162个基因片段的表达都有所降低,其中25个基因片段的表达降低较为显著(Cy5/Cy3<0.5)。这些表达下调的基因片段包括转导因子、代谢酶、信号通路蛋白、激酶等,有6个差异表达基因与细胞的凋亡通路密切相关。As2O3可能通过抑制胰岛素样生长因子的功能,诱导细胞凋亡。结论应用自制的基因芯片筛选到了As2O3诱导K562细胞前后差异表达的基因,主要与细胞凋亡密切相关。; 郭秋野马文丽冯春琼吴清华彭翼飞郑文岭; 关键词：基因芯片三氧化二砷凋亡差异表达基因

《中华人民共和国生物安全法》实施背景下我国生物技术和人类遗传资源的伦理问题: 2024年; 随着生物技术的发展,特别是基因编辑技术的成熟与应用,而引发的生物技术和人类遗传资源相关伦理问题越来越多,我国对生物技术发展所带来的伦理问题也愈发关注和重视,2020年10月17日第十三届全国人民代表大会常务委员会第二十二次会议通过了《中华人民共和国生物安全法》(以下简称《生物安全法》),并自2021年4月15日起施行。《生物安全法》对我国相关专业人员的伦理意识教育、对生物技术研发的伦理审查、人类遗传资源和生物资源的主权及其采集、保藏、利用、对外提供等方面均提出了明确要求。本文概述了《生物安全法》对我国生物技术研发与应用以及人类遗传资源的利用等方面的伦理要求,并以“基因编辑婴儿”等事件为例,阐述了《生物安全法》实施背景下我国生物技术和人类遗传资源的伦理问题,以提高国家生物安全治理能力。; 赵宇骐刘滢芳林一凡吴清华何小艳; 关键词：生物技术人类遗传资源伦理

p53激活抗肿瘤药物应用p21途径双荧光素酶报告系统筛选初步研究被引量：1: 2013年; 目的:构建含人p21启动子的双荧光素酶报告载体,感染肿瘤细胞后用于检测p53激活的抗肿瘤药物筛选。方法:从人血白细胞DNA中克隆p21启动子,用于控制Firefly荧光素酶的表达;Renilla荧光素酶基因和EGFP基因与IRES相连,在CMV启动子控制下表达;将上述元件和基因克隆至载体pLL3.7中,应用酶切和测序反应验证后再转染至U251和Eca109肿瘤细胞建立细胞检测模型。结果:成功构建含人p21启动子、大小约13kb的pLL3.7-Dluc重组质粒,经LipofecttamineTM转染后用于细胞药物筛选;采用MTT方法对8种不同药物对U251和Eca109细胞处理后进行IC50检测,其中姜黄素和丹参酮ⅡA在U251肿瘤细胞中的IC50分别为20和8μg/mL,Eca109细胞的IC50分别为12和25μg/mL;药物作用转染后U251细胞48h后作荧光素酶检测,计算F/R值并SPSS 13.0分析,姜黄素和丹参酮ⅡA的P值分别为0.003和0.024,药物作用后荧光检测结果显著;该实验在Eca109细胞模型中姜黄素和丹参酮ⅡA取得了一致性的结果,P值分别为0.001和0.015。人参皂苷Rb1与阴性对照组相比差异有统计学意义,P=0.022。结论:通过p21途径检测双荧光素酶基因的表达状况,提示姜黄素、丹参酮ⅡA和人参皂苷Rb1三种药物在U251和Eca109肿瘤细胞中具有使p53活性增加的功能。; 吴清华陈荣誉邓治亮张宝石嵘马文丽郑文岭; 关键词：药物筛选丹参酮人参皂苷

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