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硅烷化玻璃酸酯在皮肤抗皱剂中细胞水平的功能研究: 2014年; 硅烷化玻璃酸酯复合物(silanol hyaluronate compound,SHAC)是一种透明质酸衍生物。类人胶原和肌肽是当前市场上主流的抗皱成分。本研究将SHAC用于皮肤抗皱剂中,研究其对成纤维细胞的影响。SHAC分别与类人胶原和肌肽复配,作用于体外培养的L929细胞,检测正常细胞的增殖活性和UVB损伤细胞的修复能力。结果表明:(1)肌肽能促进L929细胞的增殖,具有抑制UVB照射细胞引起的氧化损伤的能力。类人胶原蛋白没有明显效果。(2)SHAC分别与类人胶原、肌肽制备复配制剂,均能够显著促进细胞的增殖,抑制UVB照射引起的细胞损伤。SHAC能增强类人胶原和肌肽的功效,在开发皮肤抗皱功能的产品领域前景良好。; 刘少英刘霞杨素珍陈建英刘飞朱希强凌沛学; 关键词：肌肽增殖活性抗皱

交联透明质酸细胞支架材料及其制备方法和应用: 本发明涉及一种交联透明质酸细胞支架材料及其制备方法和应用。本发明交联透明质酸支架材料由一组高分子透明质酸盐和一组低分子透明质酸盐经交联获得，参与交联的透明质酸双糖分子比例为0.5％～20％，在等渗溶液中的膨胀率80％～1...; 凌沛学陈建英陈倩倩刘少英王勤; 文献传递

人透明质酸酶真核表达载体的构建及稳定转染CHO细胞系的建立: 2013年; 目的构建人透明质酸酶真核表达载体,并将其转染CHO细胞,建立稳定转染的CHO细胞系。方法根据已知的天然人透明质酸酶PH20的氨基酸序列,利用PCR技术,将其克隆至真核表达载体MO2中,得到表达质粒MO2/ph20。经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染CHO细胞,通过G418(800μg/mL)筛选,建立稳定转染的CHO细胞系,SDS-PAGE法检测重组人透明质酸酶的蛋白表达水平,利用3,5-二硝基水杨酸法检测筛选得到的4个阳性细胞克隆的生物活性。结果成功构建了MO2/ph20真核表达载体,并建立了稳定转染的CHO细胞系,成功地表达目的基因。重组人透明质酸酶表观相对分子质量约为70×103,4个阳性细胞克隆的酶活性均高于9000 U/L,其中MO2/ph20-4细胞株酶活性高达10 000 U/L以上。结论本研究成功构建了能够正确表达人透明质酸酶基因的真核表达载体MO2/ph20,并获得了有生物活性的重组人透明质酸酶,该体系的建立为进一步规模化生产重组人透明质酸酶奠定了基础。; 刘霞刘飞刘少英朱希强凌沛学; 关键词：真核表达载体基因表达

交联透明质酸细胞支架材料及其制备方法和应用: 本发明涉及一种交联透明质酸细胞支架材料及其制备方法和应用。本发明交联透明质酸支架材料由一组高分子透明质酸盐和一组低分子透明质酸盐经交联获得，参与交联的透明质酸双糖分子比例为0.5％～20％，在等渗溶液中的膨胀率80％～1...; 凌沛学陈建英陈倩倩刘少英王勤; 文献传递

重组人凝血酶真核表达载体的构建及其在CHO细胞中的稳定表达: 2013年; 目的构建含重组人凝血酶基因的重组真核表达载体,并转染哺乳动物细胞CHO,建立稳定表达重组人凝血酶的细胞株。方法利用限制性内切酶EcoR I和Xba I将凝血酶基因插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建含人凝血酶基因的重组质粒pcDNA3.1(+)/thrombin,利用双酶切和测序法鉴定。采用阳离子脂质体介导方法,将构建的表达载体转染到CHO细胞中,通过G418加压筛选出阳性细胞克隆,建立稳定表达人凝血酶的细胞株,并扩大培养。采用RT-PCR和SDS-PAGE法检测其mRNA和蛋白质的表达,并对其生物活性进行鉴定。结果重组质粒pcDNA3.1(+)/thrombin经双酶切和测序鉴定证实插入序列准确无误;经RT-PCR和SDS-PAGE法鉴定,转染的CHO细胞可表达、分泌人凝血酶,得到的重组人凝血酶表观相对分子质量(Mr)为43 000左右,与预测一致,且具有降解并凝固牛纤维蛋白原的活性,其比活为234.1 U/mg。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)/thrombin,并成功地在CHO细胞中表达了具有生物活性的重组人凝血酶,该体系的建立为进一步规模化生产重组人凝血酶奠定了基础。; 刘霞刘飞刘少英朱希强凌沛学; 关键词：CHO细胞真核表达载体转染

以交联透明质酸钠为支架体外构建组织工程软骨被引量：3: 2014年; 背景:采用组织工程技术再生和重建软骨是目前修复软骨组织缺损效果最好、最有应用前景的方法。目的:以体外培养的软骨细胞和交联透明质酸钠为支架材料,开发一套体外构建组织工程软骨的完整方案。方法:分离新西兰兔膝关节软骨细胞,制成细胞悬液滴加于交联透明质酸钠支架上,体外复合培养21 d,提取RNA进行RT-PCR检测,制备冰冻切片进行显微观察和免疫组织化学观察。结果与结论:软骨细胞接种于交联透明质酸钠支架材料后,可贴附于支架上生长,并且大量细胞聚集成团,在支架材料的纤维间隙中生长或呈单层细胞附着于支架材料纤维。细胞-支架复合物表达软骨组织特异性蛋白聚糖基因和Ⅱ型胶原α1基因,以及软骨组织特异性蛋白Ⅱ型胶原蛋白,可维持软骨细胞表型。表明培养的细胞-支架复合物在体外培养可形成软骨细胞外基质,有望获得组织工程软骨组织。; 刘少英陈建英陈倩倩刘飞刘霞朱希强凌沛学; 关键词：生物材料关节软骨免疫细胞化学形态学观察体外

聚谷氨酸的保湿功效及安全性评价被引量：16: 2015年; 通过CM825型皮肤水分测试仪和皮肤斑贴试验,研究聚谷氨酸的保湿功效及安全性。结果表明:不同分子量和质量分数的聚谷氨酸在保湿特性上差异较大,其中分子量为1 200 k Da的聚谷氨酸在质量分数为0.1%时,保湿效果最好;受试者涂抹该受试物2和4 h后皮肤水分含量的变化率分别为(103.9±0.2)%和(112.2±0.2)%,接近现在广泛使用的保湿剂透明质酸钠的(114.0±0.3)%;皮肤斑贴试验结果表明聚谷氨酸对皮肤安全、无刺激性。; 刘霞刘飞刘少英陈晓燕孟祥璟朱希强; 关键词：聚谷氨酸保湿

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刘少英