龚香艺
- 作品数：2 被引量：13H指数：2
- 供职机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省杰出青年基金长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 真菌壳聚糖酶研究进展被引量：7
- 2012年
- 壳聚糖酶是专一性降解壳聚糖的糖苷水解酶。在对比分析真菌壳聚糖酶和细菌壳聚糖酶的异同的基础上,总结近年来真菌壳聚糖酶在分类、酶学性质、基于分子生物学和生化工程的高产策略的研究进展。通过整理文献发现,来自真核微生物的壳聚糖酶降解产物为壳寡糖与氨基葡萄糖,具有分子质量大、活性较低等特点,针对酶活低这个迫切要解决的问题,讨论了提高产酶的潜在策略。
- 龚香艺吴静邬敏辰
- 关键词：酶学性质
- 一种增加重组毕赤酵母拷贝数提高胰岛素前体产量的策略被引量：6
- 2013年
- 【目的】为了进一步提高毕赤酵母表达生产人胰岛素前体的产量,【方法】将构建的表达载体pPICZα-IP电转至毕赤酵母X-33中,在100μg/mL zeocin的YPDS抗性平板筛选获得过量表达人源胰岛素前体(IP)的重组菌株B4和S6。在此基础上,以过量表达胰岛素前体的B4和S6为出发菌株,以SacI线性化的表达载体pPICZα-IP进行重复电转化,并在1000μg/mL zeocin的YPDS平板上筛选获得一株拷贝数为7的重组毕赤酵母2B4。【结果】该菌株在5 L规模发酵罐上,人源胰岛素前体产量是低拷贝数菌株B7的2.7倍,且菌体并未因拷贝数高而表现出生长不良的现象。实时定量PCR检测后,发现2B4菌株胰岛素前体基因的转录水平是B7的2倍。【结论】综上结果表明,采用抗性筛选和重复电转相结合的高拷贝重组毕赤酵母构建策略,能有效促进目的基因的转录水平,最终显著提高目标蛋白的产量。
- 龚香艺丁重阳刘立明吴静
