韩健 作品数:43 被引量:196 H指数:6 供职机构: 第三军医大学大坪医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 卫生部科技专项基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 文化科学 生物学 一般工业技术 更多>>
缺氧对合体滋养细胞胞外体分泌和Rab11蛋白表达的影响 2016年 目的探讨缺氧条件下,Rab11蛋白的表达变化及其在合体滋养细胞胞外体(syncytiotrophoblast exosome,STBEX)过度分泌中的作用。方法将传代培养的Be Wo细胞分为4组(n=24),1Be Wo常氧组:Be Wo细胞在普通培养基、常氧条件下培养;2Be Wo低氧组:Be Wo细胞在普通培养基、低氧条件下培养(92%N2、5%CO2、3%O2);3融合Be Wo常氧组:Be Wo细胞以佛司可林(Forskolin)合体化刺激48 h后,常氧条件下培养;4融合Be Wo低氧组:Be Wo细胞以Forskolin合体化刺激48 h后,低氧条件下培养(92%N2、5%CO2、3%O2)。收集各组细胞上清液并检测STBEX蛋白浓度,采用Western blot检测各组细胞HIF-1α、Rab11蛋白的表达。结果与融合Be Wo常氧组比较,融合Be Wo低氧组上清液中STBEX的蛋白浓度升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与Be Wo常氧组比较,Be Wo低氧组上清液中STBEX蛋白浓度升高,差异具有统计学意义(P<0.05);Western blot检测结果:与常氧培养组相比,低氧培养组细胞中HIF-1α与Rab11蛋白表达升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论缺氧条件下Rab11蛋白可能促进合体滋养细胞胞外体的过度分泌。 李银锋 韩磊 顾焱 张欣 李红梅 周丽娟 俞丽丽 韩健 李力关键词:缺氧 滋养细胞 小鼠合体滋养细胞微绒毛膜制备方法的研究 目的:建立一种制备小鼠合体滋养细胞微绒毛膜的方法。方法:收集足月孕小鼠的胎盘,利用机械分离法剪碎胎盘进行差速离心,分离小鼠STBM。用lowry法测定制备的小鼠STBM蛋白浓度,用组织多肽抗原作为小鼠STBM的标记物,用... 李怡琳 刘晓洁 韩磊 李红梅 周丽娟 张欣 郑英如 郭建新 俞丽丽 韩健 李力关键词:子痫前期 C57BL/6小鼠 文献传递 重度子痫前期胎盘合体滋养细胞微绒毛膜脱落与Rho/ROCK分子表达的关系 被引量:14 2012年 目的探讨重度子痫前期(sPE)患者合体滋养细胞表面微绒毛膜(STBM)脱落水平与胎盘组织Rho/ROCK分子表达的关系。方法收集sPE产妇(sPE组)和正常产妇(对照组)胎盘组织各20例,透射电镜下观察胎盘合体滋养细胞表面微绒毛结构变化,应用体视学方法分析细胞表面微绒毛数密度(Nv)、表面积密度(Sv)和体积密度(Vv),通过Western blotting和免疫组化检测胎盘组织中Rho亚家族蛋白成员(RhoA、RhoB、RhoC)及Rho激酶(ROCKI、ROCKⅡ)的表达水平。应用Spearman等级相关分析法检验Rho、ROCK蛋白表达水平与STBM脱落水平的相关性。结果 sPE组患者胎盘合体滋养细胞表面微绒毛的Nv、Sv、Vv均显著小于对照组(P<0.05),胎盘组织中RhoA、RhoB、ROCKI、ROCKⅡ蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05)。sPE组患者胎盘组织中RhoB、ROCKI、ROCKⅡ的表达水平与STBM的脱落水平均呈正相关(r=0.631,r=0.826,r=0.865,P<0.05)。结论 RhoB及其与下游分子ROCKI、ROCKⅡ构成的信号通路可能在sPE时胎盘STBM脱落过程中发挥重要作用。 杨博萍 韩健 韩新美 俞丽丽 颜耀华 周元国 李力关键词:RHO因子 先兆子痫 98.RhoB/ROCK蛋白分子在重度子痫前期胎盘组织中表达 目的探讨RhoB/ROCK蛋白分子在重度子痫前期(severe preeclampsia,sPE)患者胎盘组织中表达水平以及意义.方法取sPE产妇和正常产妇胎盘组织各20例,通过Western blot和免疫组化检测胎盘... 杨博萍 韩健 韩新美 俞丽丽 颜耀华 周元国 李力关键词:RHOB ROCK 重度子痫前期 文献传递 Eag1钾离子通道在宫颈癌细胞缺氧感受中的作用及其对中子放疗的影响 2011年 [目的]研究缺氧条件下Eag1活性的变化及其对中子照射的影响。[方法]采用全细胞膜片钳记录的方法,观察常氧及缺氧条件下宫颈癌HeLa细胞膜上Eag1钾离子通道电生理特点。电镜观察缺氧条件下线粒体超微结构的变化;流式细胞仪及高效液相色谱分析法检测缺氧条件下Eag1钾离子通道开放状态对活性氧(ROS)生成的影响。MTT、流式细胞仪方法检测不同浓度钾离子阻断剂4-AP对宫颈癌HeLa细胞中子照射后细胞增殖抑制、凋亡的影响。[结果]缺氧条件下HeLa细胞膜上Eag1钾离子通道有电生理活动的改变。Eag1钾离子通道活性改变对线粒体结构和功能有重要的影响。相同缺氧条件、相同中子照射剂量下钾离子通道阻断剂4-AP能明显增加细胞的增殖抑制率和凋亡率,增强放疗效果。[结论]Eag1在细胞缺氧感受中起重要的作用,对其活性的抑制能增强放疗效果。 林爽 李力 郭建新 郑秀惠 易萍 韩健关键词:宫颈肿瘤 钾离子通道 小鼠合体滋养细胞微绒毛膜制备方法的研究 被引量:4 2013年 目的建立一种制备小鼠合体滋养细胞微绒毛膜(STBM)的方法。方法收集足月孕小鼠的胎盘,利用机械分离法剪碎胎盘进行差速离心,分离小鼠STBM。用Lowry法测定制备的小鼠STBM蛋白水平,用组织多肽抗原作为小鼠STBM的标记物,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测STBM的水平,利用电镜观察并分析小鼠STBM的形态结构。结果实验获得的小鼠STBM制剂的蛋白水平为(0.69±0.12)mg/mL,TPA水平为(61.49±9.78)ng/mL。电镜下小鼠STBM的直径为(228.52±90.06)nm的囊泡状结构。结论制备的小鼠STBM与人STBM高度相似,可为子痫前期致病机制的探索提供在体研究的实验基础。 李怡琳 韩健 刘晓洁 韩磊 俞丽丽 李红梅 周丽娟 张欣 郑英如 郭建新 李力关键词:胎盘 C57BL 宫颈癌中Eag1钾离子通道的表达以及缺氧对其的调控作用 被引量:6 2010年 目的研究不同病变宫颈组织中Eag1表达情况以及缺氧对宫颈癌Hela细胞膜上Eag1钾离子通道表达的影响。方法采用免疫组化、免疫荧光和RT-PCR法,检测不同病变宫颈组织和宫颈癌Hela细胞中Eag1蛋白的表达情况,以及不同缺氧时间和缺氧浓度对Hela细胞中Eag1 mRNA表达的影响。结果免疫组化结果表明,宫颈上皮内瘤变组织中Eag1蛋白的表达明显高于正常组,宫颈癌组织中Eag1的表达明显高于宫颈上皮内瘤变组;Eag1的表达随临床分期的增高而增加;与病理分级无明显相关性。免疫荧光、RT-PCR结果表明,正常培养的宫颈癌Hela细胞中即有Eag1表达;其表达随缺氧程度加深及缺氧时间的延长明显增强。结论Eag1钾离子通道蛋白有可能成为新的早期筛查和判断宫颈癌生物学行为的诊断指标。Eag1在宫颈癌Hela细胞缺氧感受中起重要的作用。 林爽 李力 易萍 郑秀惠 郭建新 韩健关键词:宫颈癌 钾离子通道 胎盘合体滋养细胞微粒注射对孕鼠肾功能和病理形态损伤的研究 2015年 目的观察经孕鼠尾静脉注射合体滋养细胞微粒(syncytiotrophoblast microparticles STBM)后,小鼠肾功能及肾脏病理改变。方法收集孕18 d C57小鼠的胎盘,制备小鼠合体滋养细胞微粒,利用电镜观察C57小鼠STBM的形态结构,BCA法测定C57小鼠STBM的蛋白水平;将C57孕鼠分为STBM组、对照组和PBS组,STBM组:自C57小鼠孕8 d起,每天以蛋白浓度为0.15 mg/m L的STBM(0.2 m L)经鼠尾静脉回输至小鼠体内,至孕18 d时收集小鼠24 h尿液测定尿微量蛋白(M-TP)、尿肌酐(U-Crea)、尿蛋白肌酐比(M-TP/Cr)、尿酸(U-Uric)、24 h尿蛋白(24 h U-TP),采集全血测定血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、胱抑素C(Cys-C),取肾脏标本切片后行HE染色观察肾组织结构变化;对照组:正常孕18 d小鼠收集尿液、采集全血、取肾脏进行检测;PBS组:自孕8 d起每天经鼠尾静脉注射PBS 0.2 m L,余处理同STBM组。结果 STBM组孕鼠尿液M-TP、M-TP/Cr、24 h U-TP明显高于对照组和PBS组(P<0.01),与对照组比较,PBS组U-Uric未见明显变化(P>0.05),而STBM组U-Uric显著降低(P<0.01);STBM组血清BUN、Scr、Cys-C含量显著升高(P<0.01);STBM组肾脏HE染色可见肾小球内皮细胞增生、肿胀、变形,肾小管云雾状变性。结论类子痫前期模型鼠有肾损伤,STBM可能在子痫前期肾损害中起重要作用。 张欣 李红梅 李怡琳 周丽娟 李银峰 顾焱 韩健 韩磊 郑英如 郭建新 李力关键词:肾损害 子痫前期 合体滋养细胞微泡对树突状细胞免疫功能影响的实验研究 目的:研究小鼠合体滋养细胞微泡(STBM)对骨髓源性树突状细胞(BMDCs)免疫功能的影响.方法:机械分离法将小鼠胎盘剪碎,采用差速离心法制备合体滋养细胞微泡.添加重组粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-csf)、重组... 顾焱 李银锋 韩磊 张欣 黄威 李红梅 周丽娟 韩健 陈建坤 郑英如 俞丽丽 李力关键词:树突状细胞 免疫 子痫前期 严重创伤对小鼠体内单核细胞向树突状细胞分化及迁移过程的影响 被引量:6 2007年 目的观察严重创伤对小鼠体内单核细胞向树突状细胞分化及迁移的影响。方法皮下注射FITC荧光微球,细胞计数,流式细胞仪检测等观察引流淋巴结荧光阳性细胞数量及所占比例;荧光显微镜观察注射局部炎性细胞浸润情况及局部组织荧光强度;丙酮提取法检测局部残余荧光物质并计算局部荧光物质清除率。结果严重创伤动物引流淋巴结FITC荧光阳性细胞百分比(0.021±0.009)%及绝对数量[(492±211)个]均显著低于正常对照组动物[(0.040±0.012)%,P<0.05;(726±218)个,P<0.05];伤后早期创伤动物微球注射局部炎性细胞浸润明显增强;严重创伤动物耳片荧光微球清除率在注射微球后1、2、4和6天均显著高于正常对照组动物,差异显著(P<0.05)或非常显著(P<0.01)。结论严重创伤后小鼠体内单核细胞向树突状细胞的分化并迁移的过程发生了障碍,该障碍并非是由于单核细胞浸润炎性病灶和否噬细胞摄取抗原及迁移启动受阻所致。 韩健 梁华平关键词:创伤 失血 树突状细胞 单核细胞