陈银
- 作品数：39 被引量：110H指数：6
- 供职机构：江苏省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
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- 新型冠状病毒N亚基因组荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
- 2023年
- 目的建立一种快速检测新型冠状病毒N亚基因组(SgN)的方法,探讨其在新型冠状病毒肺炎病例及环境样本中的应用价值。方法根据全球共享流感数据库(GISAID)公布的新型冠状病毒全基因组序列设计SgN特异性引物和探针,优化退火温度、引物与探针浓度等反应条件,建立新型冠状病毒SgN荧光定量PCR检测方法,绘制标准曲线,评价该方法的灵敏性、重复性和特异性。采用建立的病毒SgN荧光定量PCR检测方法检测21份环境和351份临床样本,并选取25份SgN阳性样本进行病毒分离以评估该检测方法的应用效果。结果 SgN的引物和探针对新型冠状病毒具有良好特异性。初步建立的病毒SgN荧光定量PCR检测方法最低检测限为1.5×102copies/ml,变异系数小于1%。372份样本的gRNA阳性率为97.04%(361/372),gRNA阳性样本中阳性环境样本和阳性临床样本的SgN阳性率分别为36.84%(7/19)和49.42%(169/342)。其中野生型毒株样本的SgN阳性率及拷贝数均比德尔塔(Delta)毒株低。在25份SgN阳性样本中,采样时间在5 d内的12份样本均分离到病毒;13份采样时间在12 d以上的样本未发生细胞病变。结论成功建立了一种检测新型冠状病毒SgN的荧光定量PCR方法,该方法的灵敏度、特异性和重复性均较好。
- 朱小娟陈银吴斌葛以跃吴涛乔乔赵康辰崔仑标
- 关键词：新型冠状病毒荧光定量PCR
- 2020年江苏省306例不同特征新冠肺炎病例咽拭子病毒载量分布被引量：2
- 2022年
- 目的分析不同临床严重程度的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)病例咽拭子中的病毒载量,及与患者年龄、性别和发病间隔的关系,为深入了解SARS-CoV-2的传染性和致病性提供依据。方法采用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR),对2020年江苏省306例入院前未经抗病毒治疗的新冠肺炎(COVID-19)病例咽拭子中SARS-CoV-2病毒载量进行检测,并对不同病情患者的病毒载量进行分析。结果306例新冠肺炎病例中,男性占56.9%,30~59岁占68.0%;普通肺炎型占66.7%,轻症无肺炎型占24.8%,重症肺炎型占8.5%;病例发病和首次SARS-CoV-2核酸阳性的发病间隔为-4~15 d,主要集中在0~8 d(256例,占83.7%)。不同年龄组病情分布差异有统计学意义(P<0.01):轻症以2~29岁组占比高(36.2%),普通肺炎型以30~59岁组占比高(70.2%),重症肺炎型以60~97岁组占比高(21.6%);不同年龄组重症占比、不同发病间隔组病情分布差异均有统计学意义(P值均<0.01)。普通肺炎组、重症肺炎组和轻症非肺炎组病例平均病毒载量对数值分别为(5.93±1.23)、(6.17±1.54)、(6.28±1.28)/ml(log10),差异无统计学意义(t=1.02,P=0.31);部分患者尤其是轻症患者发病时已检出新冠病毒核酸阳性且病毒载量较高(6.43±1.34)/ml(log10);重症肺炎患者的平均病毒载量在发病间隔4~5 d组最高,非重症肺炎患者在发病间隔2~3 d组最高。结论不同特征新冠肺炎病例病毒载量分布存在一定差异;病毒RNA载量与病情有一定关系。
- 江梦圆陈银吴斌刘康崔仑标朱小娟吴涛赵康辰葛以跃朱凤才
- 关键词：病毒载量荧光定量PCR
- 基于微量中和试验的新冠感染者血清样本中和抗体高通量检测方法评价被引量：3
- 2022年
- 目的基于微量中和试验为金标准,评价两类三种高通量中和抗体检测方法的检测能力。方法以江苏省2020年以来发现的64例新冠病例为研究对象,采集早期和随访血清样本共117份开展中和抗体水平分析,用微量中和试验、假病毒中和抗体试验(PBNA)、竞争抑制试验[酶联免疫法(ELISA)和化学发光免疫法(CLIA)]别对血清样本进行测试,评价这些高通量中和抗体检测方法的相关系数及有效性的临界值等。结果新冠感染者假病毒中和抗体试验、酶联免疫法、化学发光免疫法相对于微量中和试验检测的相关系数分别为0.760、0.778和0.725,当微量中和试验的临界值取为1:10时(小于10为阴性),PBNA检测方法的Cutoff值为50时,ROC曲线下面积为0.901;ELISA检测方法的Cutoff值为1∶8时,ROC曲线下面积为0.934;CLIA检测方法的Cutoff值为1.28AU/ml时,ROC曲线下面积为0.838。结论建立的新冠病毒中和抗体高通量检测方法具有科学性和可行性,为新冠疫情常态化防控提供重要的技术手段。
- 孔筱筱张诗晗李志锋余慧燕邹鑫田华许可戴启刚陈银刘静娴郭宏雄郭喜玲鲍倡俊朱立国
- 关键词：微量中和试验中和抗体高通量
- 重组酶聚合酶扩增结合横向流体试纸条快速检测人腺病毒被引量：4
- 2017年
- 目的 建立一种快速、敏感的人腺病毒等温核酸扩增检测方法.方法 针对人腺病毒hexon基因保守区序列设计特异性重组酶聚合酶扩增（RPA）引物及探针、优化反应时间和温度、用横向流体试纸条（LFD）和毛细管电泳检测扩增产物,建立人腺病毒RPA-LFD快速检测方法,评价该方法的敏感度和特异性并与Real-time PCR法比较.结果 RPA-LFD方法检测人腺病毒的最低检出限为2拷贝DNA分子/反应,且与其他呼吸道病原无交叉反应,临床样本检测结果与Real-time PCR法一致性为100％.结论 建立的RPA-LFD方法具有敏感性、特异性高、快速且不需要昂贵的仪器设备等优点,为人腺病毒快速检测提供了新工具.
- 赵康辰葛以跃崔仑标陈银史智扬朱凤才周明浩
- 关键词：腺病毒
- 一种大肠杆菌H血清型分型检测试剂盒及检测方法
- 本发明涉及一种大肠杆菌H血清型分型检测试剂盒，其包括扩增大肠杆菌H血清型H1～H12、H14～H21、H23～H49、H51～H56的PCR引物，引物序列见SEQ ID NO.1‑106，还包括H血清型分型标准物。本发明...
- 吴斌陈银朱小娟崔仑标吴涛葛以跃赵康辰朱凤才周明浩
- 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术抑制EV71复制被引量：3
- 2016年
- 目的：利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对肠道病毒71型（EV71）的特定基因进行编辑，评价其抑制EV71复制的效应。方法针对EV71的VP4区设计CRISPR/Cas9表达质粒pCas-Guide-GFP-G1及含PAM序列的DNA片段并转染Vero细胞株。采用噻唑蓝（ MTT）法测定细胞毒性，转染后接种病毒观察细胞病变作用（ CPE），荧光定量RT-PCR法检测EV71含量，免疫共沉淀结合荧光定量RT-PCR法测定 Cas9-gRNA 在细胞内与 EV71 RNA 特异性结合的能力。结果成功构建pCas-Guide-GFP-G1表达质粒；转染细胞后未见明显细胞毒性效应；细胞转染后接种病毒发现pCas-Guide-GFP-G1＋PAM1组细胞病变明显少于其他对照组；培养上清中 EV71含量较对照组降低了40.4%（P=0.056），细胞中 EV71含量较对照组降低了52.8%（P=0.014）；pCas-Guide-GFP-G1＋PAM1组在细胞内与 EV71 RNA 特异性结合能力最高。结论针对 EV71的 VP4基因设计的CRISPR/Cas9表达质粒在特定PAM存在下能通过对EV71基因组的剪切实现抑制EV71病毒复制的作用，可以为EV71治疗提供新的途径。
- 吴涛朱小娟樊欢葛以跃陈银郭喜玲赵康辰史智扬朱凤才崔仑标
- 关键词：肠道病毒71型病毒复制
- 新疆克拉玛依地区蜱媒病原体的调查被引量：3
- 2020年
- 目的调查新疆克拉玛依地区蜱种类及其携带病原体。方法于克拉玛依市不同区采集游离蜱和寄生蜱,鉴定蜱种类,利用荧光定量PCR或套氏PCR/半套氏PCR检测发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒、斑点热群立克次体、克里米亚-刚果出血热病毒、蜱传脑炎病毒、巴贝斯虫/泰勒虫、贝氏立克次体、查菲埃立克次体、恙虫病东方体和伯氏疏螺旋体等9种病原体。结果共采集蜱683只,分3属3种,其中亚东璃眼蜱数量(n=362)最多,其次为银盾革蜱(n=311)、图兰扇头蜱(n=10)。银盾革蜱中斑点热群立克次体的阳性率为3.2%(10/311),巴贝斯虫的阳性率为1.0%(3/311);亚东璃眼蜱中巴贝斯虫的阳性率为0.8%(3/362),泰勒虫阳性率为0.3%(1/362);其他病原体检测结果均呈阴性。PCR扩增阳性基因序列分析显示银盾革蜱携斑点热群立克次体阳性与劳氏立克次体最相关,银盾革蜱和亚东璃眼蜱携带驽巴贝斯虫。结论新疆克拉玛依地区优势蜱为亚东璃眼蜱和银盾革蜱,银盾革蜱携带劳氏立克次体,银盾革蜱和亚东璃眼蜱携带驽巴贝斯虫,提示该地区存在斑点热、巴贝斯虫病的自然疫源地,因此有必要加强对这些蜱携疾病的防控。
- 陈红娜叶刚陈银吴治明黄志光鲜军杨维芳崔仑标张育富褚宏亮
- 一种大肠杆菌H血清型分型检测试剂盒及检测方法
- 本发明涉及一种大肠杆菌H血清型分型检测试剂盒，其包括扩增大肠杆菌H血清型H1～H12、H14～H21、H23～H49、H51～H56的PCR引物，引物序列见SEQ ID NO.1‑106，还包括H血清型分型标准物。本发明...
- 吴斌陈银朱小娟崔仑标吴涛葛以跃赵康辰朱凤才周明浩
- 江苏省2008年手足口病病原分析被引量：2
- 2011年
- 肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16（CoxA16）为手足口病的主要病原体.江苏与山东、河南、安徽交界的区域是我国两大手足口病高发地区之一,本文对2008年4月上旬至6月中旬江苏12个市城乡63批次355份临床诊断为手足口病病人的咽拭子标本进行了病原分离,并对全部182个分离毒株进行鉴定,以了解江苏手足口病流行的病原特征.
- 李显唐震崔仑标单军单云峰葛以跃赵康成郭喜玲吴涛彭海燕陈银史智扬汪华
- 关键词：手足口病病原分析柯萨奇病毒咽拭子标本高发地区病原分离
- 腺病毒55型感染肺炎患者的病原学鉴定及全基因序列分析被引量：5
- 2017年
- 目的对1例不明原因肺炎患者进行病原学诊断,分析其病原学特征及重组特点,为其防治提供参考。方法采集患者的咽拭子标本,提取DNA,采用Real-time荧光定量PCR法检测病原体特异性片段;采用Hep-2细胞培养分离病毒;通过Sanger测序hexon基因进行型别鉴定,通过高通量测序技术对病毒进行全基因组测序,采用MEGA6.0软件进行序列比对,通过邻近归并法(Neighbor-Joining)构建种系发生进化树分析基因特征,运用Simplot软件进行序列重组分析。结果从患者咽拭子标本中检测并分离到腺病毒,hexon基因测序后进行比对分析,其与腺病毒B组55型及11型同源性较高;全基因测序显示该病毒与HAdV-55QS-DLL及Shanxi/QZ01/2011株同源性较高,在E1B、DNA-Polymerase、100Ka Hexon和Fiber编码区存在氨基酸变异;种系发生进化树显示该毒株与腺病毒14型同属一支,与腺病毒11型进化分支较近;相似性曲线及BootScan分析显示该病毒株于hexon编码区存在HAdV-11与HAdV-14型间重组。结论本例患者不明原因肺炎由腺病毒B组55型感染引起,该病毒由HAdV-11与HAdV-14重组产生,其生物学特性有待进一步研究。
- 朱小娟郭喜玲赵康辰葛以跃吴涛戚宇华陈银史智扬朱凤才周明浩崔仑标
- 关键词：不明原因肺炎分子特征
