陈志永
- 作品数：6 被引量：13H指数：3
- 供职机构：南方医科大学公共卫生与热带医学学院流行病学系更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 霍乱弧菌LAMP快速检测方法的建立及应用被引量：6
- 2009年
- 目的建立环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测霍乱弧菌。方法针对霍乱弧菌外膜蛋白的ompW基因设计特异引物,优化反应条件,建立霍乱弧菌的LAMP检测方法。通过对47株细菌及模拟污染现场,检测该方法的灵敏度、特异度和实用性。结果活菌计数方法表明建立的LAMP方法检测霍乱弧菌的灵敏度为1.6×102cfu/ml,在人工污染霍乱弧菌的粪便及海水标本中检测的敏感度为1.6×103cfu/ml,在牛奶标本中敏感度为1.6×104cfu/ml。检测21株霍乱弧菌均为阳性,26株非霍乱菌则全部阴性,特异度为100%。结论建立的LAMP方法检测霍乱弧菌灵敏度、特异度高,可用于霍乱现场监测和流行病学调查。
- 柯雪梅陈胤瑜高璐璐杜正平冯雪梅廖如燕陈志永曹以诚陈清
- 关键词：霍乱弧菌环介导等温扩增技术
- 实验小鼠感染鼠诺如病毒的检测被引量：3
- 2011年
- 目的了解实验小鼠鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的携带情况及其基因特征。方法在广州某实验动物中心抽取两个种系的实验小鼠,采集其粪便标本,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测粪便标本的MNVORF2特异性基因(547bp,MNVnt5104～5650)。对阳性PCR产物进行测序并以测序结果构建基因进化树分析。结果共采集实验小鼠粪便标本20份,粪便来源的小鼠外表健康、活泼、进食正常,没有腹泻现象。MNV的阳性率为30.0%(6/20),阳性实验小鼠种类包括昆明小鼠(3/13)和NIH小鼠(3/7)。本研究检测的6个MNVs在进化树上独立一小分支,与参考株MNV2、3、4最为相近;核酸序列比较发现6个MNVs核酸序列的同源性最高,为98.3%～99.8%。结论该实验动物中心的小鼠存在较高的MNV携带状况,并可能在饲养设施内传播,有必要进一步探讨实验小鼠携带MNV的生物学意义。
- 肖建鹏马莉珍刘姗周军华陈志永陈清
- 关键词：实验小鼠RT-PCR携带率
- 不同试剂盒对乙脑病毒RNA提取效能的比较
- 2009年
- 目的比较常见的3种商售RNA提取试剂对乙脑病毒检测的相对效率、耗时和成本,为实验室应用及检测结果的评价提供依据。方法对乙脑病毒参考株悬液作10-1～10-4系列稀释,选用QIAGEN公司的QIAamp Viral RNA MiniKit、Sangon生物公司的RNA提取试剂盒和Invitrogen公司的Trizol试剂3种核酸提取方法提取上述样本RNA,用TaqMan实时荧光定量反转录聚合酶链反应对其提取效率进行评价,并比较3种试剂(盒)的耗费时间和价格。结果对不同稀释度乙脑病毒样本的检测,均以QIAGEN公司QIAamp Viral RNA MiniKit检测的敏感度最高。以该试剂盒的提取效率为100%,则Invitrogen和Sangon生物公司RNA提取试剂(盒)的提取效率分别为77.4%～86.8%和64.2%～74.1%。3种试剂(盒)对cDNA起始模板量的估计也有明显的影响,差别达到1～3个数量级,以QIAGEN公司的试剂盒最敏感。3种试剂(盒)提取RNA耗时分别为60min、100min和70min,价格效率比分别为46元、23元和20元。结论RNA提取试剂可影响JEV荧光定量PCR检测的结果,各实验室应根据实验目的和实验室条件,合理选择病毒RNA提取试剂盒。
- 陈亿雄陈志永柯雪梅任旭琦陈清
- 关键词：乙脑病毒RNA提取
- TD-PCR技术用于肠道病毒71的检测被引量：1
- 2009年
- 目的评价降落聚合酶链反应(touchdown PCR,TD-PCR)检测肠道病毒71型(Enterovirus71,EV71)的效能和敏感性。方法根据touchdown原理设计TD-PCR程序,试验选择PCR最佳反应条件,分别与普通PCR及TD-PCR、普通Taq酶与热启动酶扩增效果进行比较,并利用10倍稀释法检验TD-PCR方法的灵敏度。琼脂糖凝胶电泳验证扩增产物,纯化后DNA产物测序验证该方法的特异性。结果 TD-PCR的扩增片段条带清晰,检测效果明显优于普通PCR,使用普通Taq酶的TD-PCR比使用热启动酶有更优的性价比,测序证实了此组片段的特异性,cDNA的最低检测浓度为1.031μg/mL。结论成功建立TD-PCR检测EV71的方法,使用普通Taq酶获得理想的检测结果,为快速检测手足口病的病原体提供了可靠的手段。
- 高璐璐陈清郭江陈志永俞守义
- 关键词：肠道病毒71型
- 香港海鸥型菌的研究进展
- 2009年
- 研究人员证实，香港海鸥型菌自被发现以来，即与社区获得性胃肠炎、旅行者腹泻有关，甚至可能是近20年来发现的首种可致严重胃肠炎的新病菌。淡水鱼可能是香港海鸥型菌的主要储存宿主，进食鱼类为其主要的感染途径。同时，亚洲、欧洲、非洲及中美国家相继发现感染个案，提示病菌可能在全球范围广泛分布。本文描述了香港海鸥型菌的生物学及生化特性，并阐述其病原学、流行病学、实验室诊断等方面的主要进展，展望其研究前景。
- 高璐璐陈志永陈清
- 关键词：病原学流行病学旅行者腹泻淡水鱼
- RT-PCR与SYBR GreenⅠ实时RT-PCR方法检测乙型脑炎病毒的比较被引量：3
- 2010年
- 目的:比较RT-PCR和SYBR GreenⅠ实时RT-PCR方法检测乙型脑炎病毒(JEV)的敏感性、特异性和时效性。方法:采用RT-PCR和SYBR GreenⅠ实时RT-PCR方法对连续10倍稀释的JEV核酸样品平行检测,比较两种方法的敏感性。同时以登革2型病毒、诺如病毒和狂犬病毒核酸进行两种方法的特异性测试。结果:SYBR GreenⅠ实时RT-PCR方法可检测出40copies/μL的核酸分子水平,与普通RT-PCR方法相比,敏感度提高了10倍,检测时间节省2h。两种检测方法在检测JEV方面,与登革2型病毒、诺如病毒和狂犬病毒核酸均无交叉反应。结论:与普通RT-PCR相比,SYBR GreenⅠ实时RT-PCR是一种更敏感、快速检测JEV的方法。
- 陈志永肖建鹏马莉珍高璐璐陈清
- 关键词：SYBR
