王春霞
- 作品数：3 被引量：21H指数：2
- 供职机构：北京大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 转基因烟草分析COP1亚细胞定位及各结构域的功能被引量：1
- 2002年
- 植物体内存在着非常精巧的光信号调节系统以适应外界光环境的变化,COP1蛋白是这个调节系统中介导光信号转导的一个关键因子.利用从豌豆克隆的COP1的cDNA,根据豌豆COP1的蛋白结构设计了4种不同的结构域基因片段,构建了这4个片段及COP1全基因与GFP融合基因的植物表达载体,通过根癌农杆菌分别转化烟草.利用由原核表达的GFP-COP1融合蛋白制备的抗体和GFP基因片段制成的放射性探针,通过Southern和免疫印迹实验证实各种外源融合基因在转基因烟草中均获得了组成型的表达.通过系统研究不同光照条件下这些融合蛋白的亚细胞定位的变化和由此导致的转基因烟草的表型变化,发现:（1）烟草内源COP1的分子量为76ku,在各器官组成型存在,光照条件对其含量影响不大.（2）COP1的细胞核定位域在其核-质分配的调节中起着关键作用.含有核定位域的目的蛋白在叶表皮细胞中的亚细胞定位受光调节,而在根细胞则组成型定位于细胞核中.（3）Coiled-coil域对COP1 的功能十分重要,而锌指结构域起辅助作用.（4）WD-40重复结构域起着关键作用,但单独的WD-40重复结构域不影响光形态发生.（5）过量表达COP1不仅导致烟草地上部分光形态发生受抑制,而且还导致短的簇生根发生.相反,过量表达不含WD-40重复结构域的COP1则促进地上部分光形态发生,
- 王春霞黄晨辉吴光耀吴相钰赵进东
- 关键词：转基因烟草结构域
- 豌豆cop1 cDNA的克隆、序列分析及其在大肠杆菌中的表达被引量：3
- 1999年
- 以拟南芥ｃｏｐ１ｃＤＮＡ为探针，从豌豆（Ｐｉｓｕｍｓａｔｉｖｕｍ）ｃＤＮＡ文库中克隆到了豌豆ｃｏｐ１ｃＤＮＡ。序列分析表明，它全长为２８６３ｂｐ，其中包括６０４ｂｐ５′非编码区、２４３ｂｐ３′非编码区和２０１６ｂｐ编码区，编码６７２个氨基酸。在大肠杆菌中实现了豌豆ｃｏｐ１基因的高效表达。对拟南芥、豌豆和番茄３种植物ｃｏｐ１的序列同源性比较表明，ｃｏｐ１可能是一种进化上很保守的蛋白质。
- 赵丽段学彦王春霞吴相钰
- 关键词：豌豆CDNA克隆基因表达
- 美洲商陆中新发现的一种抗菌蛋白基因的克隆和表达被引量：17
- 1999年
- 自美洲商陆(PhytolaccaamericanaL.)的种子中发现了一种具有38个氨基酸残基的蛋白(PaAFP),它有明显抑制立枯丝核菌(RhizoctoniasolaniKiihn)作用。依此蛋白的氨基酸序列合成引物,从该种子的mRNA中,通过逆转录PCR,获得了这一基因的具有65个氨基酸的前体蛋白cDNA序列(已在GenBank注册),将这一成熟蛋白的cDNA克隆在pGEX4T1上,并转化到大肠杆菌(E.coli),融合蛋白被大量表达。表达产物经谷胱甘肽Sepharose4B亲合层析,融合蛋白被纯化。纯化后的融合蛋白经凝血酶(thrombin)作用,将谷胱甘肽S转移酶降解。
- 刘迎芳王春霞赵进东吴光耀
- 关键词：美洲商陆抗菌蛋白基因克隆
