王俨
- 作品数：19 被引量：85H指数：6
- 供职机构：新疆医科大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金新疆维吾尔自治区高校科研计划教育部“春晖计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 泡球蚴18基因的克隆、原核表达质粒的构建及其初步表达的研究被引量：11
- 2005年
- 目的: 克隆、分析泡球蚴 18 (Em18)抗原基因,构建 pET41a Em18 原核表达质粒,并初步诱导表达Em18重组蛋白。方法: DNAman软件设计引物,RT PCR法克隆 Em18 cDNA并构建 pMD18 T/Em18 质粒,测序确定序列,利用DNAman和BLAST软件,对其进行基因序列分析。构建 pET41a Em18 原核表达质粒,测序鉴定插入序列正确性。IPTG初步诱导和表达 rEm18 GST重组蛋白,SDS PAGE电泳检测。结果: 测序结果显示Em18抗原基因长度为 486 bp,编码 161 个氨基酸。BLAST 比对分析表明为一新序列并被 GenBank 收录(AY513691)。构建的 pET41a Em18原核表达质粒,经 IPTG诱导后,SDS PAGE检测表明 rEm18 GST重组蛋白得到成功表达,在相对分子量为50 KDa处有表达条带。结论: 成功克隆并构建了 pET41a Em18 原核表达质粒,初步诱导表达出 rEm18 GST重组蛋白,为新一代包虫病诊断试剂盒的研制奠定基础。
- 王俨林仁勇丁剑冰卢晓梅张静萍王星梁晓慧张亚楼张琰温浩
- 关键词：泡球蚴重组蛋白
- 泡球蚴Em18重组蛋白的表达及其抗原性检测的研究被引量：17
- 2005年
- 目的 构建泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的Em18重组蛋白,为包虫病诊断试剂的研制奠定基础。 方法 用DNAman软件设计引物,分别在引物5′端和3′端添加EcoRⅠ和 XhoⅠ酶切位点,以pMD18 T/Em18原核表达质粒为模板,PCR扩增Em18基因片断,经酶切,克隆入原核表达载体 pET 41a(+),构建原核表达质粒 pET41a Em18;转化大肠埃希菌BL21(DE3),酶切、PCR及测序鉴定其插入序列的正确性。经 IPTG诱导表达 rEm18 GST重组蛋白和GST重组蛋白,用谷光甘肽 Sepharose 4B亲合层析柱分别进行纯化,通过 SDS PAGE和Western blot试验分析鉴定。 结果 测序表明构建的 pET41a Em18 原核表达质粒均为正确连接,插入 Em18 基因片断为486 bp。SDS PAGE检测表明Em18基因以 rEm18 GST重组蛋白的方式得到成功表达,在相对分子质量单位 50ku处有表达条带;Western blot分析显示,rEm18 GST重组蛋白能被泡型棘球蚴病人阳性血清识别,具有良好的抗原性。 结论 成功构建了 pET41a Em18原核表达质粒,获得的 rEm18 GST重组蛋白具有生物活性和抗原性,有望应用于泡型包虫病诊断试剂的研制。
- 王俨林仁勇丁剑冰卢晓梅张静萍王星梁晓慧张亚楼张琰温浩
- 关键词：泡球蚴原核表达
- 3种截短的泡球蚴Em18基因原核表达质粒的构建、表达及鉴定被引量：6
- 2006年
- 目的构建3种截短的泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的3种重组蛋白,并对其进行初步鉴定。方法DNAman软件设计引物,PCR法扩增并构建3种截短的pET41a-Em18.1、Em18.2和Em18.3原核表达质粒,测序鉴定插入序列正确性;IPTG诱导、表达和纯化rEm18.1-GST、rEm18.2-GST和rEm18.3-GST重组蛋白,SDS-PAGE电泳及Western blot进行初步鉴定。结果成功构建了3种截短的pET41a-Em18.1、Em18.2和Em18.3重组表达质粒;SDS-PAGE检测表明rEm18.1-GST、rEm18.2-GST、rEm18.3-GST重组蛋白得到成功表达,在分子质量单位为41、45.5和45.5ku处有表达条带;Western blot显示3种重组蛋白均能被AE病人血清识别。结论成功构建了截短的pET41a-Em18.1、pET41a-Em18.2和pET41a-Em18.3原核表达质粒,表达的3种重组蛋白均具有良好的抗原性,为Em18抗原表位分析奠定了基础。
- 张春桃林仁勇王俊芳王星王俨卢晓梅张静萍张琰张彤温浩
- 关键词：泡球蚴免疫检测
- 儿童中输血传播病毒(TTV)感染的检测及分析被引量：1
- 2005年
- 目的了解输血传播病毒(TTV)在新疆儿童中的感染情况。方法采用套式PCR方法对160例体检儿童血清进行TTV-DNA的检测。结果160例体检儿童中共检出22例TTV-DNA阳性血清,检出率为13.7%,TTV-DNA阳性率与民族、转氨酶数值无统计学差异(P>0.05)。结论新疆儿童中存在TTV的感染。
- 雷新莉马秀敏丁剑冰王俨阿曼古丽.牙生王晓岚
- 关键词：输血传播病毒儿童TTV-DNAPCR方法阳性血清
- 健康和乙型肝炎病毒携带儿童中输血传播病毒的感染状况被引量：1
- 2005年
- 目的探讨输血传播病毒(TTV)在新疆体检健康和HBV携带儿童中的感染情况,评价TTV的致病性。方法采用套式PCR方法,对230例体检儿童(HBsAg阴性儿童160例,HBV携带儿童70例)血清进行TTV-DNA检测。结果体检儿童230例中共检出40例TTV-DNA阳性,检出率为17.4%.其中HBV阴性健康儿童TTV-DNA阳性22例(13.7%),HBV携带儿童TTV-DNA阳性18例(25.7%),两组比较有显著差异(P<0.05)。结论新疆儿童中存在TTV感染,HBV携带儿童中TTV感染率较高。
- 雷新莉丁剑冰王俨阿曼古丽.牙生王晓岚
- 关键词：儿童输血传播病毒聚合酶链式反应
- EM18-GST原核表达载体的构建及空间结构的生物信息学分析被引量：4
- 2013年
- 目的构建GST-EM18原核表达质粒,优化EM18-GST重组蛋白诱导表达条件,通过生物信息学预测EM18蛋白的空间结构。方法以pMD18-T/Em18为模板,扩增EM18基因的CDS区,构建pGEX-3X-EM18,设计不同诱导表达条件表达EM18-GST蛋白。通过各种在线网站对EM18蛋白空间结构进行生物信息学预测。结果成功构建GST-EM18原核表达质粒,以1mmol/LIPTG于37℃诱导4h,蛋白表达较好;生物信息学预测EM18蛋白N端为无规卷曲,之后紧连两个α螺旋,C末端为无规卷曲和较短的片层结构。结论成功构建了GST-EM18原核表达质粒,表达的EM18蛋白含有无规则卷曲,可能是抗原表位所在位置。
- 周晓涛周文涛杨晨晨张蓓刘献飞王俨张传山吕国栋林仁勇
- 关键词：生物信息学预测
- 截短的泡球蚴Em18基因原核表达质粒的构建、表达及鉴定被引量：5
- 2006年
- 目的:构建截短的泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的重组蛋白,并对其进行初步鉴定。方法:DNAman软件设计引物,PCR法扩增并构建截短的pET41a-Em18．1原核表达质粒,测序鉴定插入序列正确性。异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导、表达和纯化rEm18．1-GST重组蛋白,采用SDS-PAGE 电泳及Western免疫印迹法对其进行初步鉴定。结果:成功构建出截短的pET41a-Em18．1,SDS-PAGE检测表明rEm18．1-GST重组蛋白得到成功表达,在相对分子量为41 kDa处有表达条带。Western blot结果显示 rEm18．1-GST重组蛋白能被AE病人阳性血清识别。结论:截短的pET41a-Em18．1原核表达质粒表达的 rEm18．1-GST重组蛋白具有良好的抗原性,为Em18抗原表位的分析奠定基础。
- 张春桃林仁勇王俊芳王星王俨卢晓梅张静萍张琰张彤温浩
- 关键词：泡球蚴重组蛋白
- 乌鲁木齐市230名体检儿童中输血传播病毒感染的检测被引量：1
- 2005年
- 雷新莉马秀敏王俨阿曼古丽.牙生王晓岚
- 关键词：身体检查儿童输血传播病毒病毒感染
- 两种克隆方法在3种截短的泡球蚴Em18原核表达载体构建中的比较
- 2006年
- 目的比较3种截短的泡球蚴Em18基因聚合酶链反应(PCR)扩增产物经TA克隆和直接酶切2种方法,在原核表达质粒构建中的运用。方法PCR扩增带有EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的3种截短的泡球蚴Em18基因,经2种方法构建3种截短的Em18原核表达质粒：①PCR扩增产物与T载体连接构建T-Em18,重组质粒经EcoRⅠ/XhoⅠ酶切,电泳分离、纯化目的片段,再与经过EcoRⅠ/XhoⅠ酶切的原核表达载体pET41a(+)连接；②PCR扩增产物经EcoRⅠ和XhoⅠ酶切,电泳、纯化,直接与经过相同限制性内切酶酶切的pET41a(+)连接。结果先经TA克隆,再经酶切构建3种截短的泡球蚴Em18原核表达载体获得成功。而采用直接酶切PCR扩增产物的构建方法未获得成功。结论TA克隆可用于对直接酶切效果不好的PCR扩增片段与表达载体的连接构建,方法简便高效,可提高带有限制性酶切位点的PCR扩增片段克隆人原核表达载体的效率。
- 张春桃王俊芳林仁勇张彤王星卢晓梅王俨张琰温浩
- 关键词：克隆分子DNA质粒
- 细粒棘球绦虫Eg95抗原基因疫苗体外瞬时表达及对小鼠诱导的免疫应答被引量：38
- 2004年
- 目的 检测细粒棘球绦虫Eg95抗原基因疫苗 (pcDNA3 Eg95 )体外瞬时表达 ,探讨其诱导小鼠的体液和细胞免疫效果。 方法 pcDNA3 Eg95经脂质体转染HeLa细胞瞬时表达。逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测Eg95抗原信使RNA (mRNA)在HeLa细胞中的表达 ,酶联免疫吸附测定 (ELISA)和蛋白质印迹法 (Westernblot ting)检测Eg95蛋白的瞬时表达情况。pcDNA3 Eg95基因疫苗肌肉注射免疫BALB/c小鼠 ,ELISA检测IgG和IgG2a水平 ,四甲基偶氮唑盐试验 (MTT法 )检测免疫小鼠T淋巴细胞增殖反应。 结果 RT PCR检测结果显示 ,pcD NA3 Eg95瞬时表达组有Eg95抗原基因mRNA表达 ,ELISA和Westernblotting检测结果表明 ,可在HeLa细胞中特异性表达Eg95蛋白。用 pcDNA3 Eg95基因疫苗免疫BALB/c小鼠 ,第 3周出现特异性IgG免疫应答 ,持续升高至第 10周 ,显著高于对照组。从第 2周开始 ,小鼠血清IgG2a应答即为阳性 ,且长时间 (至第 10周 )维持较高水平 ,与 pcD NA3空质粒组比较 ,其差异具有非常显著性意义 (P <0 0 1)。用原核表达的Eg95重组蛋白刺激免疫小鼠脾细胞 ,有明显的T细胞增殖反应。pcDNA3 Eg95基因疫苗免疫组刺激指数明显高于pcDNA3空质粒组 (P <0 0 1)。结论 pcDNA3 Eg95基因疫苗可诱发小鼠产生特异的体液免疫和细?
- 林仁勇丁剑冰卢晓梅王笑峰阿孜古丽魏晓丽王俨温浩
- 关键词：PCDNA3体外基因疫苗细粒棘球绦虫白刺RT-PCR检测
