李勤操
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 类泛素家族SUMO-1和UBC9的克隆、融合表达及纯化被引量：2
- 2008年
- 目的:克隆类泛素化家族SUMO-1和UBC9基因,表达并纯化二者与谷胱甘肽S-转移酶(GST)的融合蛋白。方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增SUMO-1和UBC9的编码序列,分别将其以正确相位与pGEX-KG载体中的GST编码序列融合,得到重组质粒pGST-SUMO-1和pGST-UBC9,分别转化大肠杆菌DH5α,表达融合蛋白GST-SUMO-1和GST-UBC9;用谷胱甘肽-Sepharose4B亲和纯化融合蛋白;用Western印迹检测融合蛋白的表达及纯化。结果:分别构建了SUMO-1和UBC9的融合表达载体;Western印迹检测表明,GST-SUMO-1和GST-UBC9融合蛋白获得表达;纯化得到了融合蛋白。结论:克隆、表达并纯化了SUMO-1和UBC9与GST的融合蛋白。
- 韦玮丁丽华张浩杨智洪崔家骏周岩李勤操毛建平叶棋浓
- 关键词：SUMO-1UBC9克隆融合蛋白
- 新型雌激素受体调节因子GA5的功能研究
- 雌激素受体(ER)是核受体超家族成员之一，它包括ERα和ERβ两种亚型。ER在乳腺癌的发生、发展中发挥重要作用，目前认为ER是乳腺癌内分泌治疗的靶标和预后的指标之一。当前，乳腺癌内分泌的治疗主要是通过降低ER转录活性而实...
- 李勤操
- 关键词：雌激素受体乳腺癌转录活性蛋白因子
- 文献传递
- 雌激素受体α真核表达载体的构建及其转录活性被引量：1
- 2008年
- 目的:构建雌激素受体α(ERα)高效真核表达载体,并检测其转录活性。方法:用常规PCR方法特异扩增带有Flag标签的人ERα全长编码序列,经双酶切后将其克隆到真核表达载体pIRESpuro2中,构建重组质粒pIRESpuro2-Flag-ERα;用Westernblot鉴定该重组质粒介导的Flag-ERα在人胚肾细胞株293T中的表达情况;用含雌激素应答元件的报告基因系统检测ERα的转录活性。结果:构建了pIRESpuro2-Flag-ERα重组质粒,该质粒介导的融合蛋白在293T细胞中得到表达,并可以激活含雌激素应答元件的报告基因的活性。结论:ERα高效真核表达载体的构建为进一步研究ERα在乳腺癌中的作用奠定了基础。
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- 关键词：雌激素受体Α真核表达载体转录活性
- 结缔组织生长因子小干扰RNA的构建及其干扰效果检测被引量：1
- 2008年
- 目的:构建结缔组织生长因子(CTGF)基因的小干扰RNA(siRNA),并检测其对CTGF基因表达的干扰效果。方法:根据CTGF基因序列,设计2条合理的CTGF-siRNA,并将其克隆到siRNA载体pSliencer2.1-U6 neo中,转化大肠杆菌DH5α,挑取阳性菌落进行酶切和测序鉴定;将构建成功的CTGF-siRNA重组质粒与带FLAG标签的CTGF表达载体共同转染人胚肾293T细胞,Western印迹检测siRNA的干扰效果。结果:构建了2个CTGF-siRNA重组质粒,2条siRNA都有干扰作用,其中一条的干扰效果可达75%以上。结论:构建的CTGF-siRNA可为进一步研究CTGF的功能提供参考。
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- 关键词：结缔组织生长因子小干扰RNA
- 雌激素受体β真核表达载体的构建及其转录活性
- 2008年
- 目的:构建雌激素受体(ER)β的哺乳动物细胞表达载体,并检测其转录活性。方法:利用PCR扩增带有Flag标签的人类ERβ全长编码序列,将扩增片段克隆到哺乳动物细胞表达载体pIRESpuro2中,得到重组质粒pIRESpuro2-Flag-ERβ;用Western blot鉴定Flag-ERβ重组蛋白在人胚肾293T细胞中的表达;用含雌激素应答元件(ERE)的报告基因系统检测Flag-ERβ的转录活性。结果:构建了pIRESpuro2-Flag-ERβ重组质粒,其介导的融合蛋白在293T细胞中得到表达,并可以激活含ERE的报告基因的表达。结论:ERβ高效真核表达载体的构建,为进一步研究ERβ在乳腺癌等疾病中的功能奠定了基础。
- 李勤操何宝祥杨智洪丁丽华李杰萍张浩袁斌叶棋浓
- 关键词：雌激素受体Β转录活性真核表达载体
- 利用载体介导小干扰RNA诱导RSRC1基因沉默
- 2009年
- 目的:设计并构建人RSRC1基因小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体,并观察其沉默效果。方法:以人RSRC1基因的cDNA序列为靶标,设计含有小发卡结构的2条寡核苷酸序列,并将其克隆到siRNA表达载体pSliencer2.1-U6neo上,转化大肠杆菌DH5α菌株,抽提质粒,测序正确后将重组质粒转染人胚肾293T细胞,通过Western blot和荧光分析检测其抑制效果。结果:重组体测序成功后,Western blot分析证明构建的siRNA能有效抑制外源性及内源性RSRC1表达;将siRNA重组质粒和带GFP标签的RSRC1共转染293T细胞,荧光显微镜下GFP的亮度明显减弱。结论:获得了2条人RSRC1siRNA真核表达载体,均能有效地抑制RSRC1基因表达。
- 仇玮祎李勤操杨智洪丁丽华叶棋浓
- 关键词：小干扰RNA
- 安氟醚、速眠新Ⅱ麻醉对山羊肝肾功能的影响被引量：5
- 2008年
- 本实验研究的主要目的是探讨安氟醚麻醉剂、速眠新Ⅱ麻醉剂对本地山羊肝、肾功能的影响。以4只广西都安黑山羊(Carpra hircus)为实验动物,以两周时间为间隔期,分别实施安氟醚吸入麻醉和速眠新肌肉注射麻醉。分别于麻醉前、麻醉后30、60、90、120 min以及麻醉苏醒后30 min采集血样,分离血清,并利用MS500e半自动生化分析仪测定血清总蛋白(TP)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、尿素氮(BUN)和肌酐(CRE)的含量。结果表明:(1)两种麻醉方法使山羊的ALT、BUN值都呈现上升趋势,但对AST、DBIL和CRE均无明显的影响;(2)仅速眠新麻醉使TP上升;(3)仅安氟醚麻醉使TBIL上升。结论:(1)两种麻醉方法对山羊肝脏和肾脏功能都有不同程度的损害;(2)安氟醚吸入麻醉对肝功能的影响大于速眠新肌肉内麻醉,但是后者对肾功能的影响大于前者。
- 杨继元李勤操韦凤玲陈志才莫模双陈晴郑喜邦
- 关键词：麻醉安氟醚肝功能肾功能山羊
