曹辉
- 作品数：11 被引量：16H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市卫生局医学科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 不同转移潜能乳腺癌细胞中EGFR的表达及意义
- 2010年
- 目的研究表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)在不同转移潜能乳腺癌细胞中的表达,并探讨其在乳腺癌侵袭转移过程中的作用。方法利用人工基质膜侵袭实验获得高、低转移潜能乳腺癌细胞亚系,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测两系细胞生长曲线和倍增时间,流式细胞仪检测两系细胞周期,transwell侵袭小室模型比较两系的迁移能力。应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western Blot)检测EGFR在两系细胞中的表达。结果利用transwell小室成功筛选出高、低转移潜能乳腺癌细胞亚系;它们的体外生长速度、倍增时间、细胞周期和侵袭力具有明显差异;RT-PCR和Western Blot均显示在高转移潜能乳腺癌细胞中EGFR在基因和蛋白水平的表达均显著高于低转移乳腺癌细胞。结论 EGFR的过表达与乳腺癌细胞侵袭能力显著性相关,EGFR在乳腺癌侵袭过程中发挥了重要的作用。
- 张俊李少林郭启帅曹辉张涛汤为学
- 关键词：乳腺癌表皮生长因子受体TRANSWELL
- 抗人肺癌单链抗体噬菌体库的构建及特异性单链抗体的鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的构建人源噬菌体抗体库,并从中筛选出抗肺癌人源单链抗体。方法提取肺癌患者癌旁淋巴结组织,通过RT-PCR扩增出重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),再经剪切-重叠-延伸PCR(SOE-PCR)将VH和VL连接得到单链抗体(ScFv)。将双酶切后的ScFv基因片段克隆入噬菌体表达载体pCANTAB5E,得到初级噬菌体抗体库。以肺腺癌细胞株A549为抗原对抗体库进行4轮筛选富集,鉴定抗体库性能。将得到的阳性克隆用IPTG诱导表达并进行检测。结果成功构建噬菌体单链抗体库。经筛选富集,噬菌体收获率得到增加,第4轮是第1轮的115倍。随机选取10个克隆,通过ELISA法检测到其中7个与A549细胞呈阳性反应,阳性率为70%。SDS-PAGE及ELISA检测证实得到人源抗肺癌单链抗体。结论成功构建人源单链抗体噬菌体库,从中获得具有较高特异性的抗人肺癌单链抗体。
- 罗弋庞华李少林曹辉李淑杰王树斌樊春波
- 关键词：单链抗体肺腺癌
- 人源噬菌体抗体对Peroxiredoxin Ⅰ高表达肺腺癌细胞增殖的抑制作用被引量：5
- 2009年
- 背景与目的:研究表明过氧化物酶Peroxiredoxin Ⅰ(Prx Ⅰ)与癌症的发展有密切关系。我们已通过噬菌体展示技术构建了肺腺癌相关的人源单链抗体库。本研究对该库进行筛选,得到抗Prx Ⅰ肺腺癌单链抗体,并检测其对肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用。方法:PCR法检测TG1中scFv基因插入率,1%琼脂糖凝胶电泳鉴定Sfi Ⅰ和Not Ⅰ双酶切质粒的结果,以A549细胞及在肺癌中高表达的抗氧化蛋白Prx Ⅰ为靶抗原分别对抗体库进行3轮筛选富集。将阳性克隆用IPTG诱导表达并进行检测。放射性核素计数法测定细胞单链抗体内摄水平,MTT法及流式细胞术检测单链抗体对A549细胞的增殖抑制和凋亡情况,免疫印迹法检测抗体作用A549细胞后Prx Ⅰ的表达水平。结果:scFv基因插入率为77%,双酶切鉴定检测到目的条带。在亲和筛选过程中,肺腺癌单链抗体得到富集,收获率逐轮提高,第6轮为第1轮的180倍。ELISA法检测到在随机选取的10个克隆中,有6个与A549细胞呈阳性反应,阳性率60%。SDS-PAGE及ELISA检测证实得到人源抗PrxI肺腺癌单链抗体。被A549细胞内摄的单链抗体介导了细胞的凋亡以及细胞内Prx Ⅰ蛋白表达水平的下降。结论:从噬菌体抗体库中筛选获得具有较高特异性的抗Prx Ⅰ肺腺癌单链抗体。单链抗体与肺腺癌细胞有特异性亲和力,并能有效抑制其增殖。
- 罗弋庞华李淑杰曹辉李少林樊春波
- 关键词：肺腺癌噬菌体抗体库单链抗体PEROXIREDOXINI增殖抑制
- 皮质肌动蛋白在不同转移潜能乳腺癌细胞中的表达及意义被引量：1
- 2010年
- 目的筛选不同转移潜能的乳腺癌细胞亚系,并探讨皮质肌动蛋白(cortactin)在乳腺癌细胞增殖和侵袭过程中的作用。方法经过连续人工基质膜侵袭实验后获得高、低转移潜能的乳腺癌细胞亚系,通过透射电镜观察比较两系细胞的超微结构,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测两系细胞增殖能力,流式细胞仪检测两系细胞周期,Transwell侵袭小室模型比较两系的迁移能力。应用免疫细胞化学法、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹分析法检测cortactin蛋白在两系细胞中的表达。结果利用人工基质膜侵袭实验筛选出高、低转移潜能乳腺癌细胞亚系,并且两系细胞形态上无明显差异。MTT实验显示高转移潜能细胞体外生长速度显著快于低转移潜能细胞(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,高转移潜能细胞亚系与低转移潜能细胞亚系相比,G0/G1期细胞前者比后者少[(52.67±3.69)%vs(64.46±2.79)%],而S期细胞前者比后者多[(30.53±6.19)%vs(24.63±2.04)%]。高转移潜能细胞亚系增殖指数(PI)高于低转移细胞亚系[(47.32±3.69)%vs(35.53±2.80)%,P<0.05],侵袭能力显著强于低转移潜能细胞亚系[(61.46±7.08)vs(25.32±4.87)个/视野,P<0.05]。免疫组化、RT-PCR和蛋白质印迹分析均显示在高转移潜能细胞亚系中cortactin在基因和蛋白水平的表达均高于低转移潜能细胞亚系(P<0.05)。结论 Cortactin的过表达与乳腺癌的增殖和转移过程密切相关。
- 张俊曹辉郭启帅张涛汤为学李少林
- 关键词：乳腺肿瘤肿瘤转移细胞增殖
- 肝癌细胞系Hep3B中CD133^+细胞亚群的分离及其特性的研究
- 2011年
- 目的研究CD133在人肝癌细胞系Hep3B中的表达以及CD133^+细胞的体外增殖、自我更新及体内成瘤能力,初步探讨肝癌中CD133^+细胞亚群的干细胞特性。方法流式细胞仪检测未分选的Hep3B细胞中CD133^+细胞表达情况;免疫磁珠分选技术纯化CD133^+肿瘤细胞;MTT法检测CD133^+细胞体外增殖能力;无血清培养纯化的CD133^+肿瘤细胞,观察其生长分化情况及非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)接种实验观察其体内成瘤能力。结果流式细胞仪检测未分选的Hep3B细胞中有9.13%的细胞呈CD133^+表达;免疫磁珠富集的CD133^+肿瘤细胞在无血清培养基中悬浮生长,并可以形成肿瘤细胞球,且在1,3,5,7天的紫外吸光度(A)值均高于相同条件下未分选细胞及CD133^-细胞(P<0.05);CD133^+肿瘤细胞的体内成瘤能力明显高于CD133^-细胞及未分选细胞。结论肝癌细胞系Hep3B中CD133^+细胞亚群比其他细胞亚群具有较强的增殖,分化和成瘤能力,是具有肝癌干细胞特性的细胞亚群。
- 李小青曹辉龙浩李少林
- 关键词：肝癌细胞CD133免疫磁珠分选
- 抗CCR7单链抗体的筛选及初步鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的从噬菌体抗体库中筛选抗CCR7单链融合抗体,并对其生物学特性进行初步检测。方法PCR检测大肠杆菌中ScFv基因插入率;琼脂糖凝胶电泳鉴定SfiI和NotI双酶切质粒的结果;分别以乳腺癌细胞及CCR7多肽片段为靶抗原对抗体库进行4轮和3轮筛选富集。将阳性克隆转化E.coliHB2151进行可溶表达。抗体亲和层析纯化后,经Western blot鉴定,通过ELISA法检测可溶性ScFv抗体的免疫活性。免疫细胞化学和放射免疫显像鉴定scFv抗体与乳腺癌细胞结合的特异性。结果ScFv基因插入率为90%(18/20),双酶切鉴定检测到目的条带。经4轮细胞筛选,3轮抗原筛选抗CCR7抗原的噬菌体抗体得到了明显富集,在E.coliHB2151中实现可溶表达。Western blot结果显示获得抗体相对分子质量为34ku左右。免疫细胞化学检测与放射免疫显像均证实单链抗体与表达CCR7的乳腺癌细胞MDA-MB-435s特异性结合。结论成功从噬菌体抗体库中筛选获得具有较高特异性的抗CCR7单链抗体。抗体在体内体外均与肿瘤细胞表达特异抗原结合。
- 樊春波李少林彭志平罗弋曹辉王洁
- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体CCR7淋巴结转移抗体筛选
- 1.Survivin启动子在肝癌干细胞中的转录靶向性分析;2.TACE联合HIFU与单纯TACE治疗肝癌疗效META分析
- 原发性肝癌是恶性度高，预后差的恶性肿瘤，被称为“癌中之王”，随着美国及我国肝癌发病率的增加，肝癌已跃居世界癌症死因第四位。全球范围内，原发性肝癌占所有癌的5.4％，每年约有610，000人死于肝癌。由于其恶性度高、进展快...
- 曹辉
- 关键词：SURVIVIN启动子肝癌干细胞HIFU疗效萤光素酶报告基因
- 靶向CD133的RNA干扰对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制作用
- 2011年
- 目的利用RNA干扰技术下调SMMC-7721肝癌细胞中CD133的表达,观察其在肝癌细胞增殖和侵袭方面的作用。方法构建CD133特异性的siRNA真核表达载体,转染SMMC-7721肝癌细胞并筛选出稳定表达siRNA的转染克隆;应用RT-PCR和Western blot检测CD133 mRNA和蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡;MTT法和Transwell法检测细胞体外增殖和侵袭能力。结果成功构建表达质粒PGPH1/GFP/Neo-shGAPDH、PGPH1/GFP/Neo-shNC、PGPH1/GFP/Neo-CD133-1和PGPH1/GFP/Neo-CD133-2,并转染SMMC-7721肝癌细胞。筛选后得到稳定的细胞克隆。RT-PCR和Western blot检测显示转染PGPH1/GFP/Neo-CD133-1和PGPH1/GFP/Neo-CD133-2后CD133 mRNA和蛋白表达均受到显著抑制,mRNA抑制率分别为42.98%和63.16%;蛋白表达抑制率分别为49.46%和59.15%。与未转染组和PGPH1/GFP/Neo-shNC组相比,PGPH1/GFP/Neo-CD133-2组细胞凋亡比例明显增加(P<0.05);PCPH1/GFP/Neo-CD133-2组细胞的增殖和侵袭能力也受到显著抑制(P<0.05)。结论靶向CD133的RNA干扰能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞中的CD133表达,诱导细胞凋亡,抑制细胞的增殖和侵袭。
- 龙浩曹辉李小青李少林
- 关键词：RNA干扰凋亡
- 饮用咖啡与胰腺癌患病的Meta分析被引量：2
- 2012年
- 目的综合评价饮用咖啡因素与胰腺癌发生的相关性,进一步探讨胰腺癌的危险因素。方法检索1970.0101/2010.10.01国内外公开发表的有关人群饮用咖啡和胰腺癌发生的病例对照研究,制定纳入标准,采用RevMan4.2软件对研究资料进行Meta分析,定量综合评价饮用咖啡与胰腺癌的关系。结果共有15组病例-对照研究符合入选标准,累积胰腺癌病例共3335例和正常对照者共15064例。Meta分析显示,合并OR=1.08(95%CI:0.88～1.31),(P=0.48),差异无统计学意义;男性组结果显示,OR和95%CI为1.14(0.95～1.37),差距不具有统计学意义(P=0.15),女性组结果显示OR和95%CI为1.18(0.98-143),(P=0.09),由于P<0.1,故属于边缘性显著差异。结论女性胰腺癌患者中有饮用咖啡习惯与无饮用咖啡习惯的人相比,饮用咖啡的习惯可能会增加胰腺癌的发病风险。
- 刘娜娜曹辉罗治彬李少林
- 关键词：咖啡胰腺癌病例对照研究META分析
- 人源肺腺癌噬菌体抗体库的构建及筛选被引量：2
- 2009年
- 目的:构建人源噬菌体单链抗体ScFv基因文库,并从中筛选出抗肺癌抗体。方法:提取肺癌患者癌旁淋巴结组织,通过RT-PCR扩增出重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),再经剪切-重叠-延伸PCR(SOE-PCR)将VH和VL连接得到单链抗体ScFv。将双酶切后的ScFv基因片段克隆入噬菌体表达载体pCANTAB5E,得到初级噬菌体抗体库。以肺腺癌细胞株A549为抗原对抗体库进行"吸附-洗脱-扩增"筛选富集,共进行4轮筛选,鉴定抗体库性能。结果:成功构建噬菌体单链抗体库。在亲和筛选过程中,肺癌单链抗体得到富集,收获率逐轮提高,第4轮为第1轮的115倍。随机选取10个克隆,通过ELISA法检测到其中7个与肺癌细胞呈阳性反应,阳性率为70%。结论:通过噬菌体展示技术得到肺癌相关人源单链抗体,筛选后的单链抗体能与肺腺癌细胞A549特异性结合。
- 罗弋庞华李少林曹辉彭志平
- 关键词：噬菌体展示抗体库单链抗体肺腺癌
