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2025年1月9日星期四

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Apelin-13对血清剥夺诱导的人脐带间充质干细胞凋亡的影响: 2016年; 目的观察apelin-13对无血清培养诱导的人脐带间充质干细胞(h UC-MSCs)凋亡的影响。方法采用组织块贴壁培养法培养h UC-MSCs,随机分成无血清培养组(A组)和不同浓度apelin-13处理组,apelin-13处理组浓度分别为0.1 mmol/L(B1组)、0.5 mmol/L(B2组)、5 mmol/L(B3组)、10 mmol/L(B4组)。倒置显微镜观察细胞形态;流式细胞仪测定h UC-MSCs表面免疫标记;流式细胞术检测各组细胞凋亡率,MTT法检测0.5、5 mmol/L apelin-13对h UC-MSCs增殖活性影响。结果流式细胞仪鉴定结果表明,h UC-MSCs表达CD44、CD90、CD105、CD73、HLA-ABC,不表达CD34、CD45、HLA-DR。与A组比较,B1、B2、B3、B4组均抑制无血清培养诱导的h UW-MSCs早期凋亡,凋亡率比较差异均有统计学意义(P<0.05),B3、B4组与B1、B2组间差异有统计学意义(P<0.05),B3组与B4组、B1组与B2组差异无统计学意义(P>0.05)。A组与B2、B3组比较,细胞在490 nm OD值差异无统计学意义(P>0.05)。结论一定浓度内的apelin-13能抑制无血清培养诱导的h UC-MSCs早期凋亡,且这种抗凋亡作用可能不是通过促增殖作用引起的。; 徐小红高连如沈童童朱智明; 关键词：人脐带间充质干细胞 APELIN-13 凋亡

慢病毒载体介导apelin基因转染人脐带间充质干细胞的实验研究被引量：2: 2013年; 目的构建带有荧光标记基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和apelin基因的重组质粒pUbi-apelinFLAG-pSV40-EGFP并进行慢病毒包装,探讨其转染人脐带间充质干细胞的最佳感染复数(MOI)值及目的基因表达情况。方法化学合成目的基因片段并扩增。采用In-Fusion技术将酶切后的目的基因片段与线性质粒载体连接,转化入感受态DH5α细胞中后筛选阳性克隆并进行测序。重组质粒慢病毒载体转染293T细胞,包装慢病毒并测定滴度。将重组质粒慢病毒按不同MOI值转染人脐带间充质干细胞,根据转染效率得到最佳MOI值,并采用Real-timePCR及Western blot方法检测目的基因表达情况。结果通过PCR扩增获得酶切位点碱基修饰后的大小约284 bp的目的基因片段,与慢病毒质粒载体连接后形成pUbi-apelin-FLAG-pSV40-EGFP重组质粒,测序结果与预期完全符合,并成功包装慢病毒颗粒。最佳MOI值为20,转染效率为(90.32±3.61)%。慢病毒载体能高效转染人脐带间充质干细胞且2周内持续稳定上调目的基因mRNA及蛋白的表达。结论重组质粒慢病毒载体pUbi-apelin-FLAGpSV40-EGFP可有效转染人脐带间充质干细胞,并可持续高表达apelin基因。; 王力张宁坤徐小红郑楠高连如朱智明; 关键词：间质干细胞慢病毒属转染 APELIN

Apelin分子在人脐带间充质干细胞定向心肌分化中的调控作用研究: 第一部分携带siRNA-apelin、apelin基因的慢病毒载体转染人脐带间充质干细胞　　目的:体外分离培养人脐带间充质干细胞(human umbilical cord-MSCs,hUC-MSCs),并制备携带 siR...; 徐小红; 关键词：脐带间充质干细胞定向分化; 文献传递

携带标记基因的慢病毒载体转染人脐带华通胶间充质干细胞的实验研究被引量：5: 2013年; 目的探讨含有增强型绿色荧光蛋白标记基因的慢病毒（Lentivirus—EGFP）体外转染人脐带华通胶间充质干细胞（HUWMSCs）的最佳方案及其对细胞增殖活性的影响。方法设计A、B、C、D共4种转染方案，分别以1、10、100的感染复数（MOI）转染体外培养的HUWMSCs，荧光显微镜及流式细胞仪检测各组荧光表达强度及转染效率，MTT法检测细胞增殖倍数。结果转染4d后所有实验组转染率在10．6％～87．3％，并与MOI值存在量效关系，聚凝胺（5mg／L）可显著增加病毒转染效率（P〈O．05）。MTT实验结果显示，与对照组比较，不同转染方案细胞增殖存在显著差异（P〈0．001）。A方案MOI=10组及B方案MOI=10组细胞增殖情况较其他组好。结论B方案MOI=10实验组为最佳转染方案。Lentivirus—EGFP能高效转染HUWMSCs且在2周内稳定表达转染基因，是一种安全、有效的基因转移载体。; 王力徐小红张宁坤高连如朱智明; 关键词：间质干细胞流式细胞术慢病毒属基因疗法转染

诱导间充质干细胞向心肌细胞分化方法及分化机制进展: 2013年; 干细胞在体外特定条件下,可特异的向某种组织类型细胞进行分化,其中包括向心肌细胞分化。目前,胚胎干细胞(em-bryonic stem cells,ESCs)虽然具有这方面的功能,且其分化效率较一般成体细胞高,但是由于伦理问题限制了其在临床的应用。而间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)不仅取材方便,且没有伦理争议,是最具希望的再生医学种子细胞,引起了人们的极大关注。目前对于体外诱导不同来源的间充质干细胞向心肌细胞分化方法的实验研究很多,主要包括化学试剂诱导和模拟体内微环境诱导两大类。该文就MSCs向心肌分化的体外诱导方法和分化机制的研究进展作一综述。; 徐小红朱智明高连如; 关键词：间充质干细胞心肌细胞分化

5-氮胞苷联合碱性成纤维生长因子诱导人胚胎干细胞定向心肌样细胞分化的实验研究被引量：1: 2017年; 目的探讨5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)联合碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)体外诱导人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,h ESCs)定向分化为心肌样细胞的可行性。方法采用小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEF)作为饲养层细胞体外培养h ESCs,经悬浮培养形成拟胚体(embryoid bodies,EB),贴壁后分为无诱导剂组(对照组)、5-aza诱导组、b FGF诱导组、5-aza+b FGF联合诱导组4组诱导培养。诱导时间为2周。倒置相差显微镜下连续动态观察细胞形态学变化,并计算各组出现自发搏动的EB,以定量聚合酶链反应检测心肌细胞特异性基因NKX2.5、GATA4、α-actin,免疫荧光法检测心肌特异性肌钙蛋白T(cardiac troponin T,c Tn T)。结果 EB克隆贴壁诱导3~4 d后部分细胞出现自发性节律性搏动,以5-aza+b FGF联合诱导组为著。14 d后定量聚合酶链反应检测示5-aza+b FGF联合诱导组NKX2.5、GATA4、α-actin表达显著高于其他3组(P<0.05)。免疫荧光法示5-aza+b FGF联合诱导组c Tn T的表达最为明显(P<0.05)。结论 h ESCs在体外经5-aza+b FGF联合诱导后可定向心肌细胞分化,该诱导方案为心肌再生与组织工程领域的研究奠定了基础。; 王力方志荣高连如张宁坤徐小红朱智明; 关键词：心肌细胞细胞分化人胚胎干细胞 5-氮胞苷碱性成纤维生长因子

Apelin-13对5-Aza诱导脐带间充质干细胞向心肌细胞分化的影响被引量：7: 2013年; 目的探讨apelin-13蛋白在体外对5-氮胞苷(5-Aza)诱导人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)向心肌细胞分化的影响。方法采用组织块贴壁法培养hUC-MSCs,胰酶消化传代;取P2代细胞置于不同分化条件的培养液中分化培养14d,实验分为A、B、C、D组(apelin-13浓度分别为0、1×10-6、2×10-6和10×10-6mol/L),各组培养基中5-Aza浓度均为10×10-6mol/L。采用流式细胞仪检测hUC-MSCs表面免疫标记,MTT法检测细胞在570nm处的吸光度(A)值,RTPCR检测肌钙蛋白T(cTnT)、GATA-4 mRNA表达水平,免疫组织化学染色法检测心肌细胞表面标志物cTnT的表达。结果流式细胞仪鉴定结果表明,hUC-MSCs表达CD44、CD90、CD105、CD73、经典人类白细胞抗原Ⅰ类抗原(HLAABC),不表达CD34、CD45、经典人类白细胞抗原Ⅱ类抗原(HLA-DR)。MTT检测显示,0、10×10-6mol/L apelin-13处理的hUC-MSCs在570nm处的A值分别为0.841±0.290、0.875±0.325,差异无统计学意义(P>0.05)。B、C、D组cTnT mRNA表达水平分别是A组的2.09±1.35、5.24±1.30、1.17±0.63倍,B、C、D组GATA-4 mRNA表达水平分别是A组的2.68±1.18、4.82±0.14、2.14±0.27倍;C组与B、D组比较,cTnT、GATA-4 mRNA表达差异具有统计学意义(P<0.05)。免疫组化染色显示,诱导14d后C组细胞cTnT蛋白表达呈阳性。结论 10×10-6mol/L apelin-13对hUC-MSCs无毒性作用,一定浓度的apelin-13蛋白可增强5-Aza诱导hUC-MSCs向心肌细胞分化的效率,浓度为2×10-6mol/L时增强作用最明显。; 徐小红王力张宁坤郑楠高连如朱智明; 关键词：脐带间质干细胞细胞分化 APELIN-13 5-氮胞苷

外源性apelin-13对心肌梗死大鼠心肌干细胞的动员作用观察: 2013年; 目的探讨给予外源性apelin-13对急性心肌梗死(AMI)后大鼠心脏的保护作用及其可能机制。方法 SD大鼠随机分为3组,即假手术组(n=6)、对照组(AMI+生理盐水,n=12)和实验组(AMI+apelin-13,n=12),其中对照组死亡4只,实验组死亡5只,其余对照组和实验组大鼠于冠脉结扎术后5min内分别向心肌内注射生理盐水20μl或apelin-130.2μg/20μl,假手术组大鼠仅开胸,未进行冠脉结扎也未进行药物注射。采用超声心动图和心肌梗死面积测定来评价心脏功能的变化。采用免疫组化染色法检测心肌组织C-kit、Flk1、Sca1蛋白阳性表达情况,Western blotting和Real TimePCR法定量检测前述蛋白和mRNA的表达情况。结果超声心动图及心肌梗死面积测定结果显示实验组大鼠心功能较对照组有所改善(左室射血分数:实验组为68.43%±2.06%,对照组为46.40%±15.18%;左室短轴缩短率:实验组为33.70%±1.55%,对照组为20.73%±8.14%;梗死心肌面积百分比:实验组为16.10%±3.08%,对照组为33.83%±5.64%),差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫组化染色显示,假手术组心肌组织C-kit、Flk1、Sca1表达呈阴性,实验组和对照组染色呈阳性或强阳性。Western blotting和RT-PCR方法检测结果显示,实验组C-kit、Flk1、Sca1蛋白及mRNA表达较对照组明显增加(蛋白水平:C-kit 0.48±0.17 vs 1.05±0.08,Flk1 0.40±0.26 vs 0.88±0.10,Sca1 0.39±0.08 vs 0.70±0.08,P<0.05;mRNA水平:C-kit 2.89±1.89 vs 18.77±14.19,Flk1 2.14±0.95 vs 4.59±0.92,Sca1 4.32±2.44 vs 29.39±11.90,P<0.05),而假手术组C-kit、Flk1、Sca1蛋白无明显表达。结论外源性apelin-13蛋白对心肌梗死大鼠具有保护作用,其机制可能与刺激内源心肌干细胞的分裂增殖有关。; 郑楠张宁坤高连如徐小红王力朱智明; 关键词：APELIN 心肌干细胞

血管生成素1在高同型半胱氨酸血症大鼠血浆中高表达及对内皮细胞的保护作用被引量：3: 2022年; 目的阐明高同型半胱氨酸(Hcy)血症大鼠血浆蛋白表达谱改变及高表达的血管生成素1(Ang 1)对内皮细胞的保护作用。方法建立高Hcy血症动物模型,采用Label-free蛋白质谱分析血浆蛋白含量差异,细胞划痕和CCK-8实验检测Hcy及Ang 1对内皮细胞迁移和增殖的影响。结果蛋白质谱结果显示高Hcy血症大鼠血浆中有5个蛋白上调、17个蛋白下调,其中Ang 1上调。大鼠肠系膜上动脉内皮细胞实验结果显示,采用30、50μmol/L Hcy预处理内皮细胞24 h后,细胞的迁移和增殖都被抑制,而Ang 1(600 ng/ml)阻断了30μmol/L Hcy对内皮细胞迁移和增殖的抑制作用,但对50μmol/L Hcy引起的内皮细胞迁移和增殖抑制作用无阻断效应。结论高Hcy血症可影响血浆蛋白表达谱,血浆中升高的Ang 1可代偿一定浓度范围Hcy对血管内皮细胞的迁移和增殖的抑制作用。; 沈童童周利民董双双王欣欣徐小红刘玉郑凡马劭博沈兵; 关键词：同型半胱氨酸血管生成素1 血管内皮细胞

Apelin与肺动脉高压被引量：2: 2014年; 肺动脉高压(PAH)是一种进行性发展的疾病,尽管近年来药物治疗取得了一些进展,但是仍然不能治愈PAH。PAH患者血浆apelin水平较正常人减低,且在肺血管内皮细胞上的表达减少。不仅如此,apelin在调节血管内皮细胞和平滑肌细胞增生与凋亡以及血管重构方面起着一定的作用;在循环系统,apelin可以增加一氧化氮合酶的表达、抑制血管紧张素Ⅱ收缩血管、增加心肌收缩力和心肌保护。Apelin及其孤儿G蛋白偶联受体存在于肺组织,且受缺氧、骨形态蛋白2型受体和血管紧张素Ⅱ调节。因此,apelin有望成为PAH的新型标志物,为PAH提供新的治疗手段。; 徐小红朱智明; 关键词：APELIN 肺动脉高压

徐小红

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