张恩毅
- 作品数：36 被引量：108H指数：6
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- 相关领域：医药卫生生物学经济管理语言文字更多>>
- 人胱抑素C参考物质制备方法的建立
- 2018年
- [目的]建立重组人胱抑素C(cystatin C)表达体系,获得可溶、稳定、高纯度的胱抑素C。[方法]密码子优化并人工合成人胱抑素C编码序列,与麦芽糖结合蛋白(MBP)分别克隆至PRSF-Duet载体以构建重组人p MBP-CYSC PRSF表达质粒。使用大肠杆菌E. coli BL21(DE3) p Lys S对其进行诱导表达,SDS-PAGE鉴定蛋白纯度和分子量,全自动生化仪测定纯化蛋白浓度及稳定性。[结果]成功构建重组人p MBP-CYSC PRSF表达质粒并诱导表达,胱抑素C蛋白浓度可达500 mg/L,纯度可达90%,在4℃和-20℃储存条件下监测64 w,胱抑素C蛋浓度稳定,均在允许相对偏差5%以内。[结论]通过密码子优化,成功获得浓度为500 mg/L、纯度为90%、存储稳定性至少达到64 w的胱抑素C蛋白,可充分满足该产品诊断试剂制备的需求。
- 邹丽辉邹丽辉王萌张恩毅黄薇张恩毅肖飞
- 关键词：重组蛋白表达
- 高糖诱导人二倍体成纤维细胞衰老相关基因的表达被引量：5
- 2006年
- 利用RT-PCR分子生物学技术,研究了高浓度葡萄糖对人二倍体成纤维细胞衰老相关基因表达的影响。研究结果表明,高浓度葡萄糖诱导人二倍体成纤维细胞衰老可能与p16和p21基因高表达相关,而与p53基因表达关系不密切。
- 金军华张铁梅韩彩和张恩毅张延张宗玉童坦君
- 关键词：右旋糖己糖衰老相关基因高糖培养PDL
- OR2T3基因与动脉性肺动脉高压的关联性分析被引量：2
- 2016年
- 目的寻找动脉性肺动脉高压（PAH）的致病基因并验证OR2T3基因与PAH的关联性。方法对两个PAH家系中的4例患者和1名正常对照进行全外显子测序，利用生物信息学分析和组间比较，筛选出患者特有的变异，并对筛选出的变异使用Sanger测序法在30例特发性肺动脉高压患者、90例健康对照和30例慢性血栓栓塞性肺动脉高压患者中基因分型验证，进一步分析变异与PAH的相关性。结果全外显子组测序筛选到57个变异可能与PAH疾病相关。57个变异中OR2T3rs18748995变异在30例特发性肺动脉高压患者中存在6例AG杂合子，而在两家系其余健康人（AⅠ-1，AⅡ-3和BⅡ-1）及90例健康对照中未发现G等位基因携带者，差异有统计学意义（P〈0．05）；在30例慢性血栓栓塞性肺动脉高压患者中亦未发现该变异。结论OR2T3基因可能是PAH的致病基因，OR2T3rs148748995可能与PAH关联。
- 张建华许小毛邹丽辉张恩毅方保民金军华肖飞
- 关键词：高血压肺性外显子家系
- 一种高效制备人乳酸脱氢酶LDH_5参考物质的方法及应用
- 2017年
- [目的]研究高效、廉价制备人乳酸脱氢酶LDH5参考物质的方法。[方法]选取人乳酸脱氢酶基因(LDHA)CDS序列进行分析及优化,合成优化后的基因,克隆至表达载体pRSF-Duet中构建重组乳酸脱氢酶LDH5表达载体。使用大肠杆菌E.coli BL21(DE3)菌株对目的基因进行表达,异丙基硫代半乳糖苷酶(IPTG)诱导,镍离子亲和层析纯化,SDS-PAGE鉴定酶纯度,BCA法分析酶浓度,全自动生化仪分析酶活性、稳定性。[结果]经优化后的LDHA基因的大肠杆菌密码子适应指数为1;纯化蛋白达到电泳纯,比活性达19.01 U/mg,在4℃及25℃可稳定保存8 d。[结论]重组乳酸脱氢酶的表达效率为100 mg/L,酶活性、稳定性、纯度达到临床生化检测的参考物质的条件,可以作为血清乳酸脱氢酶检测的标准物质。
- 刘赪阳王玉梅黄薇王萌张恩毅郭健肖飞
- 关键词：乳酸脱氢酶基因重组密码子
- 老年人健康状况与步速的关系探讨被引量：7
- 2016年
- 目的 分析老年快步速个体的健康状况，为老年人功能维护与干预提供正性因素依据。 方法 采用横断面调查的数据，用标准问卷询问相关信息，内容包括人口学资料、自报疾病现患史、生活习惯、感官运动能力等信息。测量6 m步行速度，以25%步速上限值作为快步速老年组的标准，进一步分析比较快步速组老年人与低于此步速老年人的健康状态的关系和影响因素。 结果 确定了1.39 m/s作为老年人快步速状态的参考截点值。步速快的老年人在躯体运动功能、脑卒中患病率方面优于一般步速的老年人。Logistic回归分析结果显示，教育程度、健康自我评价、体能和生活态度与维持快步速水平有关。 结论 步速快反映了老年人较好的健康状况，通过步速与健康状态分析后的快步速截点值确定可为老年人健康状态综合评估提供简易、可行、有效的指标。
- 张铁梅于普林罗森林王怀庆刘幼硕董碧蓉杨云梅曾学军曾平庞婧韩怡文宫环张延张恩毅黎健
- 不同葡萄糖浓度对3T3-L1脂肪细胞诱导分化中解偶联蛋白2基因表达的影响
- 目的:观察体外培养条件下葡萄糖浓度对3T3-L1脂肪细胞诱导分化过程中UCP2mRNA表达水平的变化.
方法:体外培养3T3-L1脂肪细胞，在诱导3T3-L1脂肪细胞分化成熟的基础上，经不同葡萄糖浓度5.5，25...
- 张恩毅张铁梅张延金军华韩彩和韩怡文
- 关键词：葡萄糖浓度脂肪细胞分化过程肥胖症
- 文献传递
- 解偶联蛋白5在能量代谢中的研究进展
- 解偶联蛋白(UCPs)是存在于线粒体内膜上重要的转运蛋白,基于其功能,解偶联蛋白基因被视为肥胖病及2型糖尿病的重要候选基因。解偶联蛋白5(uncoupling protein 5,UCP5)是解偶联蛋白家族的新成员,与组...
- 张恩毅张铁梅
- 关键词：能量代谢
- 文献传递
- NO-sGC-cGMP信号通路在肺血管损伤修复中的作用机制研究
- 邹丽辉金军华张恩毅肖飞
- 一种高效制备人β2微球蛋白标准物质的方法和应用被引量：1
- 2018年
- 目的构建重组人β2微球蛋白表达体系,高效快速获取β2微球蛋白,为临床实验室检测参考物质的制备奠定基础。方法优化人β2微球蛋白序列,人工合成优化序列片段并与麦芽糖结合蛋白(MBP)分别克隆至pRSF-Duet载体以构建重组人β2微球蛋白表达质粒。使用大肠杆菌E.coli BL21(DE3)对重组质粒进行诱导表达,TEV蛋白酶切除MBP,全自动生化仪测定β2微球蛋白浓度。对重组蛋白在4℃和–20℃储存条件下的稳定性进行检测,对β2微球蛋白纯品与校准品的互通性进行分析。结果成功构建重组人β2微球蛋白表达质粒,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)成功诱导重组蛋白表达,MBP-β2微球蛋白(MBP-β2-MG)浓度可达100 mg/L,β2微球蛋白浓度可达185 mg/L。在4℃和–20℃储存条件下监测64周,β2微球蛋白稳定存在。β2微球蛋白纯品与RANDOX生化校准品互通性良好。结论通过密码子优化,成功构建了重组β2微球蛋白的高效表达系统,β2微球蛋白可溶性高,稳定性好,与国际通用校准品互通性好,可充分满足该产品诊断试剂制备的需求。
- 邹丽辉王萌黄薇张恩毅肖飞王玉梅
- 关键词：Β2微球蛋白重组蛋白质类
- 血管性血友病因子三个常见变异位点与肺血栓栓塞症的相关性被引量：4
- 2015年
- 目的 探讨血管性血友病因子（VWF）基因三个常见变异位点rs216321、rs216325和rs1800378与肺血栓栓塞症（PTE）的相关性.方法 选取2008年11月至2012年3月卫生部北京医院及北京朝阳医院呼吸科确诊的95例PTE患者为PTE组,同期90名健康体检人群为对照组,均采集空腹静脉血,提取基因组DNA.挑选VWF中次要等位基因频率（MAF）＞ 0.05的三个单核苷酸多态性位点：rs216321 （T/C）、rs216325 （G/A）和rs1800378（T/C）,经聚合酶链反应（PCR）-Sanger法测序验证,分析两组各位点等位基因及基因型分布频率的差异,并分析其单倍型与PTE的相关性.结果 VWF基因rs216325 （G/A）、rs1800378 （T/C）位点的等位基因频率在两组间的分布差异有统计学意义（P =0.039、0.006）;rs216325中AA基因型与PTE的发生正相关（r=1.914,P=0.047）,rs1800378中TT基因型与PTE的发生正相关（r=0.282,P=0.008）.TGT单倍型在两组间的分布差异有统计学意义,该单倍型与PTE的发生正相关（r=0.239,P＜0.001）.结论 VWF基因rs216325及rs1800378位点的变异与PTE具有相关性,其中rs216325中AA基因型携带、rs1800378中TT基因型携带及TGT单倍型携带预示较高的PTE发病风险.
- 孙月杰许小毛孙亮张恩毅翟振国方保民肖飞
- 关键词：肺栓塞血管性血友病
