宫云浩
- 作品数：24 被引量：106H指数：6
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 光生物素标记核酸探针检测水貂肠炎病毒的研究被引量：6
- 1991年
- 水貂肠炎病毒(MEV)的检测,目前主要采用病毒分离和血清学方法。为了能直接从样品中检测病毒,我们于1988年秋冬,首次采用了光生物素标记核酸探针打点杂交的方法,结果证明这种方法效果良好,能特异地检出MEV,且灵敏度高,可检测出10pg水平的病毒DNA。
- 沈正达胡永浩吴时友宫云浩孙书华李增光
- 关键词：水貂肠炎核酸探针
- 光生物素标记DNA探针检测牛巴贝斯虫研究初报被引量：1
- 1993年
- 光生物素标记重组质粒DNA(c51A)探针检测牛巴贝斯虫研究的初步试验结果表明,能特异地检出感染牛血中的巴贝斯虫,灵敏度为10pg质粒DNA,相当于约150个感染红细胞的虫体DNA。
- 吴鉴三宫云浩张肖正蒋正军孙淑芳
- 关键词：牛病巴贝斯虫病检疫DNA探针
- PCR方法用于奶牛早期胚胎的性别鉴定被引量：15
- 1995年
- 根据牛 Y 染色体上的特异 DNA 序列合成一对引物,通过 PCR 反应对奶牛早期胚胎进行性别鉴定。预测性别与移植胚胎产犊的实际性别相符率为80%。
- 杨建民朱苏玲武立红蒋耀青谭丽玲宫云浩孙淑芳廖和模严忠全
- 关键词：奶牛胚胎性别鉴定Y染色体
- 腐蹄病致病因子节瘤拟杆菌蛋白酶在大肠杆菌中的高效表达及其启动子分析
- 1991年
- 节瘤拟杆菌是羊腐蹄病的主要致病因子,它能产生细胞外蛋白酶。本文所报道的是其中的一种蛋白酶(40 kDa)基因的亚克隆、在大肠杆菌中的高效表达以及 N-末端多肽序列。用Sphl+Scal 酶切原克隆(插入片段约为15kb),鸟枪法克隆于 pTZ18R 载体,用免疫学方法筛选其亚克隆文库,并用 SDS/聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其表达。然后纯化其亚克隆 DNA 片段,用Sau3AI 消化,克隆于 pKK_(?)启动子选择载体,进行启动子的分离和分析。用分光光度计方法定量测定 CAT(氯霉素乙酰转移酶)活性,从而确定其启动子的强弱。
- 宫云浩E.Moses
- 关键词：节瘤拟杆菌蛋白酶腐蹄病
- 胚胎性别鉴定实用配套技术的初步试验被引量：4
- 1995年
- 胚胎性别鉴定PCR检测试剂盒和经切割取样性别鉴定后的胚胎冷冻保存,是达到胚胎性别鉴定实用化配套技术的主要关键技术。 本试验结果证明:1.在实验室将Y-DNA特异片段引物、dNTP和Tag酶等反应物,按比例配合成试剂盒后,进行冷冻保存的试剂盒,可取得与常规PCR检测操作技术方法的相同效果和准确率;2.采用快速冷冻的方法,冷冻保存切割取样性别鉴定后的胚胎,可取得57.1％(4/7)的移植成功率。
- 刘云海朱化彬罗应荣孙淑芳宫云浩吴时友杨化玉迟吉义
- 关键词：胚胎性别鉴定实用配套技术胚胎冷冻保存胜利油田试验结果PCR技术
- 用PCR鉴定性别的绵羊胚胎移植试验
- 1992年
- 采用deletion-enrichment的方法建立富含绵羊Y染色体DNA文库,筛选出特异克隆,经序列分析,合成一对引物,用PCR扩增Y染色体上特异片段约130bp。在实验室,用初步建立的PCR鉴定胚胎性别技术,对已知性别的6只公绵羊和5只母绵羊的血液样品进行性别鉴定,准确率为100％。在内蒙古牧区生产现场,用研究成功的简易胚胎取样技术和胚胎取样过程中的防污染措施,从绵羊胚胎切取一定数量的细胞经PCR性别鉴定后移植于受体母羊,移植成功18只受体母羊,共怀25只羔羊,有20只羔羊的实际性别与胚胎性别鉴定结果一致,准确率为80％(20/25),其中,公羔与鉴定为雄性胚胎的符合率为87.5％(7/8);母羔与鉴定为雌性胚胎的符合率为76.5％(13/17)。
- 宫云浩吴时友蒋正军罗应荣刘云海朱成宽朱志庆朱化彬白俊品赵振海武林源
- 关键词：胚胎性别鉴定PCR胚胎移植
- 应用RT-PCR方法快速检测水泡性口炎病毒被引量：4
- 2004年
- 针对水泡性口炎病毒 (VSV)的两种血清型设计了2对引物 ,建立RT-PCR方法 ,用于检测VSV。VSV接种细胞出现明显的细胞病变 ,经RT-PCR检测为阳性 ,而检测口蹄疫、猪水泡病均为阴性 ,说明引物具有较好的特异性。
- 王海霞郑增忍龚振华张彦明孙淑芳李葳李玉清蒋正军郭福生宫云浩
- 关键词：RT-PCR方法水泡性口炎病毒
- 用光生物素核酸探针检测牛传染性鼻气管炎病毒被引量：3
- 1990年
- 用光生物素标记牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitisvirus,IBRV)9.6kb DNA片段做探针,可检测出10pg的IBRV DNA、1个TCID50的病毒和1～10个TCID50的实验感染牛精液。用核酸探针检测IBRV与分离病毒的符合率为84.4％。若将采集的样品在牛肾细胞上增毒一次,再抽提培养物的核酸,用核酸探针检测,则敏感性和符合率大为提高。
- 吴时友封启民蒋正军孙书华宫云浩李昌琳张瑞珍
- 关键词：鼻气管炎病毒
- 应用聚合酶链式反应鉴定奶牛胚胎性别和移植试验被引量：18
- 1994年
- 应用聚合酶链式反应鉴定奶牛胚胎性别和移植试验罗应荣，刘云海，朱化彬，朱志庆，朱成宽（中国农业科学院畜牧研究所北京）宫云浩，吴时友，蒋正军，孙淑芳，孙淑华（农业部动物检疫所青岛）前言胚胎性别鉴定是人为控制家畜后代性别的重要途径之一，特别是奶牛业，多生母...
- 罗应荣刘云海朱化彬朱志庆朱成宽宫云浩吴时友蒋正军孙淑芳孙淑华
- 关键词：聚合酶链反应奶牛胚胎性别
- 用RT—PCR技术检测蓝舌病病毒的研究被引量：1
- 1993年
- 蓝舌病病毒非结构蛋白NS_1基因在各型中具有高同源性,可作为群特异性检测的依据。采用NS_1基因中210bp的区段作为PCR扩增模板,经逆转录酶合成第一股cDNA后,再进行PCR扩增。结果对BTV可扩增出特异片段,而鹿流行性出血病病毒和茨城病病毒则不出现扩增。
- 普淑英宫云浩杨承谕蒋正军马洪超李晓成陈兴扶孙淑芳
- 关键词：病毒RT-PCR检疫
