周园
- 作品数：3 被引量：13H指数：1
- 供职机构：中国科学院生物物理研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 酶促反应的“诱导契合-锁钥”模式被引量：12
- 2011年
- 在酶学理论中,阐释酶识别底物专一性的代表性学说有"锁钥"和"诱导契合"模型等.作者此前研究了蚯蚓蛋白酶Ⅰ(Eisenia fetida proteaseⅠ,EfP-Ⅰ)的底物专一性,提出了"诱导契合-锁钥"反应模式.然而,采用EfP-Ⅰ建立的模式是否具有普遍的酶学意义需要进一步论证.以蚯蚓蛋白酶Ⅱ(Eisenia fetida proteaseⅡ,EfP-Ⅱ)、枯草杆菌蛋白酶(subtilisin,Sub)以及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)为材料,分别研究了底物反应后酶与其他底物的相互作用.结果显示,经过凝血酶底物chromozym TH(CTH)反应后,蚯蚓蛋白酶Ⅱ和枯草杆菌蛋白酶与尿激酶底物(chromozym U,CU)的反应活性显著降低(P<0.05),表现出符合"诱导契合-锁钥"反应的模式.蚯蚓蛋白酶Ⅱ和枯草杆菌蛋白酶先与CU反应后,却仍能与CTH反应,但后续不能与CU发生反应,仍然表现为"诱导契合-锁钥"模式.另外,丙酮酸反应后的LDH,对乳酸的反应活力显著降低(P<0.05),而乳酸反应后的LDH对丙酮酸的活性却无显著变化.这可能是丙酮酸诱导的LDH构象具有相对的刚性,而乳酸诱导的酶构象具有相对柔性所致.
- 张子剑潘荣周园赫荣乔
- 关键词：枯草杆菌蛋白酶乳酸脱氢酶底物专一性
- 蚓激酶同工酶降解乙型肝炎抗原并保护肝功能被引量：1
- 2022年
- 目的蚓激酶同工酶(LKIs)作为肠溶胶囊的有效成分,用于治疗血栓性疾病已有30多年历史。近年来,LKIs在其他危重疾病中的研究时有报道。本文关注LKIs在乙型肝炎方面的作用。方法乙型肝炎表面抗原(HBs Ag)、核心抗原(HBcAg)和e抗原(HBeAg)分别与不同浓度LKIs孵育,观察这些蛋白质的降解和估计肽链的切割位点。Hep G2.2.15细胞与LKIs孵育,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)和蛋白质印迹(Western blotting)检测细胞分泌的HBsAg和HbeAg。LKIs灌胃Balb/c小鼠30天,采用ELISA和Western blotting检测其血清HBsAg和HBeAg,免疫组化染色检测肝组织中的HBcAg。采用苏木精-伊红染色分析乙肝病毒转基因小鼠肝组织的损害,并通过ELISA定量分析血清谷草转氨酶(GOT)和谷丙转氨酶(GPT)。腹腔注射后,取大鼠血清和肝组织,测定其中的LKIs含量,从而观察LKIs的吸收。采用LKIs给龙岩麻鸭灌胃30天,通过PCR检测其血清HBV DNA。结果蚓激酶肠溶胶囊的有效成分是含有6种LKIs的复方蛋白酶药物,可以降解HBV编码的蛋白质。LKIs降解HBsAg的位点为K141/P142及R160/F161;HBc Ag为R142/E143;HBeAg为R122/E123。LKIs可显著抑制Hep G2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg。LKIs灌胃,HBV转基因小鼠血清HBsAg和HBeAg水平及肝组织的HBcAg水平均降低,提示病毒的组装和释放可能受到了抑制。在LKIs处理的转基因小鼠中,血清GPT和GOT水平降低,肝组织溶解数量减少,表明LKIs对小鼠肝细胞具有保护作用。LKIs灌胃龙岩麻鸭,血清中DHBV DNA水平明显下降,停药后出现反弹。结论LKIs通过降解HBs、HBc和HBe蛋白,可能干扰HBV的装配和释放,减少病毒在肝细胞之间的传递,从而对肝细胞起到保护作用。
- 周园牟丽娴范士超王秀梅曹潇王学清张奉学赵静魏艳赫荣乔
- 关键词：HBEAGHBCAGHBSAG同工酶
- 具有HBeAg降解酶活性的蚯蚓蛋白及其应用
- 本发明提供了一种具有HBeAg降解酶活性的蚯蚓蛋白，以及含有其的药物组合物。本发明还提供了所述蚯蚓蛋白在制备治疗HBeAg相关性疾病的药物中的应用，所述HBeAg相关性疾病包括乙型肝炎，乙型肝炎引起的肝硬化，以及e抗原阳...
- 赫荣乔周园
- 文献传递
