严涛 作品数:9 被引量:8 H指数:2 供职机构: 军事医学科学院放射与辐射医学研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
T4核酸内切酶V的分离纯化 被引量:5 1990年 <正> T_4核酸内切酶V[endodeoxyribonuclease(Pyrimidine dimer)EC 3.1.25.1,简称Endo V]是由噬菌体T_4感染宿主E.coli后产生的一种修复酶。它能特异识别紫外线(UV)辐射在DNA引起的损伤产物环丁烷嘧啶二聚体(PD),在组成PD的两个嘧啶核苷酸之间切割磷酸二酯键,造成单链缺刻,从而启动E.coli体内的切除修复途径~[1]。Endo 严涛 孙丽亚 魏康 夏寿萱关键词:T4 纯化 用EndoV和碱电泳法检测哺乳动物细胞嘧啶二聚体的切除修复 被引量:1 1993年 紫外线(UV)辐射是自然环境中重要的DNA致伤因子。UV辐射在DNA造成的最主要一类损伤产物是环丁烷嘧啶二聚体(pyrim-idine dimer,PD),它是由DNA中一条多核着酸链上两相邻嘧啶碱基各自的C5和C6共价连接形成的环丁烷结构。哺乳动物细胞主要通过切除修复途径移除PD,恢复DNA的正常结构。一种从噬菌体T4感染的E.coli中提取的T4核酸内切酶V(EndoV)能特异识别PD,并在该损伤位点切断磷酸二醋键,造成单链断裂。本文即以EndoV为探针,以其敏感位点(endonuclease-sensitive-site,ESS) 严涛 孙丽亚 崔立斌 魏康关键词:哺乳动物 细胞 切除 DMSO诱导后HL-60细胞c-myc基因修复水平的改变 1994年 近年来DNA修复研究领域的重要进展之一是发现了基因组内DNA修复的不均一性.已经报道的实验证据包括紫外线(ultraviolet,UV)照射后中国仓鼠卵巢(chinese hamsterovary,CHO)细胞和人细胞中活性转录的二氢叶酸还原酶(dihydrofolate reductase,DHFR)基因上嘧啶二聚体(pyrimidine dimer,PD)的修复速率快于非转录片段。 严涛 崔立斌 孙丽亚 魏康 方允中关键词:C-MYC基因 HL-60细胞 肿瘤细胞对紫外线辐射损伤修复的研究 1990年 我们选用人宫颈癌细胞株HeLa S3 和小鼠乳癌细胞株SR-1,测定了肿瘤细胞对UV辐射损伤的修复特征。 给予细胞10Jm-2 UV(254nm)照射,照后分别经4、8、24h保温修复。酚法提取细胞DNA。每份样品分两管,各含DNA 3μg,一管加10μlT4核酸内切酶V(endo V,该酶能特异识别和切割PD,造成单链断裂)。 严涛 孙丽亚 魏康关键词:紫外线辐射 DNA 电泳图谱 核酸内切酶 切除修复 碱性凝胶电泳定量测定非标记DNA的单链断裂 1991年 DNA单链断裂(Single Strand Breaks,SSB)的测定是研究DNA损伤与修复的重要检测方法之一。用碱性琼脂糖凝胶电泳测定SSB的最早报告见于1979年,但直到1986年才由Freeman推导出相应的定量计算公式,此后该方法被广泛应用。该法除不需同位素标记和操作简单快捷外。 严涛 吴加金 孙丽亚 魏康关键词:DNA损伤 T_4DNA的简易提取法 1991年 在 DNA 研究中,分子量较大的标准物比较缺乏,噬菌体 T_4的 DNA 为长度166kb 的双链线状分子,是一个很有实用价值的大分子量 DNA 标准物。提取 T_4DNA 的关键步骤在于分离 T_4颗粒,其经典方法主要有两种:①两相分离法(硫酸葡聚糖钠盐/聚乙二醇);②超速离心法。两种方法均耗时较长且价格昂贵。本文用 DEAE 纤维素处理代替上述两法,操作快速简便降低了成本,并获得较好结果。 严涛 孙丽亚 周平坤关键词:T4 DNA 噬菌体T4 UV损伤的探针—T_4核酸内切酶V 1989年 紫外线(UV)辐射是自然环境中重要的DNA致伤因子,UV在DNA造成的最多且最重要的一类损伤产物是环丁烷嘧啶二聚体(5,6—Cyclobutyl dipyrimidines或Pyri-midine dimer,PD)(图1)。 严涛 魏康关键词:紫外线损伤 探针 UV辐射所致HL-60细胞DNA不均一修复的研究 1994年 在特定基因水平检测了UV照射后HL-60细胞的DNA修复。结果显示活性转录的c-myc基因的修复水平明显高于非活性转录的β珠蛋白基因和全基因组。而进一步应用链专一性RNA探针检测,发现c-myc基因中的转录链和非转录链的修复效率没有明显差异。上述结果表明,HL-60细胞能够对活跃表达基因的损伤进行选择性高效修复,但不能对活跃表达基因中的转录链进行进一步的选择性修复。 严涛 崔立斌 孙丽亚 魏康 方允中关键词:HL60细胞 DNA 紫外线 DNA修复不均一性的研究现状与展望 被引量:2 1991年 我们的生活环境中存在诸多DNA致伤因子,如电离辐射、紫外线、多种化学物质等。细胞的内源化学反应产物及复制或重组过程的错误亦可导致DNA的自发损伤。最常见的DNA损伤类型包括链断裂、链内及链间交联、DNA-蛋白质交联、嘧啶二聚体、碱基改变、碱基丢失、碱基修饰等。 严涛 魏康关键词:脱氧核糖核酸 不均一性