苏州大学医学部免疫学系
- 作品数：59 被引量：119H指数：6
- 相关作者：於葛华顾宗江朱华亭夏永洁陈昌友更多>>
- 相关机构：中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所包头医学院护理学院南京医科大学附属苏州医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- D-半乳糖致衰老小鼠胸腺T细胞重要膜型分子的改变及其意义被引量：4
- 2012年
- 目的:建立D-半乳糖亚急性衰老小鼠模型,并探讨其胸腺T细胞重要膜型分子的改变及其意义。方法:8周龄雌性昆明种小鼠,12.5 mL/(kg.d)颈后部皮下注射100 g/LD-半乳糖溶液,连续注射42 d;逐日观察小鼠的生存状态和行为变化,并通过对小鼠血清中SOD活力和MDA含量的检测,对此衰老模型进行生物学鉴定;在D-半乳糖亚急性衰老小鼠模型成功建立的基础上,采用免疫荧光标记技术和流式细胞仪检测技术对胸腺T细胞重要膜型分子进行检测分析。结果:造模过程中小鼠逐渐表现出脊椎隆起,体形消瘦,皮肤松弛等衰老体征;血清中SOD活力下降[模型组:(2.16±0.43)mKat/L,对照组:(5.52±1.55)mKat/L,P<0.01],MDA含量上升[模型组:(4.14±0.82)μmol/L,对照组:(1.24±0.21)μmol/L,P<0.01];小鼠胸腺初始T细胞相关分子CD45RA表达下降[模型组:(2.16±0.47)%,对照组:(2.98±0.53)%,P<0.05];小鼠胸腺T细胞活化相关分子CD28[模型组:(91.52±1.68)%,对照组:(95.12±1.21)%,P<0.05]和CD25[模型组:(7.42±0.75)%,对照组:(8.84±0.58)%,P<0.05]表达下降;小鼠胸腺T细胞活化负性调控分子PD-1表达上升[模型组:(21.25±1.95)%,对照组:(12.92±3.28)%,P<0.01];小鼠胸腺记忆T细胞相关分子CD196表达上升,但与对照组相比没有显著性差异[模型组:(21.13±1.44)%,对照组:(19.73±2.02)%]。结论:成功建立了D-半乳糖亚急性衰老小鼠模型,机体衰老时胸腺中初始和活化T细胞减少,记忆T细胞有增加的趋势。
- 张彦军朱华亭黄赛男薛秀青邱玉华
- 关键词：D-半乳糖亚急性衰老免疫活化免疫记忆
- D-半乳糖致衰老小鼠模型脾脏B细胞的改变被引量：4
- 2012年
- 目的:运用D-半乳糖建立亚急性衰老小鼠模型,在对其进行生物学鉴定的基础上,分析脾脏B细胞表面重要膜型分子的改变及其意义。方法:健康昆明鼠,颈后部皮下注射100 g/L D-半乳糖溶液,0.25 mL/20 g,1次/d,连续42 d。逐日观察动物的生存状态和生物学行为并定期称量其体质量动态变化。小鼠衰老模型的生物学鉴定采用血清中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)浓度的测定;脾脏细胞表面与活化、记忆相关的重要膜型分子的分析采用免疫荧光和流式细胞术;血清中细胞因子IL-4的分析采用ELISA法。结果:成功建立亚急性衰老小鼠模型。免疫荧光和流式细胞术分析模型组小鼠脾脏细胞上CD20+为56.8%,CD40+为43.6%,CD20+CD45RA+B为14.04%,CD40+CD45RA+B为35.4%,CD20+CD86+B为2.25%。CD40+CD86+B为4.38%,CD20+CD196+B为10.68%,CD40+CD196+B为10.98%。ELISA法检测结果显示模型组小鼠血清中IL-4的平均水平为7.93 ng/L。经统计学分析模型组小鼠脾脏细胞CD20、CD40、CD45RA、CD86的表达及血清中IL-4的水平均低于对照组(P<0.05),CD196高于对照组(P<0.01)。结论:在机体衰老过程中,脾脏B细胞表面与活化、记忆相关的重要膜型分子的表达发生改变,活化细胞减少,记忆细胞增多,血清中IL-4的表达下降,导致免疫系统功能紊乱。
- 黄赛男朱华亭张彦军薛秀青邱玉华
- 关键词：D-半乳糖衰老脾脏细胞
- 类风湿性关节炎患者外周血T淋巴细胞亚群及其PD-1表达的意临床义
- 段厚全叶小英葛彦居颂光
- 再生多孔丝素膜创面局部运用激活不同部位T细胞的作用被引量：1
- 2011年
- 背景:丝素蛋白是从蚕丝中提取的天然高分子纤维蛋白,其具有良好的理化特性及生物相容性。而目前国内外有关再生多孔丝素膜植入体内后对T淋巴细胞的激活作用研究未见报道。目的:观察再生多孔丝素膜植入大鼠局部创面后对外周血单个核细胞、脾脏及胸腺中T淋巴细胞的激活作用。方法:切除SD大鼠背部皮肤建立2cm×2cm创面,随机分为2组:实验组覆盖经预处理的再生多孔丝素膜,将已切除皮肤的表皮盖在丝素膜上进行缝合,对照组仅覆盖自身表皮层。于术后第3,14,28,56,90天观察创面愈合及丝素膜的残留情况,采用双色免疫荧光及流式细胞术分析大鼠外周血、脾脏及胸腺中CD3+CD25+/CD3+T细胞百分率。结果与结论:植入早期,两组均可见局部、轻微的炎症细胞浸润,主要为淋巴细胞;至28d后,炎症细胞逐渐减少,并且在整个动态观察过程中,两组结果一致。实验组外周血中活化T细胞在14d之前呈一过性升高,随后开始下降,至28d以后,活化T细胞水平趋于稳定,与对照组无明显差异(P>0.05);脾脏与胸腺T细胞均有少量活化,随后即开始下降并趋于稳定,胸腺中CD3+CD25+/CD3+T细胞的阳性率较脾脏微高,与对照组均无明显差异(P>0.05)。说明再生多孔丝素膜对T淋巴细胞的激发作用较小,引发机体细胞免疫应答的能力较弱。
- 朱晓燕李永林谢芳张彦军黄赛男李明忠邱玉华
- 关键词：T淋巴细胞免疫原性
- RSP01/LGR5途径对宫颈癌细胞的促增殖作用及其临床意义
- 背景：宫颈癌是世界上女性最常见的三大恶性肿瘤之一，发展中国家女性第二大死亡原因.如何对宫颈癌进行有效诊断和寻找新的治疗靶点值得深入探讨.LGR5是近年新发现的肿瘤干细胞标志物，与肿瘤的发生发展关系密切.本文通过体内外实验...
- 葛彦邓云曹莎莎徐永芳居颂光张学光
- 关键词：宫颈癌LGR5SIHA
- 抗人CD80单链抗体的构建、表达及与抗原结合的特性分析被引量：5
- 2011年
- 目的:构建及表达抗人CD80单链抗体(ScFv),并初步研究其生物学功能。方法:采用RT-PCR法从分泌鼠抗人CD80mAb的杂交瘤细胞株(4E5)中克隆VH和VL基因。用重叠延伸拼接PCR方法构建具有前导肽的L-VH-Linker-VL单链抗体基因,并亚克隆至pIRES2-EGFP表达载体,脂质体法转染中华仓鼠卵巢细胞(CHO),G418加压筛选。纯化抗CD80-ScFv,并分析其对膜型CD80的识别。竞争抑制实验分析抗CD80-ScFv与相应抗原的结合能力。MTT法体外分析抗CD80-ScFv对CD80介导的共刺激信号的阻断作用。结果:构建的抗CD80-ScFv基因全长为828 bp,经测序含有信号肽和连接肽。实验获得稳定表达细胞株SA-Ⅱ,其培养上清与L929-CD80细胞的阳性结合率达98%以上。抗体纯化后产率约为15.12 mg/L,其能够识别Raji和Daudi细胞天然表达的CD80分子,结合率分别为96.6%和95.0%。抗CD80-ScFv对鼠源亲本抗体4E5与抗原结合的竞争抑制率达98.67%,并能阻断CD80介导的共刺激信号转导,抑制PBMC的增殖,增殖率下降43.48%。结论:成功建立了抗CD80-ScFv CHO细胞的表达株(命名为SA-Ⅱ),该抗体能够特异识别细胞表面膜型CD80分子并介导相应的生物学功能。
- 陈昌友郭静雅陈永井陈明心孙杰张彦军黄赛男朱华亭邱玉华
- 关键词：CD80单链抗体真核表达
- 慢性移植物抗宿主病狼疮样肾炎小鼠模型的建立及免疫病理学鉴定被引量：3
- 2014年
- 对慢性移植物抗宿主病狼疮样肾炎小鼠模型进行免疫学、血清学及肾脏病理损伤鉴定。以考察该模型作为系统性红斑狼疮(SLE)疾病模型的可靠性。将亲代雌性BALB/c小鼠脾脏细胞悬液经尾静脉注射(C57BL/J6×BALB/c)F1代小鼠,每隔3d注射1次,共4次。建模第7d,采用免疫荧光及流式细胞仪分析小鼠脾脏中抗原提呈细胞(APC)及抗体形成细胞的百分率。每隔2周检测血清中anti-dsDNA抗体及ANA;每隔4周检测尿蛋白含量的动态变化;建模12周终止实验,取肾脏组织作HE染色观察病理改变,直接免疫荧光法检测免疫复合物(IC)沉积以及透射电镜观察肾小球超微结构变化。流式细胞术的分析结果显示,造模后7d脾脏中膜型CD11b+、CD11c+及Gr1+细胞的百分率较对照组明显升高(P<0.05),同时抗体形成细胞B220+表面CD21、CD23、CD80及CD86分子的表达均上调(P<0.05);建模2周时,血清anti-dsDNA抗体出现阳性,4周时ANA出现阳性;12周时80%的小鼠存在蛋白尿,蛋白含量++^++++;肾小球体积增大并有大量炎性细胞浸润;肾脏IC沉积;透射电镜下可见肾基底膜节段性增厚,脏层上皮细胞和基底膜之间存在大量的电子致密物。慢性移植物抗宿主病小鼠狼疮样肾炎模型具有人类SLE相似的免疫细胞异常活化及肾脏病理损伤的特征性表现,用于相关研究具有可靠性。
- 韩莲花蔡磊朱莹朱华亭夏永洁邱玉华
- 关键词：慢性移植物抗宿主病狼疮样肾炎动物模型
- B7-2基因工程抗体的制备及体内外抗B淋巴瘤作用研究被引量：5
- 2010年
- 构建B7-2人-鼠嵌合抗体基因表达质粒pIRES/ch3C8,经脂质体法转染真核表达细胞株CHO制备B7-2人-鼠嵌合抗体(命名为ch3C8)。该抗体能够识别人恶性B淋巴瘤细胞株Raji表面的B7-2分子并诱导其凋亡。ch3C8结构中来源于人Ig的Fc段可介导高效的ADCC及CDC效应。经ch3C8结合的Raji细胞接种于BALB/c裸鼠后的致瘤性消失。该抗体在B7-2相关肿瘤的生物治疗中具有潜在的应用价值。
- 刘玉华孙杰陈明心郭静雅胡玲玲王艳茹陈昌友高增燕朱晓燕邱玉华
- 关键词：B7-2嵌合抗体淋巴瘤ADCC效应
- 小鼠B7-1基因RNAi慢病毒载体的构建及其沉默效应研究
- 2016年
- 目的：构建介导小鼠B7-1基因RNAi的慢病毒载体,研究其对L929细胞表面B7-1分子表达的沉默效应。方法：从小鼠B7-1基因编码区选择3段RNA干扰靶序列,制备转录双发夹RNA的前体DNA,并克隆至慢病毒穿梭质粒,构建B7-1的RNAi慢病毒穿梭载体,测序鉴定。将重组质粒及辅助质粒共转染293T细胞产生慢病毒,经超速离心获得浓缩慢病毒颗粒。通过测定293T细胞GFP表达水平确定病毒滴度,流式细胞术检测感染效率以及对细胞表面B7-1的干扰效率。病毒感染细胞经嘌呤霉素筛选及克隆培养获得小鼠B7-1基因RNAi慢病毒稳定感染的L929细胞,流式细胞术分析细胞中GFP及B7-1分子表达的状况;将感染细胞与分离的小鼠脾脏T细胞混合培养,分析B7-1稳定沉默细胞刺激T细胞增殖的能力。结果：成功了构建小鼠B7-1基因RNA干扰的重组慢病毒载体;获得了滴度达（3~5）×10~8TU/ml的浓缩重组慢病毒,重组慢病毒可有效感染L929细胞介导GFP表达以及沉默其表面的B7-1。经筛选获得慢病毒稳定感染的L929细胞,该细胞表面B7-1分子表达受到抑制,刺激T细胞增殖的能力显著下降（P〈0.05）。结论：构建了能够高效感染及沉默小鼠B7-1分子的RNAi慢病毒载体,该载体可稳定沉默L929细胞表面B7-1分子表达,抑制B7-1/CD28信号诱导的T细胞增殖效应。
- 孔永沈立军王婧朱莹蔡磊邱玉华黄莉
- 关键词：B7-1RNAI慢病毒共刺激信号L929
- ^(131)I标记抗CD80单克隆抗体在荷瘤裸鼠体内的放射免疫显像被引量：1
- 2014年
- 目的探讨放射性核素131I标记抗CD80单克隆抗体及标记物在荷淋巴瘤裸鼠体内的放射免疫显像。方法采用Iodogen法进行抗CD80单克隆抗体4E5的131I标记,并对标记抗体的免疫活性及稳定性进行分析。经荷淋巴瘤裸鼠模型尾静脉注入剂量为7.4 MBq/0.2 ml的131I-4E5抗体,分别于注药后24 h、48 h和72 h进行SPECT平面显像,采用感兴趣区(ROI)技术进行半定量分析,计算肿瘤与非瘤组织的放射性计数比值(T/NT)。显像结束后处死荷瘤裸鼠,分别取肿瘤、血等14种脏器或组织称重并测量其放射性计数,计算各脏器或组织的每克组织百分注射剂量率(%ID/g)。结果131I标记单克隆抗体4E5的标记率为(78.3±2.4)%,放射化学纯度为(95.7±1.8)%;131I-4E5抗体与Raji细胞的最大结合率为(36.1±2.6)%,131I-4E5抗体加入到血清中放置3天后放化纯度仍>90%;荷瘤裸鼠注入131I-4E5抗体后,随时间的延长,肿瘤部位放射性浓聚逐渐增加,在72 h时肿瘤显影最为清晰,T/NT值此时最大达到3.2。结论131I-4E5抗体在荷淋巴瘤裸鼠体内具有靶向定位能力,可获得良好的放射免疫显像图像,为进一步利用131I-4E5进行淋巴瘤CD80为靶点的放射免疫治疗奠定了基础。
- 翟士军邱玉华万卫星郁春景陈永井吴玉玉齐晓薇徐巧玲
- 关键词：CD80单克隆抗体放射免疫显像
